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Dnm t3b cDNA及其在小鼠胚胎组织中选择剪接异构体的克隆
被引量：
1
1
作者
尹斌
陈雨亭
+5 位作者
朱敏
罗一菁
朱宁
徐世才
吴冠芸
沈岩
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
1999年第6期431-438,共8页
目的 克隆与小鼠胚胎发育相关的新的全长cDNA。方法 从小鼠胚胎cDNA文库中筛选出一个新的EST,以8～9d龄小鼠胚胎组织mRNA为模板进行RACE(rapidamplificationofcDNAends),结合PCR筛选cDNA文库,获得其全长cDNA序列后进行序列同源检索、...
目的 克隆与小鼠胚胎发育相关的新的全长cDNA。方法 从小鼠胚胎cDNA文库中筛选出一个新的EST,以8～9d龄小鼠胚胎组织mRNA为模板进行RACE(rapidamplificationofcDNAends),结合PCR筛选cDNA文库,获得其全长cDNA序列后进行序列同源检索、结构分析和功能预测。根据整合后的cDNA两端序列设计引物进行RT-PCR,克隆PCR产物,并对产物进行全序列测定,验证整合序列的客观性。结果 (1)克隆的序列为小鼠DNAC5胞嘧啶特异的重新甲基转移酶(denovoDNAcytosine5′-specificmethyltransferase,Dnmt)基因cDNA,发现该基因比已报道的Dnmt3bcDNA序列在5′方向延伸了152bp,其起始密码子上游存在一个新的选择剪接区域。(3)从小鼠胚胎组织中克隆出8种Dnmt3bcDNA选择剪接异构体,并均已获得Genbank序列接收号。结论 获得了Dnmt3bcDNA的4kb全长序列,发现Dnmt3b基因上游存在新的5′选择剪接序列,可能通过选择剪接形成上游终止密码子的切换;Dnmt3b在小鼠胚胎发育过程中存在着复杂的选择剪接表达。
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关键词
dna
胚胎组织
C
dna
克隆
选择剪接
异构体
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职称材料
坏变细胞的DNA对HpaⅡ限制性片段分析法测量DNA甲基化水平的干扰作用
被引量：
1
2
作者
潘孔寒
施正政
+1 位作者
余应年
陈星若
《浙江医科大学学报》
CSCD
1992年第2期49-53,共5页
用~3H-TdR在不同时期标记细胞DNA,以区别在HpaⅡ限制性片段放射活性分析中的DNA系来自增殖中的或坏变中的细胞.实验证明MNNG处理后存活的细胞中并无DNA甲基化水平的变化.而经MNNG或Hanks液处理的脱落细胞DNA,在HpaⅡ水解前后其DNA片段的...
用~3H-TdR在不同时期标记细胞DNA,以区别在HpaⅡ限制性片段放射活性分析中的DNA系来自增殖中的或坏变中的细胞.实验证明MNNG处理后存活的细胞中并无DNA甲基化水平的变化.而经MNNG或Hanks液处理的脱落细胞DNA,在HpaⅡ水解前后其DNA片段的L_w皆明显降低,并可干扰对新复制DNA的HpaⅡ识别位点的分析.因此作者认为,在缺乏严格设计以除外上述因素的体系中,作出关于细胞DNA甲基化状态变化的结论是不可信的.
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关键词
细胞
脱氢核糖核酸
甲基化
致癌物
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职称材料
HL-60细胞降钙素基因高甲基化的发生机制
3
作者
赵明明
白志勇
+2 位作者
白晓川
徐国宾
武淑兰
《北京医科大学学报》
CSCD
2000年第6期530-532,共3页
目的 :探讨HL 6 0细胞降钙素基因高甲基化的发生机制。方法 :采用HL 6 0细胞 ,以正常骨髓单个核细胞为对照 ,应用甲基化敏感的限制性内切酶消化 ,结合设有内外参照的PCR技术 ,检测CT基因甲基化状态 ;应用同位素微量分析法检测DNA 胞嘧...
目的 :探讨HL 6 0细胞降钙素基因高甲基化的发生机制。方法 :采用HL 6 0细胞 ,以正常骨髓单个核细胞为对照 ,应用甲基化敏感的限制性内切酶消化 ,结合设有内外参照的PCR技术 ,检测CT基因甲基化状态 ;应用同位素微量分析法检测DNA 胞嘧啶 甲基转移酶 (DNA cytosin methyltransferase,MTase)活性 ;应用RT PCR技术检测MTase基因表达水平。结果 :HL 6 0细胞经甲基化敏感的内切酶HpaⅡ消化后仍可扩增出清晰的CT基因特异条带 ,提示CT基因 5′端呈高甲基化状态 ;HL 6 0细胞MTase活性平均测定值为 5 39.9Bq ,是正常骨髓单个核细胞 (平均 2 1 8Bq)的 2 9.8倍 ;MTase基因的mRNA表达水平以MTase与β actin内参照RT PCR产物的比值表示 ,HL 6 0细胞 (0 .72 )为正常对照 (0 .0 2 )的 36倍。结论 :HL 6 0细胞CT基因呈高甲基化状态 。
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关键词
HL-60细胞
隆钙素
甲基化
白血病
发生机制
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职称材料
题名
Dnm t3b cDNA及其在小鼠胚胎组织中选择剪接异构体的克隆
被引量：
1
1
作者
尹斌
陈雨亭
朱敏
罗一菁
朱宁
徐世才
吴冠芸
沈岩
机构
中国医学科学院
出处
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
1999年第6期431-438,共8页
基金
国家科委攀登计划项目
"863"基金 !(863 - 10 2 - 10 - 0 3 - 0 5 )
+1 种基金
自然科学基金! (3 962 5 0 0 7)
国家重点基础研究发展规划项
文摘
目的 克隆与小鼠胚胎发育相关的新的全长cDNA。方法 从小鼠胚胎cDNA文库中筛选出一个新的EST,以8～9d龄小鼠胚胎组织mRNA为模板进行RACE(rapidamplificationofcDNAends),结合PCR筛选cDNA文库,获得其全长cDNA序列后进行序列同源检索、结构分析和功能预测。根据整合后的cDNA两端序列设计引物进行RT-PCR,克隆PCR产物,并对产物进行全序列测定,验证整合序列的客观性。结果 (1)克隆的序列为小鼠DNAC5胞嘧啶特异的重新甲基转移酶(denovoDNAcytosine5′-specificmethyltransferase,Dnmt)基因cDNA,发现该基因比已报道的Dnmt3bcDNA序列在5′方向延伸了152bp,其起始密码子上游存在一个新的选择剪接区域。(3)从小鼠胚胎组织中克隆出8种Dnmt3bcDNA选择剪接异构体,并均已获得Genbank序列接收号。结论 获得了Dnmt3bcDNA的4kb全长序列,发现Dnmt3b基因上游存在新的5′选择剪接序列,可能通过选择剪接形成上游终止密码子的切换;Dnmt3b在小鼠胚胎发育过程中存在着复杂的选择剪接表达。
关键词
dna
胚胎组织
C
dna
克隆
选择剪接
异构体
Keywords
de novo
dna
cytosine
5
′ specific
methyltransferase
c
dna
cloning
alternative splicing
分类号
Q523.1 [生物学—生物化学]
Q492 [生物学—生理学]
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职称材料
题名
坏变细胞的DNA对HpaⅡ限制性片段分析法测量DNA甲基化水平的干扰作用
被引量：
1
2
作者
潘孔寒
施正政
余应年
陈星若
机构
浙江医科大学病理生理学教研室
出处
《浙江医科大学学报》
CSCD
1992年第2期49-53,共5页
基金
国家自然科学基金
文摘
用~3H-TdR在不同时期标记细胞DNA,以区别在HpaⅡ限制性片段放射活性分析中的DNA系来自增殖中的或坏变中的细胞.实验证明MNNG处理后存活的细胞中并无DNA甲基化水平的变化.而经MNNG或Hanks液处理的脱落细胞DNA,在HpaⅡ水解前后其DNA片段的L_w皆明显降低,并可干扰对新复制DNA的HpaⅡ识别位点的分析.因此作者认为,在缺乏严格设计以除外上述因素的体系中,作出关于细胞DNA甲基化状态变化的结论是不可信的.
关键词
细胞
脱氢核糖核酸
甲基化
致癌物
Keywords
Methylation
dna
(
cytosine
-
5
-)-
methyltransferase
Carcinogens
dna
restriction enzymes
Restriction fragment of
dna
分类号
R730.21 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
HL-60细胞降钙素基因高甲基化的发生机制
3
作者
赵明明
白志勇
白晓川
徐国宾
武淑兰
机构
北京医科大学第一医院血液内科
宁夏医学院附属医院
北京医科大学第一医院检验科
出处
《北京医科大学学报》
CSCD
2000年第6期530-532,共3页
基金
卫生部科研基金! (94 1 2 5 0 )资助课题
文摘
目的 :探讨HL 6 0细胞降钙素基因高甲基化的发生机制。方法 :采用HL 6 0细胞 ,以正常骨髓单个核细胞为对照 ,应用甲基化敏感的限制性内切酶消化 ,结合设有内外参照的PCR技术 ,检测CT基因甲基化状态 ;应用同位素微量分析法检测DNA 胞嘧啶 甲基转移酶 (DNA cytosin methyltransferase,MTase)活性 ;应用RT PCR技术检测MTase基因表达水平。结果 :HL 6 0细胞经甲基化敏感的内切酶HpaⅡ消化后仍可扩增出清晰的CT基因特异条带 ,提示CT基因 5′端呈高甲基化状态 ;HL 6 0细胞MTase活性平均测定值为 5 39.9Bq ,是正常骨髓单个核细胞 (平均 2 1 8Bq)的 2 9.8倍 ;MTase基因的mRNA表达水平以MTase与β actin内参照RT PCR产物的比值表示 ,HL 6 0细胞 (0 .72 )为正常对照 (0 .0 2 )的 36倍。结论 :HL 6 0细胞CT基因呈高甲基化状态 。
关键词
HL-60细胞
隆钙素
甲基化
白血病
发生机制
Keywords
HL 60 cells
Calcitonin
Methylation
dna
(
cytosine
5
)
methyltransferase/
metab
分类号
R733.702 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
Dnm t3b cDNA及其在小鼠胚胎组织中选择剪接异构体的克隆
尹斌
陈雨亭
朱敏
罗一菁
朱宁
徐世才
吴冠芸
沈岩
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
1999
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
坏变细胞的DNA对HpaⅡ限制性片段分析法测量DNA甲基化水平的干扰作用
潘孔寒
施正政
余应年
陈星若
《浙江医科大学学报》
CSCD
1992
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
HL-60细胞降钙素基因高甲基化的发生机制
赵明明
白志勇
白晓川
徐国宾
武淑兰
《北京医科大学学报》
CSCD
2000
0
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职称材料
已选择
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参考文献
引证文献
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