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绿色荧光蛋白在草鱼肾细胞中的表达
1
作者
郝贵杰
潘晓艺
+5 位作者
袁雪梅
姚嘉赟
徐洋
蔺凌云
尹文林
沈锦玉
《生物学杂志》
CAS
CSCD
2013年第5期23-26,共4页
应用阳离子脂质体介导法,将含绿色荧光蛋白(GFP)基因的质粒pEGFP-N1转染到培养成单层的草鱼肾细胞(CIK)中,通过荧光倒置显微镜和特异性RT-PCR方法检测GFP的表达。在荧光倒置显微镜下可见CIK细胞的胞质和胞核均呈现绿色荧光,且细胞核的...
应用阳离子脂质体介导法,将含绿色荧光蛋白(GFP)基因的质粒pEGFP-N1转染到培养成单层的草鱼肾细胞(CIK)中,通过荧光倒置显微镜和特异性RT-PCR方法检测GFP的表达。在荧光倒置显微镜下可见CIK细胞的胞质和胞核均呈现绿色荧光,且细胞核的绿色荧光强度强于细胞质。转染细胞中的转录产物经RT-PCR扩增后,凝胶电泳鉴定出与GFP基因片段分子量大小一致的条带,经测序证明其为GFP基因序列。结果表明,GFP基因可以在草鱼CIK细胞内高效率成功表达,为构建以GFP为报告基因的真核重组质粒及研究草鱼出血病DNA疫苗奠定了重要的基础。
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关键词
绿色荧光蛋白
草鱼肾细胞
转染
草鱼出血病
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职称材料
草鱼孕烷X受体与细胞色素P450 3A mRNA表达相关性初步研究
2
作者
符贵红
杨先乐
《海洋渔业》
CSCD
北大核心
2012年第1期76-82,共7页
根据GenBank中斑马鱼(Danio rerio)和虹鳟(Oncorhynchus mykiss)孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)基因序列设计保守区域简并引物,通过PCR扩增获得草鱼(Ctenopharyngodon idellus)PXR cDNA核苷酸序列片段为509 bp,经推导获取169 aa序...
根据GenBank中斑马鱼(Danio rerio)和虹鳟(Oncorhynchus mykiss)孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)基因序列设计保守区域简并引物,通过PCR扩增获得草鱼(Ctenopharyngodon idellus)PXR cDNA核苷酸序列片段为509 bp,经推导获取169 aa序列。对草鱼与其它物种PXR氨基酸序列进行同源性比较,用以鉴定其在物种中的进化。应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测草鱼9种组织PXR和细胞色素P450 3A(cytochrome P450 3A,CYP3A)基因mRNA相对含量,结果表明,其表达丰度依次为:前肠﹥肝脏﹥肾脏﹥鳃﹥肌肉﹥后肠﹥性腺﹥心脏﹥脾脏,CYP3A和PXR基因在草鱼组织中表达分布基本一致,在前肠、肝脏和肾脏高度表达,而在其它组织低度表达。为了进一步研究PXR和CYP3A基因表达相关性,通过细胞,特选用诱导剂利福平(rifampicin,RIF),最佳诱导浓度40μM,孵育1、2、4、6、8、10、12、24 h后,用qRT-PCR检测CYP3A-PXR基因动态表达过程。结果显示,诱导组CYP3A和PXR基因表达量均高于对照组,显示出显著诱导效应。
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关键词
草鱼
孕烷X受体
细胞色素P450
3A
草鱼肾细胞系
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职称材料
题名
绿色荧光蛋白在草鱼肾细胞中的表达
1
作者
郝贵杰
潘晓艺
袁雪梅
姚嘉赟
徐洋
蔺凌云
尹文林
沈锦玉
机构
浙江省淡水水产研究所
出处
《生物学杂志》
CAS
CSCD
2013年第5期23-26,共4页
基金
浙江省科技厅重大科技专项重点农业项目(2012C12009-4)
浙江省公益技术研究农业项目(2012C22046)
+2 种基金
湖州市科技攻关计划项目(2011GG11)
宁波大学中央财政支持地方高校发展专项学科项目(xkc11010)
湖州市自然科学基金项目(2012YZ03)
文摘
应用阳离子脂质体介导法,将含绿色荧光蛋白(GFP)基因的质粒pEGFP-N1转染到培养成单层的草鱼肾细胞(CIK)中,通过荧光倒置显微镜和特异性RT-PCR方法检测GFP的表达。在荧光倒置显微镜下可见CIK细胞的胞质和胞核均呈现绿色荧光,且细胞核的绿色荧光强度强于细胞质。转染细胞中的转录产物经RT-PCR扩增后,凝胶电泳鉴定出与GFP基因片段分子量大小一致的条带,经测序证明其为GFP基因序列。结果表明,GFP基因可以在草鱼CIK细胞内高效率成功表达,为构建以GFP为报告基因的真核重组质粒及研究草鱼出血病DNA疫苗奠定了重要的基础。
关键词
绿色荧光蛋白
草鱼肾细胞
转染
草鱼出血病
Keywords
green fluorescent protein
ctenopharyngodon idellus kidney cell（cik）
transfection
hemorrhage disease of grass carp
分类号
Q813 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
草鱼孕烷X受体与细胞色素P450 3A mRNA表达相关性初步研究
2
作者
符贵红
杨先乐
机构
中国水产科学研究院东海水产研究所
上海海洋大学水产与生命学院
出处
《海洋渔业》
CSCD
北大核心
2012年第1期76-82,共7页
基金
鱼虾用疫苗与药物研究开发(2011AA10A216)
现代农业产业技术体系建设专项资金资助(CARS-46)
文摘
根据GenBank中斑马鱼(Danio rerio)和虹鳟(Oncorhynchus mykiss)孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)基因序列设计保守区域简并引物,通过PCR扩增获得草鱼(Ctenopharyngodon idellus)PXR cDNA核苷酸序列片段为509 bp,经推导获取169 aa序列。对草鱼与其它物种PXR氨基酸序列进行同源性比较,用以鉴定其在物种中的进化。应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测草鱼9种组织PXR和细胞色素P450 3A(cytochrome P450 3A,CYP3A)基因mRNA相对含量,结果表明,其表达丰度依次为:前肠﹥肝脏﹥肾脏﹥鳃﹥肌肉﹥后肠﹥性腺﹥心脏﹥脾脏,CYP3A和PXR基因在草鱼组织中表达分布基本一致,在前肠、肝脏和肾脏高度表达,而在其它组织低度表达。为了进一步研究PXR和CYP3A基因表达相关性,通过细胞,特选用诱导剂利福平(rifampicin,RIF),最佳诱导浓度40μM,孵育1、2、4、6、8、10、12、24 h后,用qRT-PCR检测CYP3A-PXR基因动态表达过程。结果显示,诱导组CYP3A和PXR基因表达量均高于对照组,显示出显著诱导效应。
关键词
草鱼
孕烷X受体
细胞色素P450
3A
草鱼肾细胞系
Keywords
grass carp （
ctenopharyngodon
idellus
）
pregnane X receptor, PXR
cytochrome P450 3A,CYP3A
kidney
cell
of Chinese idle,
cik
分类号
Q344 [生物学—遗传学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
绿色荧光蛋白在草鱼肾细胞中的表达
郝贵杰
潘晓艺
袁雪梅
姚嘉赟
徐洋
蔺凌云
尹文林
沈锦玉
《生物学杂志》
CAS
CSCD
2013
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
草鱼孕烷X受体与细胞色素P450 3A mRNA表达相关性初步研究
符贵红
杨先乐
《海洋渔业》
CSCD
北大核心
2012
0
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职称材料
已选择
0
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