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新城疫病毒HN蛋白的截短表达及间接ELISA方法建立
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作者 魏玲 王思怡 +4 位作者 熊荣园 梁洪 王怀禹 李彩虹 杨国淋 《家畜生态学报》 北大核心 2025年第3期91-95,共5页
为了建立一种快速的新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)抗体检测方法,试验采用原核表达技术表达HN蛋白,以HN蛋白为检测抗原建立酶联免疫吸附测定(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法。结果表明,获得了以包涵体形式表... 为了建立一种快速的新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)抗体检测方法,试验采用原核表达技术表达HN蛋白,以HN蛋白为检测抗原建立酶联免疫吸附测定(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法。结果表明,获得了以包涵体形式表达的重组蛋白,间接ELISA方法检测6种其它鸡病阳性血清均为阴性,其最低抗体检出效价为1∶10240,其与血凝抑制试验(Hemagglutination inhibition,HI)方法的阳性和阴性符合率分别为98.08%和92.31%,检测临床样品阳性率为91.48%。说明建立的间接ELISA方法可用于NDV免疫抗体检测和疫苗免疫效果评价。 展开更多
关键词 新城疫病毒 HN蛋白 截短表达 间接elisa 抗体检测
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IBDV单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA检测方法的建立
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作者 姜艳平 刘薇 +6 位作者 宫浩阳 蔡李萌 李佳璇 崔文 周晗 韩建春 唐丽杰 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第7期3433-3441,共9页
旨在建立一种快速有效的检测鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)的方法,本研究以IBDV全病毒作为免疫原制备单克隆抗体,以获得的单抗6G3作为捕获抗体,单抗4C12作为检测抗体,建立检测IBDV的双抗体夹心ELISA方法。结果表明,该ELISA方法具有良好的... 旨在建立一种快速有效的检测鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)的方法,本研究以IBDV全病毒作为免疫原制备单克隆抗体,以获得的单抗6G3作为捕获抗体,单抗4C12作为检测抗体,建立检测IBDV的双抗体夹心ELISA方法。结果表明,该ELISA方法具有良好的特异性,与REV、AEV、ALV和EDSV均无交叉反应;能检测病毒的最小量为1.585×10^(3) ELD50;批间和批内重复性试验显示,该方法具有良好的重复性;通过该方法对49份临床样品进行检测,与商品化的IBDV抗原检测卡进行比较,符合率达94.18%。综上,本研究建立的双抗体夹心ELISA方法,具有良好的特异性、敏感性和重复性,可用于IBDV的快速检测,为制备商品化的IBDV检测试剂盒奠定基础。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病毒 单克隆抗体 检测方法 双抗体夹心elisa
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Study on ELISA for detection of sulfamethazine residues
3
作者 LI Jichang HE Liang XU Shiwen HUO Guicheng DING Liangjun LIU Ning 《Journal of Northeast Agricultural University(English Edition)》 CAS 2007年第3期224-228,共5页
In this study, various factors of ELISA for detection of sulfamethazine residues were explored, the coating antigen was diluted to 1:400, the best coating condition was at 4℃ overnight, the working concentration of ... In this study, various factors of ELISA for detection of sulfamethazine residues were explored, the coating antigen was diluted to 1:400, the best coating condition was at 4℃ overnight, the working concentration of HRP-IgG enzyme conjugate was 1 : 7 000. The pre-incubation time and incubation time was 30 min and 120 min, respectively, the substrate solution working time was 20 min. Two moL · L^-1 H2SO4 was used to stop the reaction and checked. A standard curve of direct competitive ELISA had been established to detect the sulfamethazine residues in milk. The detection limit of this method was 1.97 ng · mL^-1. The mean concentration of sulfamethazine required to inhibit 30% antibody was 7.1 ng · mL^-1. The linear range of the detection was 5-200 ng · mL^-1. The recovery ratio was between 73.20% and 91.16%. The CV% of within array and between arrays was less than 10%. 展开更多
关键词 SULFAMETHAZINE monoclonal antibody elisa residue detection
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禽戊型肝炎病毒间接ELISA抗体检测方法的建立与应用
4
作者 张玉倩 刘春红 +2 位作者 吕志航 廉春杨 张雪莲 《华北农学报》 北大核心 2025年第4期225-231,共7页
为了针对禽戊型肝炎病毒(aHEV)建立一种快速、准确的抗体检测方法,以大肠杆菌原核表达系统表达的CaHEV-GDSZ01株的ORF2蛋白作为包被抗原,对相关反应条件进行优化后确定其最佳工作条件,以建立检测aHEV鸡血清抗体的间接ELISA方法,并对该... 为了针对禽戊型肝炎病毒(aHEV)建立一种快速、准确的抗体检测方法,以大肠杆菌原核表达系统表达的CaHEV-GDSZ01株的ORF2蛋白作为包被抗原,对相关反应条件进行优化后确定其最佳工作条件,以建立检测aHEV鸡血清抗体的间接ELISA方法,并对该方法进行特异性、敏感性和重复性试验,与Western Blot方法进行对比后,初步应用于检测鸡临床血清样本。结果显示,ORF2蛋白被成功表达、纯化,并经Western Blot试验证实,可与aHEV阳性鸡血清发生特异性反应,建立的ELISA的最佳反应条件为:ORF2蛋白以200 ng/孔4℃包被过夜(12 h),5%脱脂乳37℃封闭1~2 h,血清1∶1600稀释、室温孵育1 h,兔抗鸡IgY-HRP 1∶5000稀释、37℃孵育90 min,TMB底物37℃显色20 min后终止。该ELISA方法可检出稀释51200倍后的aHEV阳性血清,且不与NDV、AIV-H5、AIV-H9、ALV、REV和MDV等其他鸡源性病毒的阳性血清发生交叉反应;批内、批间重复性试验的变异系数均小于10%,与Western Blot方法的总体符合率达95.12%。通过该方法检测广东不同地区养鸡场的临床血清样本,总阳性率达66.34%。成功建立了一种操作简便、有效,且特异性、灵敏性和重复性均良好的aHEV血清学检测方法,可为基层监测、防控aHEV的感染提供一定的技术支持。 展开更多
关键词 禽戊型肝炎病毒 ORF2蛋白 间接elisa 血清学检测 流行病学调查
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DAS-ELISA、RT-PCR和IC-RT-PCR检测葡萄卷叶病毒Ⅲ的比较研究 被引量:16
5
作者 陈建军 2刘崇怀 +2 位作者 古勤生 潘兴 曹孜义 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期173-177,共5页
在生长季节分3次对部分葡萄品种枝条上部、中部和下部叶片及韧皮部,进行双抗体夹心法(DAS-ELISA)、反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫捕捉反转录聚合酶链式反应(IC-RT-PCR)3种方法检测卷叶病毒Ⅲ(GLRaV-3)的比较。结果表明:DAS-ELISA... 在生长季节分3次对部分葡萄品种枝条上部、中部和下部叶片及韧皮部,进行双抗体夹心法(DAS-ELISA)、反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫捕捉反转录聚合酶链式反应(IC-RT-PCR)3种方法检测卷叶病毒Ⅲ(GLRaV-3)的比较。结果表明:DAS-ELISA的检出率明显低于RT-PCR和IC-RT-PCR方法。RT-PCR可以检测出RNA提取液为1:10-4的GLRaV-3病毒,但它受到了提取RNA难以及其它物质(如蛋白质、DNA等)干扰的影响,检测难度增加。从检测的灵敏度来看,RT-PCR和IC-RT-PCR比DAS-ELISA灵敏;并且,IC-RT-PCR比其它两种方法较快,整个过程仅需8h。 展开更多
关键词 das-elisa RT-PCR IC-RT-PCR 葡萄 卷叶病毒Ⅲ 比较研究 检测 检出率
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贵州3种马铃薯病毒的DAS-ELISA检测与分析 被引量:12
6
作者 郑世玲 刘作易 《贵州农业科学》 CAS 2006年第6期42-44,共3页
应用DAS-ELISA法对从贵州省马铃薯种植区采集带症状的202份马铃薯叶片分别进行了PVX、PVY、PLRV 3种马铃薯病毒的检测。结果表明,3种马铃薯病毒在贵州马铃薯种植区表现出比较显著的田间症状,其病毒的发生与气候类型、种薯品种来源、种... 应用DAS-ELISA法对从贵州省马铃薯种植区采集带症状的202份马铃薯叶片分别进行了PVX、PVY、PLRV 3种马铃薯病毒的检测。结果表明,3种马铃薯病毒在贵州马铃薯种植区表现出比较显著的田间症状,其病毒的发生与气候类型、种薯品种来源、种植方式存在相关性,并结合马铃薯实际生产对其病毒防治措施做了简要讨论。 展开更多
关键词 双抗体夹心酶联免疫吸附测定 马铃薯病毒 检测
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利用DAS-ELISA检测侵染观赏百合黄瓜花叶病毒的研究 被引量:5
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作者 梁巧兰 魏列新 徐秉良 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2006年第1期61-64,共4页
从制备的黄瓜花叶病毒———观赏百合分离物(CMV-Li)抗血清中提纯了IgG,并用过碘酸钠法进行辣根过氧化物酶(HRP)标记,建立了检测CMV-Li的DAS-ELISA(double antibody sandwich-enzyme-linked immumnosor-bent assay)系统,利用此检测系统... 从制备的黄瓜花叶病毒———观赏百合分离物(CMV-Li)抗血清中提纯了IgG,并用过碘酸钠法进行辣根过氧化物酶(HRP)标记,建立了检测CMV-Li的DAS-ELISA(double antibody sandwich-enzyme-linked immumnosor-bent assay)系统,利用此检测系统并结合生物学方法,对临洮切花百合田间病样和百合不同部位带毒量进行了检测,结果发现CMV-Li的侵染率为23.81%,叶片的带毒量明显高于花和鳞茎. 展开更多
关键词 黄瓜花叶病毒 观赏百合 das-elisa 检测
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基于Penton蛋白禽腺病毒血清4型间接ELISA抗体检测方法的建立 被引量:2
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作者 李鹏 雷梦瑶 +9 位作者 冯丽丽 王振伟 管春晓 郑洪双 王俊茹 王利平 李炎锦 吴欣媛 刘兴友 金前跃 《河南农业科学》 北大核心 2024年第7期133-141,共9页
Penton蛋白是构成禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)衣壳的主要结构蛋白,具备高度保守性与良好的免疫原性。以纯化的Penton蛋白为包被抗原,建立一种基于禽腺病毒血清4型Penton蛋白的间接ELISA抗体检测方法。结果显示,... Penton蛋白是构成禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)衣壳的主要结构蛋白,具备高度保守性与良好的免疫原性。以纯化的Penton蛋白为包被抗原,建立一种基于禽腺病毒血清4型Penton蛋白的间接ELISA抗体检测方法。结果显示,Penton蛋白最佳包被质量浓度为2μg/mL,血清稀释倍数为200倍,酶标抗体稀释倍数为1∶5000,阳性临界值为0.222,敏感性可达到1∶6400,与鸡传染性支气管炎病毒、鸡传染性法氏囊病病毒、鸡传染性喉气管炎病毒均无交叉反应,特异性良好,批间批内重复性变异系数均<10%,在100份临床血清中阳性检出率为77%,与商品化试剂盒检出符合率可达98%。综上,建立的ELISA抗体检测方法可以用于禽腺病毒4型临床抗体检测。 展开更多
关键词 禽腺病毒血清4型 Penton蛋白 间接elisa 抗体检测
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牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的真核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立 被引量:2
9
作者 刘丹 黄小洁 +5 位作者 吴华伟 孙淼 陈延飞 秦义娴 侯力丹 薛麒 《动物医学进展》 北大核心 2024年第4期51-56,共6页
为建立检测牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)抗体的间接ELISA方法,利用昆虫细胞真核表达系统成功表达E2蛋白,将纯化后的E2蛋白作为包被抗原,用方阵滴定方法对影响ELISA的各个因素进行优化,并进行特异性、敏感性和重... 为建立检测牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)抗体的间接ELISA方法,利用昆虫细胞真核表达系统成功表达E2蛋白,将纯化后的E2蛋白作为包被抗原,用方阵滴定方法对影响ELISA的各个因素进行优化,并进行特异性、敏感性和重复性试验。结果表明,在昆虫细胞中表达了BVDV E2蛋白,Western blot证实目的蛋白可与BVDV阳性血清发生特异性反应。ELISA优化结果显示,E2蛋白最佳包被浓度为0.5μg/mL,最佳封闭液为1%明胶,最佳血清稀释度为1∶400,最佳血清作用方式为37℃作用30 min,酶标抗体的最佳作用方式为1∶2000稀释、37℃作用30 min,最佳底物作用时间为室温20 min,阳性临界值为OD 450≥0.423。与血清中和试验法进行比较,总符合率为97.8%,板内和板间重复性试验的变异系数均小于10%。该方法与牛常见病毒阳性血清均无交叉反应。说明建立的间接ELISA抗体检测方法特异性、敏感性和重复性良好,可用于大批量样本的临床检测和流行病学研究。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 E2蛋白 间接elisa 抗体检测
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香蕉分化芽BBTVDAS-ELISA检测方法的建立和应用
10
作者 周朋 余乃通 +5 位作者 章绍延 王健华 胡加谊 王祥 梁洁 刘志昕 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期117-120,共4页
为了解海南海口香蕉分化芽携带香蕉束顶病毒(Banana bunchy top virus,BBTV)的情况,本研究建立了双抗夹心酶联免疫反应(DAS-ELISA)检测法,对来自海南地区组培厂的香蕉分化芽进行检测。检测结果表明,6个品种1 852个香蕉分化芽平均带毒率... 为了解海南海口香蕉分化芽携带香蕉束顶病毒(Banana bunchy top virus,BBTV)的情况,本研究建立了双抗夹心酶联免疫反应(DAS-ELISA)检测法,对来自海南地区组培厂的香蕉分化芽进行检测。检测结果表明,6个品种1 852个香蕉分化芽平均带毒率为2.1%,其中‘皇帝蕉’为1.98%,‘粤科1号’为2.07%,‘广粉蕉’为1.98%,‘大蕉’为6.25%,‘218’为1.89%,‘巴西蕉’为2.25%。为了进一步验证ELISA结果的可靠性,随机选取12个阳性样品提取总DNA进行PCR鉴定。鉴定结果显示,12个样品中11个检测出有BBTV,表明DAS-ELISA方法的准确率较高,与分子检测结果基本一致,可以胜任日常香蕉组培苗BBTV的检测。 展开更多
关键词 香蕉束顶病毒 das-elisa 病毒检测
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抗PCV4 Cap蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立 被引量:1
11
作者 徐鹏 吉卫龙 +7 位作者 伊立超 张爽 郝嘉翼 高子函 任世斌 时小双 任林柱 李昌 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第1期115-121,共7页
为建立可应用于猪圆环病毒4型(PCV4)候选疫苗特异性抗体检测与评价方法,本研究应用PCV4 Cap蛋白作为抗原,以PCV4多克隆兔源抗体作为一抗,优化各反应的最佳条件并建立了针对PCV4 Cap蛋白抗体的间接ELISA方法。最佳条件为2μg/m L PCV4 Ca... 为建立可应用于猪圆环病毒4型(PCV4)候选疫苗特异性抗体检测与评价方法,本研究应用PCV4 Cap蛋白作为抗原,以PCV4多克隆兔源抗体作为一抗,优化各反应的最佳条件并建立了针对PCV4 Cap蛋白抗体的间接ELISA方法。最佳条件为2μg/m L PCV4 Cap纯化蛋白,4℃包被过夜,5%脱脂乳封闭60 min,待检血清稀释比例为1∶800,反应条件为37℃、45 min,酶标抗体稀释比例为1∶5000,反应条件为37℃、60 min,底物显色时间为10 min,Cut of f值为0.157,灵敏度可达102400倍。成功建立的抗PCV4Cap蛋白抗体间接ELISA检测方法具有良好的敏感性、重复性和特异性。可为检测PCV4候选疫苗的特异性抗体水平提供一种精准、高效的方法。 展开更多
关键词 猪圆环病毒4型 免疫效果检测 间接elisa方法
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马铃薯A病毒重组CP多克隆抗体的制备及其在DAS-ELISA检测中的应用 被引量:5
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作者 宋志成 费新敏 +4 位作者 杨煜 乔利仙 王晶珊 李广存 郭宝太 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2017年第1期41-46,共6页
利用重组CP作抗原制备出马铃薯A病毒的多克隆抗体,并将其用于DAS-ELISA检测。以p ET22b(+)为起始载体,构建了PVA-CP基因的原核表达载体p ET22b-ACP,重组菌BL21(p ET22b-ACP)经IPTG诱导表达出了分子量为30 k Da的特异性重组CP。利用高纯... 利用重组CP作抗原制备出马铃薯A病毒的多克隆抗体,并将其用于DAS-ELISA检测。以p ET22b(+)为起始载体,构建了PVA-CP基因的原核表达载体p ET22b-ACP,重组菌BL21(p ET22b-ACP)经IPTG诱导表达出了分子量为30 k Da的特异性重组CP。利用高纯度重组CP为抗原免疫家兔,制备出了效价为1∶512 k的抗血清。以PVA重组CP为抗原,用间接ELISA与直接ELISA分别测定重组CP纯化抗体(Ig G)及其碱性磷酸酶标记物(Ig G-AP)的活性,用DAS-ELISA测定2种抗体的活性,目测及OD值测定结果表明3种ELISA测定反应都呈阳性。以PVA病毒阳性标准物为抗原,在上述3种ELISA测定中也呈阳性反应,重组CP多克隆抗体及其酶标抗体与PVA有较强的反应信号。利用重组CP制备的多克隆抗体及其酶标抗体达到了马铃薯A病毒DAS-ELISA检测的要求。 展开更多
关键词 马铃薯A病毒 重组CP 多克隆抗体 酶标记抗体 das-elisa检测
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转Cp4 epsps基因大豆快速DAS-ELISA检测方法的建立 被引量:1
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作者 候吉超 李忠鹏 +3 位作者 梁雨欣 张春雨 李小宇 王永志 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期128-133,173,共7页
为了快速检测转Cp4 epsps基因大豆,本研究以纯化后的CP4-EPSPS单克隆抗体1D12为捕获抗体,辣根过氧化物酶标记的羊抗CP4-EPSPS多克隆抗体8092为检测抗体,通过优化抗体工作浓度和抗原抗体反应时间,成功建立转Cp4 epsps基因大豆快速双抗夹... 为了快速检测转Cp4 epsps基因大豆,本研究以纯化后的CP4-EPSPS单克隆抗体1D12为捕获抗体,辣根过氧化物酶标记的羊抗CP4-EPSPS多克隆抗体8092为检测抗体,通过优化抗体工作浓度和抗原抗体反应时间,成功建立转Cp4 epsps基因大豆快速双抗夹心ELISA检测方法。结果显示:最佳检测条件为捕获抗体浓度10μg/mL,检测抗体浓度1.25μg/mL,样品与检测抗体先后加入酶标板37℃共同孵育60 min。该方法的检测范围为0.3125~80μg/mL,待检叶片、籽粒最佳检测范围为10~80倍稀释;板内变异系数为1.64%~5.42%,板间变异系数为3.05%~9.13%,符合ELISA定性试剂盒参考标准;对100份大豆叶片、20份大豆籽粒进行检测,与Western blot结果和标准结果进行比较,符合率为100%,表明该检测方法具有良好的准确性和重复性。该检测方法75 min内即可完成检测,适用于快速检测转Cp4 epsps基因大豆,为转Cp4 epsps基因快速检测试剂盒的开发奠定了基础。 展开更多
关键词 CP4-EPSPS 双抗夹心elisa 大豆 检测
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葡萄球菌肠毒素DAS-ELISA检测方法的建立及应用 被引量:2
14
作者 刘鹏翀 黄金海 +3 位作者 刘莉 刘莹 刘壮 孙盈 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第8期195-198,共4页
为筛选特异性强、亲和力高、可夹心配对单克隆抗体4A2和5C12,通过方阵试验优化工作条件,建立金黄色葡萄球菌肠毒素(staphylococcal enterotoxins,SEs)的双抗体夹心-酶联免疫吸附试验定量检测方法。结果表明:该方法标准曲线为y=4.074x-1.... 为筛选特异性强、亲和力高、可夹心配对单克隆抗体4A2和5C12,通过方阵试验优化工作条件,建立金黄色葡萄球菌肠毒素(staphylococcal enterotoxins,SEs)的双抗体夹心-酶联免疫吸附试验定量检测方法。结果表明:该方法标准曲线为y=4.074x-1.1888,R2=0.9892,检测下限为0.307μg/mL,批内和批间变异系数均小于10%,脱脂乳粉中SEs掺入试验测定回收率为103%~107%,特异性、重复性和稳定性良好;应用所建双抗体夹心-酶联免疫吸附试验方法,对数株葡萄球菌分离株体外培养上清中SEs产生的动态变化进行分析表明,不同菌株SEs分泌能力不同,且0~20h分泌量不断增加,对鲜牛乳和猪淋巴组织匀浆中的SEs进行检测,检出率分别为51.7%和59.1%,并与进口商品化试剂盒检测结果比对,一致率达92.5%,表明食品中SEs污染的普遍存在。所建方法灵敏高效,可为食源性污染监控提供有效手段。 展开更多
关键词 葡萄球菌 葡萄球菌肠毒素 双抗体夹心-酶联免疫吸附法 检测方法
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山羊源贝氏柯克斯体抗体间接ELISA检测方法的建立与应用 被引量:1
15
作者 张锐铮 于皓同 +2 位作者 王凯茸 张琪 许信刚 《动物医学进展》 北大核心 2024年第4期21-26,共6页
为建立山羊源贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii)抗体间接ELISA检测方法,对贝氏柯克斯体的com1基因进行克隆及原核表达,以com1纯化蛋白作为抗原,建立间接ELISA检测方法,并对临床收集的血清样本进行检测。结果显示,重组蛋白大小为27 ku,经W... 为建立山羊源贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii)抗体间接ELISA检测方法,对贝氏柯克斯体的com1基因进行克隆及原核表达,以com1纯化蛋白作为抗原,建立间接ELISA检测方法,并对临床收集的血清样本进行检测。结果显示,重组蛋白大小为27 ku,经Western blot鉴定com1蛋白反应原性良好;ELISA检测方法抗原包被量为4μg/mL,血清的稀释倍数为1∶100,酶标二抗稀释倍数为1∶2500,阴阳临界值为0.278。用该方法对流产衣原体、山羊支原体、牛支原体阳性血清进行检测,均为阴性;当C.burnetii阳性血清稀释至2048倍时检测结果仍为阳性;批内、批间变异系数均小于10%。用该方法对陕西省部分羊场收集到的307份血清样本进行检测,样本阳性率为9.12%。成功建立了一种检测贝氏柯克斯体抗体的间接ELISA检测方法,这为C.burnetii引起的Q热的实验室诊断和流行病学调查提供了技术支持。 展开更多
关键词 贝氏柯克斯体 com1蛋白 酶联免疫吸附试验 抗体检测
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新型鹅星状病毒ORF2蛋白在杆状病毒表达系统中的表达及间接ELISA检测方法的建立
16
作者 张辛耘 陈连颐 +5 位作者 任丹 谢泉 万志敏 李拓凡 叶建强 高巍 《微生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期37-44,共8页
为建立检测新型鹅星状病毒(Goose Astrovirus,GAstV)抗体快捷特异方法,本研究利用昆虫杆状病毒表达系统成功表达了GAstV重组ORF2蛋白,并以纯化的ORF2蛋白作为包被抗原,通过反应条件的摸索,建立了一种检测GAstV抗体的间接ELISA方法。经... 为建立检测新型鹅星状病毒(Goose Astrovirus,GAstV)抗体快捷特异方法,本研究利用昆虫杆状病毒表达系统成功表达了GAstV重组ORF2蛋白,并以纯化的ORF2蛋白作为包被抗原,通过反应条件的摸索,建立了一种检测GAstV抗体的间接ELISA方法。经特异性和重复性试验证明,建立的间接ELISA仅与GAstV阳性血清反应,而与其他鹅易感病毒的阳性血清无交叉反应,且批间和批内重复性变异系数均低于10%;在灵敏度分析中,ELISA检测的灵敏度可达IFA的4倍;临床样品检测结果显示,该ELISA方法与IFA检测的符合率达89.8%。上述结果表明,本研究在杆状病毒中成功表达了GAstV的ORF2蛋白,且建立了具有良好的特异性、敏感性和重复性的间接ELISA方法,为GAstV的临床感染检测和血清学流行病学调查提供了一种准确、快速和经济的检测方法,为开发临床适用的检测试剂盒提供了参考。 展开更多
关键词 鹅星状病毒 重组杆状病毒 ORF2蛋白 间接elisa 抗体检测
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变异型禽呼肠孤病毒抗体间接ELISA检测方法的建立
17
作者 牛世奇 武子华 +5 位作者 马天馨 李雪松 滕巧泱 苑纯秀 李泽君 刘芹防 《中国动物传染病学报》 北大核心 2024年第6期50-56,共7页
随着变异型禽呼肠孤病毒(ARV)不断分离出来,其严重威胁着我国养鸡产业发展,目前尚没有针对变异型ARV的血清学检测方法,且商品化试剂盒(INDEXX)检测不出变异株感染鸡后的阳性血清,因此为了建立能快速检测ARV血清抗体的ELISA检测方法。本... 随着变异型禽呼肠孤病毒(ARV)不断分离出来,其严重威胁着我国养鸡产业发展,目前尚没有针对变异型ARV的血清学检测方法,且商品化试剂盒(INDEXX)检测不出变异株感染鸡后的阳性血清,因此为了建立能快速检测ARV血清抗体的ELISA检测方法。本实验利用分离到的ARV变异株在LMH细胞上增殖,对病毒进行灭活浓缩后作为包被抗原,对各种条件进行了优化,建立了检测ARV血清抗体的间接ELISA方法。结果显示:ARV的最佳包被浓度为1.25μg/mL,血清最佳稀释倍数为1∶800,最佳包被条件为37℃、2 h后4℃过夜进行孵育,封闭液用1%BSA,血清最佳孵育条件为37℃、1.5 h,HRP标记羊抗鸡二抗的最佳稀释倍数为1∶8000,最佳孵育条件为37℃、1.5 h,并确定了临界值为0.442。该检测方法的特异性和敏感性较好,批内、批间重复率变异系数最大在5%左右,具有良好的重复性。变异型禽呼肠孤病毒抗体间接ELISA检测方法的建立为临床快速检测变异型ARV的抗体及疫苗免疫效价评估奠定基础。 展开更多
关键词 禽呼肠孤病毒 间接elisa 检测方法
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猪细环病毒1型间接ELISA抗体检测方法的建立
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作者 杨敩校 刘芊麟 +5 位作者 陈丙生 蒋小玲 王建舫 董虹 肖兴 周双海 《北京农学院学报》 2024年第1期43-46,共4页
【目的】建立一种检测猪细环病毒1型抗体的血清学方法。【方法】以猪细环病毒1型衣壳蛋白为包被抗原,筛选和优化抗体检测反应条件来建立一种检测猪细环病毒1型衣壳蛋白抗体的间接ELISA方法,之后进行特异性和重复性试验,并进行初步临床... 【目的】建立一种检测猪细环病毒1型抗体的血清学方法。【方法】以猪细环病毒1型衣壳蛋白为包被抗原,筛选和优化抗体检测反应条件来建立一种检测猪细环病毒1型衣壳蛋白抗体的间接ELISA方法,之后进行特异性和重复性试验,并进行初步临床应用检测。【结果】确定了检测猪细环病毒1型衣壳蛋白抗体的间接ELISA方法的各项最佳反应条件;对8种猪源病毒阳性血清的检测结果显示只有猪细环病毒1型阳性血清为阳性,显示出良好的特异性;批内变异系数均小于5%,批间变异系数均小于10%,显示出良好的重复性。对来源于北京和湖南地区的400份猪血清样品的检测结果显示,猪细环病毒1型衣壳蛋白抗体阳性率为75.25%,PCR阳性率为71.00%,二者之间没有显著差异(P>0.05),表明这两个地区存在较多的的猪细环病毒1型感染。【结论】建立了一种特异性和重复性都良好的检测猪细环病毒1型衣壳蛋白抗体的间接ELISA,可用于猪细环病毒1型抗体的临床检测。 展开更多
关键词 猪细环病毒1型 衣壳蛋白 间接elisa 抗体 检测
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三种口蹄疫病毒O型、A型抗体ELISA检测试剂盒的比较分析
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作者 林雅书 《福建畜牧兽医》 2024年第2期10-12,16,共4页
目的:比较不同的口蹄疫病毒O型、A型抗体ELISA检测试剂盒的性能差异,为基层兽医实验室选择合适的试剂盒提供参考。方法:采集174份已免疫的猪、羊血清样品,选用3个不同厂家的口蹄疫病毒O型、A型抗体ELISA检测试剂盒进行抗体检测,比较各... 目的:比较不同的口蹄疫病毒O型、A型抗体ELISA检测试剂盒的性能差异,为基层兽医实验室选择合适的试剂盒提供参考。方法:采集174份已免疫的猪、羊血清样品,选用3个不同厂家的口蹄疫病毒O型、A型抗体ELISA检测试剂盒进行抗体检测,比较各试剂盒的抗体阳性率、符合率和便捷性。结果:3种试剂盒的口蹄疫病毒O型抗体检测阳性率均在90%以上,符合率为89.66%;3种试剂盒的口蹄疫病毒A型抗体检测阳性率为56.90%95.98%,差别较大,符合率仅52.87%。结论:3种口蹄疫病毒O型、A型抗体ELISA检测试剂盒的检测结果存在一定差异,且差异具有统计学意义(P<0.05);3种试剂盒均适用于口蹄疫病毒O型抗体的定性测定,不全适用于口蹄疫病毒A型抗体的定性测定。 展开更多
关键词 口蹄疫 elisa 抗体检测 试剂盒
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禽流感病毒夹心ELISA快速检测方法的研究 被引量:22
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作者 肖运才 李自力 +6 位作者 胡思顺 石德时 许青荣 程峰 刘梅 毕丁仁 王桂枝 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期536-541,共6页
以禽流感病毒(AIV)湖北分离株(H9N2亚型)提纯物为免疫原,制备出鸡抗AIV和兔抗AIV抗体,经用琼脂扩散法测得效价分别为1∶32和1∶16。以纯化的鸡抗AIVIgG为包被抗体,兔抗AIVIgG为第二抗体,建立了检测AIV抗原的夹心ELISA法。结果表明,鸡抗A... 以禽流感病毒(AIV)湖北分离株(H9N2亚型)提纯物为免疫原,制备出鸡抗AIV和兔抗AIV抗体,经用琼脂扩散法测得效价分别为1∶32和1∶16。以纯化的鸡抗AIVIgG为包被抗体,兔抗AIVIgG为第二抗体,建立了检测AIV抗原的夹心ELISA法。结果表明,鸡抗AIVIgG的最佳包被浓度为1μg/mL,兔抗AIVIgG的最适工作浓度为5μg/mL;对已知的阳性样品,用夹心ELISA法测得的病毒滴度比血球凝集滴度高16倍以上,且能检出其它亚型的禽流感病毒;与新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、减蛋综合征病毒、传染性喉气管炎病毒、传染性法氏囊病病毒、鸡痘病毒、马立克氏病病毒等无交叉反应,说明本方法有很高的特异性及敏感性。对14个鸡场送检的、患有呼吸道疾病或有腹膜炎、眼炎、产蛋下降、怀疑为禽流感感染的病鸡进行了检测,结果有7个鸡场为阳性。本方法的建立为禽流感病鸡群的临床检验提供了一种方便、敏感、快速的检测方法。 展开更多
关键词 禽流感病毒 夹心elisa 快速检测方法 禽流感
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