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新麦草独脚金内酯合成相关基因CCD7的克隆及表达分析
1
作者 艾芊 云岚 +1 位作者 任晓敏 姚娜 《草地学报》 北大核心 2025年第2期382-390,共9页
植物CCD7基因参与合成独脚金内酯。为研究新麦草[Psathyrostachys juncea(Fisch.)Nevski]CCD7基因的功能,本研究以多分蘖型新麦草和少分蘖型新麦草的分蘖节为材料,通过RNA-seq及荧光定量PCR分析CCD7基因在新麦草中的表达量,通过构建pcam... 植物CCD7基因参与合成独脚金内酯。为研究新麦草[Psathyrostachys juncea(Fisch.)Nevski]CCD7基因的功能,本研究以多分蘖型新麦草和少分蘖型新麦草的分蘖节为材料,通过RNA-seq及荧光定量PCR分析CCD7基因在新麦草中的表达量,通过构建pcambia1300-cYFP-CCD7过表达载体,分析新麦草CCD7基因在烟草叶片中的亚细胞定位;通过生物信息学分析预测CCD7基因的基本功能。结果显示,新麦草CCD7基因序列克隆全长为1638 bp,亚细胞定位新麦草CCD7基因在烟草叶片细胞的叶绿体中表达;表达量分析表明新麦草的分蘖数量与该基因的表达量呈现负相关关系。预测新麦草CCD7保守结构域的范围是第13到第544个氨基酸,该基因在9个近缘物种中功能保守,编码蛋白性质相近,新麦草CCD7蛋白的丝氨酸磷酸化位点最有可能是蛋白发挥功能的磷酸化位点。 展开更多
关键词 新麦草 CCD7 过表达载体 亚细胞定位 基因克隆
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九龙牦牛ELOVL3基因克隆、真核表达载体构建及组织表达谱分析
2
作者 司比努尔·牙生江 者玉琦 +2 位作者 钟金城 武志娟 柴志欣 《华北农学报》 北大核心 2025年第2期201-209,共9页
极长链脂肪酸延伸酶3(ELOVL3)主要参与合成极长链脂肪酸(VLCFA),在脂肪酸代谢过程中扮演重要角色。旨为克隆九龙牦牛ELOVL3基因的蛋白编码序列,构建ELOVL3基因真核表达载体,并预测分析其生物学功能,通过PCR技术扩增九龙牦牛ELOVL3基因的... 极长链脂肪酸延伸酶3(ELOVL3)主要参与合成极长链脂肪酸(VLCFA),在脂肪酸代谢过程中扮演重要角色。旨为克隆九龙牦牛ELOVL3基因的蛋白编码序列,构建ELOVL3基因真核表达载体,并预测分析其生物学功能,通过PCR技术扩增九龙牦牛ELOVL3基因的CDS区序列,并通过同源重组将其插入到pcDNA3.1载体中以构建重组质粒。采用限制性酶切及PCR技术验证重组质粒,结合测序结果,利用在线预测软件分析其蛋白编码序列的生物学功能。另外,针对ELOVL3基因在mRNA水平和蛋白水平的表达量,进行qPCR和Western Blot检测。结果表明:九龙牦牛ELOVL3基因的蛋白编码序列全长813 bp,共编码270个氨基酸;酶切、PCR及测序鉴定,确认成功构建pcDNA3.1-ELOVL3真核表达载体。生物信息学分析结果显示,ELOVL3基因编码蛋白属于疏水性蛋白,共有6个跨膜结构域及27个磷酸化位点。系统发育树显示,与九龙牦牛亲缘关系最近的是普通牛,最远的是原鸡。此外,ELOVL3基因在九龙牦牛肺脏组织中表达量最高。 展开更多
关键词 牦牛 ELOVL3基因 基因克隆 真核表达载体构建
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鸡柔嫩艾美耳球虫EtIMP1基因的克隆与表达载体的构建
3
作者 廖加磊 《福建畜牧兽医》 2025年第2期54-56,共3页
本研究对鸡柔嫩艾美耳球虫RNA进行提取及反转录,克隆鸡柔嫩艾美耳球虫IMP1基因,并将PCR产物连接于pEasy-Blunt-Simple载体中,PCR鉴定正确后送公司测序,进行序列分析。结果:成功克隆鸡柔嫩艾美耳球虫EtIMP1基因,其ORF长度为1 194 bp,并... 本研究对鸡柔嫩艾美耳球虫RNA进行提取及反转录,克隆鸡柔嫩艾美耳球虫IMP1基因,并将PCR产物连接于pEasy-Blunt-Simple载体中,PCR鉴定正确后送公司测序,进行序列分析。结果:成功克隆鸡柔嫩艾美耳球虫EtIMP1基因,其ORF长度为1 194 bp,并验证了其正确性;构建鸡柔嫩艾美耳球虫EtIMP1基因表达载体pEasy-Blunt-Simple-IMP1,并得到重组质粒,可为体外表达IMP1基因提供技术方法,也为疫苗候选基因的筛选奠定基础。 展开更多
关键词 鸡柔嫩艾美耳球虫 IMP1基因 克隆 表达载体 PCR
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木薯MeMLO12基因克隆及其CRISPR-Cas9表达载体的构建 被引量：1
4
作者 蔡吉苗 李博勋 +3 位作者 黄贵修 李超萍 时涛 王国芬 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2024年第8期1528-1537,共10页
MLO基因是植物中特有的一类抗病性负调控因子,该基因突变导致植物产生广谱抗病性。本研究从木薯全基因组中克隆获得木薯MLO12基因的DNA和cDNA序列,并将其命名为MeMLO12。该基因全长3743 nt、编码区(ORF)全长1728 nt,具有一个完整的开放... MLO基因是植物中特有的一类抗病性负调控因子,该基因突变导致植物产生广谱抗病性。本研究从木薯全基因组中克隆获得木薯MLO12基因的DNA和cDNA序列,并将其命名为MeMLO12。该基因全长3743 nt、编码区(ORF)全长1728 nt,具有一个完整的开放阅读框,含有15个外显子和14个内含子,编码586个氨基酸,蛋白的分子质量为67.2 kDa,等电点为8.85。该基因编码的蛋白定位在内质网膜上,无信号肽,在23~45、74~96、161~183、285~307、312~334、371~393、413~435 aa处形成7次跨膜结构域。qRT-PCR定量分析发现,受木薯黄单胞病菌侵染后,MeMLO12基因在木薯抗、感品种中的表达量存在明显的差异,参与木薯与黄单胞菌之间的互作,表现出负调控作用。选择该基因第11个外显子进行Snap Gene Viewer分析,获得了10 455条sgRNA的种子序列,从中选取3条靶序列约23 nt,碱基组成上3'末端含G结尾,将其构建到CRISPR-Cas9载体上,经验证,确认MeMLO12的3条靶序列已经成功构建到基因编辑载体上,将其命名为pSGR-Cas9-AT-MeMLO12载体。 展开更多
关键词 木薯 MeMLO12基因 克隆 表达分析 CRISPR-Cas9载体 构建
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大白菜BrCYP83B1基因的克隆及表达分析 被引量：1
5
作者 王玉书 赵琳琳 +5 位作者 赵爽 胡琦 白慧霞 王欢 曹业萍 范震宇 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期152-160,共9页
【目的】细胞色素P450家族是十字花科植物硫苷合成重要的酶系,其中CYP83亚家族主要参与核心结构的合成,旨在探究大白菜(Brassica rapa ssp.pekinensis)CYP83B1基因的功能。【方法】利用RT-PCR技术克隆BrCYP83B1基因,通过生物信息学软件... 【目的】细胞色素P450家族是十字花科植物硫苷合成重要的酶系,其中CYP83亚家族主要参与核心结构的合成,旨在探究大白菜(Brassica rapa ssp.pekinensis)CYP83B1基因的功能。【方法】利用RT-PCR技术克隆BrCYP83B1基因,通过生物信息学软件分析其编码蛋白理化性质、同源性及启动子顺式作用元件,利用RT-qPCR技术分析BrCYP83B1的表达模式,并构建其植物超表达载体。【结果】BrCYP83B1 cDNA序列全长为1500 bp,编码499个氨基酸,编码蛋白属于细胞色素P450超家族,主要定位于细胞质,二级结构主要由α-螺旋和无规则卷曲构成,与甘蓝型油菜、青花菜的CYP83B1蛋白具有较高的同源性。启动子分析表明,该基因启动子区域包含水杨酸、脱落酸及茉莉酸甲酯等激素响应的顺式作用元件,说明BrCYP83B1基因表达可能受激素调控。RT-qPCR分析结果表明,BrCYP83B1基因在大白菜的根、茎、叶、花和果中均有表达,且以叶中的表达量最高;茉莉酸甲酯够显著促进该基因的表达,而水杨酸处理对其表达具有一定的抑制作用,脱落酸处理下基因先上调后又下调。【结论】BrCYP83B1可能参与大白菜对激素的响应调控。 展开更多
关键词 大白菜 BrCYP83B1 基因克隆 植物激素 表达分析 超表达载体
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绵羊GSTA2基因克隆、生物信息学分析及真核表达载体构建 被引量：1
6
作者 邱丽霞 林秀 +4 位作者 曹忻 杨华 杨永林 余乾 张文喆 《中国草食动物科学》 CAS 北大核心 2024年第2期1-9,共9页
为阐明绵羊谷胱甘肽S转移酶α2(Glutathione S-transferase alpha 2,GSTA2)基因功能,利用牛GSTA2基因序列设计引物,提取绵羊皮肤组织总RNA,应用RT-PCR、基因克隆、生物信息学对GSTA2基因进行研究,构建真核表达载体,转染绵羊皮肤成纤维细... 为阐明绵羊谷胱甘肽S转移酶α2(Glutathione S-transferase alpha 2,GSTA2)基因功能,利用牛GSTA2基因序列设计引物,提取绵羊皮肤组织总RNA,应用RT-PCR、基因克隆、生物信息学对GSTA2基因进行研究,构建真核表达载体,转染绵羊皮肤成纤维细胞,应用qPCR技术检测GSTA2基因的表达。结果表明,克隆到绵羊GSTA2基因672 bp编码区序列(GenBank登录号:OR440604.1),编码223个氨基酸,分子量为25.39 ku。氨基酸比对和系统进化树分析表明,绵羊与牛的GSTA2相似度最高,达87.39%。GSTA2的二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主。构建的真核表达载体pcDNA3.1-GSTA2转染绵羊皮肤成纤维细胞后,GSTA2基因表达量极显著上调(P <0.001)。说明成功克隆了绵羊新基因GSTA2的CDS序列,并成功构建了其真核表达载体。 展开更多
关键词 绵羊 GSTA2基因 克隆 生物信息学 真核表达载体
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陆地棉环核苷酸离子通道蛋白基因GhCNGC8克隆及初步表达分析
7
作者 赵准 胡文冉 +1 位作者 邵武奎 黄全生 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期2306-2314,共9页
为明确环核苷酸门控离子通道蛋白基因GhCNCG8对棉花抗逆方面的作用。利用棉花叶片克隆获得该基因,生物信息学方法分析其理化性质、结构和进化关系,利用qRT-PCR(实时荧光定量)方法分析基因在黄萎病菌、干旱、盐胁迫以及激素诱导下GhCNCG... 为明确环核苷酸门控离子通道蛋白基因GhCNCG8对棉花抗逆方面的作用。利用棉花叶片克隆获得该基因,生物信息学方法分析其理化性质、结构和进化关系,利用qRT-PCR(实时荧光定量)方法分析基因在黄萎病菌、干旱、盐胁迫以及激素诱导下GhCNCG8表达模式和组织表达特异性;构建该基因VIGS沉默载体,利用农杆菌介导方法转化该基因到棉花叶片中,荧光定量PCR方法检测沉默效率。以棉花叶片cDNA为模板成功克隆GhCNGC8基因,该基因开放阅读框为2247 bp,编码748个氨基酸。进化树分析结果表明,陆地棉GhCNGC8基因与拟南芥AtCNGC8基因关系较近,多序列结果比对显示,GhCNGC8蛋白结构符合CNGCs家族蛋白结构特征。qRT-PCR结果表明,该基因对黄萎病、干旱、盐处理等胁迫及茉莉酸(JA)、水杨酸(SA)和双氧水(H_(2)O_(2))处理均有一定程度的响应,qRT-PCR分析结果表明,GhCNGC8基因在根、茎、叶、花、萼片和苞片中均有表达,叶中表达量最高。构建该基因的VIGS沉默载体转化棉花,qRT-PCR结果表明,该基因在棉花中已经沉默,表达量相比对照植株降低70%左右,表明GhCNGC8沉默载体构建成功并在棉花体内正常运行,GhCNGC8可能在棉花抗逆方面发挥重要作用。 展开更多
关键词 棉花 GhCNGC8 基因克隆 表达分析 载体构建
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鼠源ATP5B基因克隆及其原核和真核表达载体构建
8
作者 段辰星 黄袁慧 +2 位作者 闵开骏 李晓宁 罗廷荣 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1807-1816,共10页
【目的】克隆鼠源ATP5B基因,构建其原核和真核表达载体,为研究ATP5B蛋白功能及其在病毒感染过程中的作用机制提供基础。【方法】克隆鼠源ATP5B基因编码区(CDS),运用ProtParam、ProtScale和SignalP-5.0等对ATP5B蛋白进行生物信息学分析... 【目的】克隆鼠源ATP5B基因,构建其原核和真核表达载体,为研究ATP5B蛋白功能及其在病毒感染过程中的作用机制提供基础。【方法】克隆鼠源ATP5B基因编码区(CDS),运用ProtParam、ProtScale和SignalP-5.0等对ATP5B蛋白进行生物信息学分析。采用同源重组方法构建原核表达载体pGEX-4T-1-ATP5B-Flag和真核表达载体pcDNA3.0-ATP5B-Flag。以原核表达载体pGEX-4T-1-ATP5B-Flag转化大肠杆菌BL21感受态细胞,利用IPTG进行诱导表达,分析最适诱导温度和IPTG浓度。以真核表达载体pcDNA3.0-ATP5B-Flag转染HEK-293T细胞,通过Western blotting和间接免疫荧光试验(IFA)检测ATP5B蛋白在细胞中的表达及分布情况。【结果】鼠源ATP5B基因CDS长1590 bp,鼠源ATP5B蛋白由529个氨基酸残基构成,分子量为55 kD,理论等电点(pI)为5.21,属于稳定的疏水性蛋白,无跨膜结构域和信号肽,不属于分泌蛋白;鼠源ATP5B蛋白二级结构中α-螺旋占43.67%,无规则卷曲占32.51%,β-转角占9.45%,延伸链占14.37%。原核表达载体pGEX-4T-1-ATP5B-Flag经IPTG诱导后,通过考马斯亮蓝染色和Western blotting在81 kD处成功检测到融合蛋白,且主要以包涵体形式表达,诱导条件以30℃、0.5 mmol/L IPTG的效果更好。以真核表达载体pcDNA3.0-ATP5B-Flag转染HEK-293T细胞后,在55 kD处检测到Flag标签特异性条带,即ATP5B蛋白在HEK-293T细胞中成功表达,IFA检测结果表明该蛋白主要定位在细胞质中。【结论】成功构建鼠源ATP5B基因原核和真核表达载体,原核表达载体表达出的融合蛋白主要以包涵体形式存在,只有少量可溶蛋白,真核表达的ATP5B蛋白主要定位在细胞质中。鼠源ATP5B蛋白是理化性质稳定的疏水性蛋白,无信号肽位点,不属于分泌蛋白。 展开更多
关键词 鼠源ATP5B基因 基因克隆 生物信息学分析 表达载体构建
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猪胸膜肺炎放线杆菌ApxIVA基因特异片段的克隆和表达 被引量：7
9
作者 彭永刚 刘思国 +3 位作者 王牟平 宫强 王春来 沈国顺 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期103-106,共4页
以猪胸膜肺炎放线杆菌的血清7型国内分离株25＿4株基因组DNA为模板,PCR方法扩增apxIVA特异片段,PCR产物经纯化后与载体PMD18＿T进行连接、转化,经酶切及序列分析鉴定后,亚克隆到原核表达载体pGEX＿6P＿1中,构建成重组表达质粒pGEX＿apxI... 以猪胸膜肺炎放线杆菌的血清7型国内分离株25＿4株基因组DNA为模板,PCR方法扩增apxIVA特异片段,PCR产物经纯化后与载体PMD18＿T进行连接、转化,经酶切及序列分析鉴定后,亚克隆到原核表达载体pGEX＿6P＿1中,构建成重组表达质粒pGEX＿apxIVA,转入到大肠杆菌BL21中,以IPTG进行诱导,进行SDS＿PAGE电泳。结果表明,25＿4株apxIVAgene与基因库中标准7型apxIVAgene同源性达97%,所表达的融合蛋白相对分子量为44kD,与实际预测相符。apxIVA毒素特异片段的成功表达为猪胸膜肺炎放线杆菌病的诊断打下基础。 展开更多
关键词 猪胸膜肺炎放线杆菌 分泌蛋白 载体 克隆 表达 apxⅣA
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细胞质雄性不育相关基因orf224的克隆及其植物表达载体的构建 被引量：16
10
作者 王永飞 马三梅 +2 位作者 张鲁刚 王鸣 郑学勤 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2002年第4期9-12,共4页
利用 PCR技术从油菜 Polim a不育系中扩增出细胞质雄性不育相关基因 orf 2 2 4 ,并将其克隆到p GEM- T Easy载体上得到重组质粒 p GEMORF。在此基础上 ,用限制性内切酶将 orf 2 2 4基因从质粒 p GEMORF上切下 ,连接在 p BI12 1质粒的 Ca... 利用 PCR技术从油菜 Polim a不育系中扩增出细胞质雄性不育相关基因 orf 2 2 4 ,并将其克隆到p GEM- T Easy载体上得到重组质粒 p GEMORF。在此基础上 ,用限制性内切酶将 orf 2 2 4基因从质粒 p GEMORF上切下 ,连接在 p BI12 1质粒的 Ca MV 35 S启动子和 NOS终止子之间。经 PCR和酶切鉴定 ,得到了 orf 2 2 4基因的植物表达载体 p 展开更多
关键词 细胞质 雄性不育 相关基因 orf224 克隆 植物 表达载体
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牛乳主要过敏原α-乳白蛋白基因的克隆及其原核表达载体的构建 被引量：14
11
作者 闫浩 邬玉兰 +1 位作者 夏立新 刘志刚 《江西师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2010年第3期244-248,共5页
采用RT-PCR技术克隆牛乳主要过敏原α-乳白蛋白的全长基因,并根据序列设计带有酶切位点的特异性引物对所得cDNA的开放阅读框进行扩增,将所得基因片段克隆到PET-28a载体.结果克隆了牛乳主要过敏原α-乳白蛋白的完整基因,所克隆的基因开... 采用RT-PCR技术克隆牛乳主要过敏原α-乳白蛋白的全长基因,并根据序列设计带有酶切位点的特异性引物对所得cDNA的开放阅读框进行扩增,将所得基因片段克隆到PET-28a载体.结果克隆了牛乳主要过敏原α-乳白蛋白的完整基因,所克隆的基因开放阅读框全长为429 bp,编码142个氨基酸,该蛋白相对分子质量约为16 265,等电点为6.10,与理论值相符.通过与Genbank中已有序列比对分析,同源性高达100%.实现构建该基因的PET-28a原核表达载体,为牛乳主要过敏原α-乳白蛋白基因的相关研究奠定了基础. 展开更多
关键词 牛乳 Α-乳白蛋白 基因克隆 原核表达
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结核分枝杆菌三种分泌蛋白在原核表达载体中的克隆、表达与鉴定 被引量：7
12
作者 蔡宏 潘怡 +1 位作者 汪竟 朱玉贤 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期325-330,共6页
对结核分枝杆菌的三种分泌蛋白Ag85B ,ESAT_6和MPT_6 4基因进行克隆、鉴定与表达 ,为结核病诊断、重组疫苗应用和免疫效应检测打下基础。以结核杆菌H37RV 株基因组DNA为模板 ,用PCR法对基因Ag85B、ESAT_6、MPT_6 4进行扩增 ,产物与载体... 对结核分枝杆菌的三种分泌蛋白Ag85B ,ESAT_6和MPT_6 4基因进行克隆、鉴定与表达 ,为结核病诊断、重组疫苗应用和免疫效应检测打下基础。以结核杆菌H37RV 株基因组DNA为模板 ,用PCR法对基因Ag85B、ESAT_6、MPT_6 4进行扩增 ,产物与载体质粒pET2 2b和pGEX_4T_1构建表达Ag85B、ESAT_6、MPT_6 4的重组质粒 ,将此重组质粒先转化到大肠杆菌DH5a内抽提质粒 ,酶切检验 ,再转化入表达宿主大肠杆菌BL2 1(DE3)PLysS菌株内 ,对转化菌株以IPTG进行诱导后 ,破菌 ,离心 ,上清进行SDS_PAGE电泳 ,电泳发现转化了重组质粒的菌株有表达蛋白 ,所表达的蛋白质相对分子质量为 30 0 0 0、6 0 0 0、5 0 0 0 0。结果表明 :目的基因克隆到菌株内 ,重组结核杆菌分泌蛋白Ag85B、ESAT_6、MPT_6 4的成功表达为结核病诊断、重组疫苗应用和免疫效应检测以及上述三种抗原。 展开更多
关键词 基因表达 人畜共患病 结核分枝杆菌 分泌蛋白 原核 表达载体 克隆
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黑曲霉F246的phyA基因克隆及其新型表达载体构建 被引量：5
13
作者 霍丹群 范守城 +2 位作者 张云茹 侯长军 范首君 《重庆大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第8期60-64,74,共6页
利用PCR法直接从自行筛选、鉴定的黑曲霉F246中扩增出phyA基因,再将PCR产物重组于乳酸菌表达载体pMG36e,构建phyA基因的新型表达载体pMG36e-phyA。以黑曲霉F246基因组为模板,对phyA基因的成熟肽(1347bp)进行PCR扩增。再将PCR产物克隆入p... 利用PCR法直接从自行筛选、鉴定的黑曲霉F246中扩增出phyA基因,再将PCR产物重组于乳酸菌表达载体pMG36e,构建phyA基因的新型表达载体pMG36e-phyA。以黑曲霉F246基因组为模板,对phyA基因的成熟肽(1347bp)进行PCR扩增。再将PCR产物克隆入pMD18T质粒,经DNA测序和氨基酸分析、鉴定正确后,亚克隆入乳酸菌表达质粒pMG36e,构建工程菌LactobacillusMG1363 pMG36e phyA。重组乳酸菌表达载体pMG36e-phyA的构建,可望获得大量、高活性植酸酶,为研制多功能微生态制剂奠定基础。 展开更多
关键词 植酸酶 克隆 表达载体 乳酸菌
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口蹄疫病毒非结构蛋白3B真核表达载体的构建及表达 被引量：7
14
作者 尤永进 葛艳 +5 位作者 陈波 饶忠 徐泉兴 朱彩珠 张强 卢永干 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期168-171,共4页
设计、合成FMDV非结构蛋白 3B基因的PCR引物 ,并在引物 5’端和 3’端分别加入含BamHI和HindⅢ限制性酶切位点序列。以FMDV基因组RNA为模板 ,利用RT_PCR技术扩增 3B基因 ,得到的基因片段经BamHI/HindⅢ双酶切后与转座载体pFASTBACHTa连... 设计、合成FMDV非结构蛋白 3B基因的PCR引物 ,并在引物 5’端和 3’端分别加入含BamHI和HindⅢ限制性酶切位点序列。以FMDV基因组RNA为模板 ,利用RT_PCR技术扩增 3B基因 ,得到的基因片段经BamHI/HindⅢ双酶切后与转座载体pFASTBACHTa连接 ,转化宿主菌DH10BAC ,在含庆大霉素、卡那霉素、X_gal、IPTG的LB平板上 37℃培养 2 4h ,提取白色菌落 ,从中提取重组穿梭载体Bacmid 3B ,与脂质体共同转染昆虫细胞sf9,得到重组杆状病毒 ,病毒经传代扩增后感染High 5细胞 ,表达目的蛋白———FMDV非结构蛋白 3B。SDS_PAGE及WesternBlot结果显示 ,本研究成功构建了Bacmid_3B重组表达载体 ,并在昆虫细胞中表达了NSP_3B蛋白 ,该表达产物可与FMDV感染的猪、牛血清产生免疫反应。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 非结构蛋白 真核表达载体 克隆 表达
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萼脊兰MADS-box基因的克隆及表达载体构建 被引量：7
15
作者 蒋素华 黄萍 +3 位作者 王默霏 梁芳 许申平 崔波 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2017年第3期65-69,共5页
为了研究"ABC"模型的B类PI基因,探究决定花瓣和雄蕊形成的基因特征。采用CTAB法提取萼脊兰花瓣总RNA,并通过RT-PCR法克隆萼脊兰PI基因的编码序列,该序列长度为633 bp,编码210个氨基酸,与小兰屿蝴蝶兰的氨基酸相似性最高。对P... 为了研究"ABC"模型的B类PI基因,探究决定花瓣和雄蕊形成的基因特征。采用CTAB法提取萼脊兰花瓣总RNA,并通过RT-PCR法克隆萼脊兰PI基因的编码序列,该序列长度为633 bp,编码210个氨基酸,与小兰屿蝴蝶兰的氨基酸相似性最高。对PI所表达蛋白质的结构、亲水性和二级结构进行了分析,结果显示,该基因包含MADS-box和K-box保守结构域,属于MADS-box基因家族;该蛋白分子属于亲水性蛋白,包含56.19%α螺旋、13.81%的延伸链以及30%的不规则折叠,实时荧光定量PCR结果显示,PI基因主要在花器官中表达,且表达量高,说明PI基因的表达具有组织特异性。构建植物表达载体的结果显示,目的基因和带启动子的片段已插入到表达载体p CAMBIA1301中,表明成功构建植物表达载体1301-PI,为最终获得新奇花型的萼脊兰奠定基础。 展开更多
关键词 萼脊兰 PI基因 克隆 表达分析 表达载体
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贵州地区羊口疮病毒B2L基因克隆及原核表达载体构建 被引量：14
16
作者 向智龙 卓建华 +5 位作者 程振涛 欧德渊 鲜思美 尹传宝 黄璐 禾彩红 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第7期76-79,共4页
用H2L基因特异性引物对羊口疮临床疑似病料进行鉴定,采用PCR扩增出阳性样品羊口疮病毒结构蛋白B2L基因,回收纯化PCR产物,克隆至pMD18-T,测序结果表明插入的片段为目的基因,全长1137 bp。将目的基因定向克隆至pET-32a构建了B2L基因原核... 用H2L基因特异性引物对羊口疮临床疑似病料进行鉴定,采用PCR扩增出阳性样品羊口疮病毒结构蛋白B2L基因,回收纯化PCR产物,克隆至pMD18-T,测序结果表明插入的片段为目的基因,全长1137 bp。将目的基因定向克隆至pET-32a构建了B2L基因原核表达载体pET-32a-B2L,经PCR鉴定、酶切及进一步测序证明表达载体构建成功,为下一步的表达及基因工程疫苗的研究奠定了良好基础。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 克隆 原核表达载体
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牡丹PsMADS5基因的克隆、表达及载体构建 被引量：12
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作者 任磊 王雁 +1 位作者 周琳 彭镇华 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期939-944,共6页
以牡丹品种赵粉(Paeonia suffruticosa L.cv.Zhao Fen)为试材,采用RT-PCR和RACE法从花瓣中获得了1个牡丹SEPALLATA基因cDNA,命名为PsMADS5,GenBank登录号为HQ449569。其cDNA全长1222bp,包含190bp的5'非编码区、302bp的3'非编码... 以牡丹品种赵粉(Paeonia suffruticosa L.cv.Zhao Fen)为试材,采用RT-PCR和RACE法从花瓣中获得了1个牡丹SEPALLATA基因cDNA,命名为PsMADS5,GenBank登录号为HQ449569。其cDNA全长1222bp,包含190bp的5'非编码区、302bp的3'非编码区和1个长度为732bp编码243个氨基酸的开放阅读框。序列比对和系统进化分析表明,PsMADS5与葡萄的亲缘关系最近,相似性达83%以上,属于MADS家族SEP亚家族。相对荧光定量PCR分析表明,PsMADS5在花瓣中的表达量最高,其次是心皮,再次是萼片,在雄蕊中表达量最低。成功构建正义和反义表达载体,为牡丹花型改良和品种创新提供基础。 展开更多
关键词 牡丹 基因克隆 表达 载体构建
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人LIGHT基因的克隆及其重组腺病毒载体的构建 被引量：8
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作者 吴东 沈锋 +2 位作者 娄永华 焦炳华 吴孟超 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期121-124,共4页
目的　　克隆人ＬＩＧＨＴ基因，构建其重组腺病毒载体，以研究ＬＩＧＨＴ过表达与腺病毒感染对细胞生长的影响。方法用ＲＴ－ＰＣＲ法从人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中克隆人的ＬＩＧＨＴ全长基因。将ＬＩＧＨＴ　ｃＤＮＡ克隆到穿... 目的　　克隆人ＬＩＧＨＴ基因，构建其重组腺病毒载体，以研究ＬＩＧＨＴ过表达与腺病毒感染对细胞生长的影响。方法用ＲＴ－ＰＣＲ法从人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中克隆人的ＬＩＧＨＴ全长基因。将ＬＩＧＨＴ　ｃＤＮＡ克隆到穿棱载体ｐＡｄＴｒａｃｋ－ＣＭＶ－ＬＩＧＨＴ重组质粒中，经酶切线性化后，将重组质粒ｐＡｄＴｒａｃｋ－ＣＭＶ－ＬＩＧＨＴ和骨架质粒ｐＡｄＥａｓｙ－１，以电穿孔法共转染大肠杆菌ＢＪ５１８３，获得重组腺病毒质粒。最后，将线性化的重组腺病毒质粒转染２９３细胞包装获得重组腺病毒，用荧光显微镜、ＰＣＲ及Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ分析ＬＩＧＨＴ基因的表达。　结果　用ＲＴ－ＰＣＲ法从人的ＰＢＭＣ中，扩增出７２３　ｂｐ的ｃＤＮＡ，测序证实为人ＬＩＧＨＴ基因。荧光显微镜、ＰＣＲ及Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ证实，ＬＩＧＨＴ重组腺病毒可感染２９３细胞，并在２９３细胞内进行有效的复制。结论成功地克隆了人ＬＩＧＨＴ基因，并构建了其重组腺病毒载体，为进一步研究ＬＩＧＨＴ基因的功能提供了条件。 展开更多
关键词 腺病毒 表达载体 人LIGHT基因 基因克隆 肿瘤 基因治疗
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梭梭CMO基因的克隆与植物表达载体的构建 被引量：11
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作者 石磊 甘晓燕 +3 位作者 夏兴雷 陈虞超 李苗 宋玉霞 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期1514-1519,共6页
采用RT-PCR、RACE等方法从超旱生耐盐植物梭梭（Haloxylon ammodendron）中扩增出甜菜碱合成过程中的限速酶胆碱单加氧酶（CMO）编码基因的cDNA序列（命名为HaCMO）,其开放阅读框为1 344 bp,推测的氨基酸序列全长为447个氨基酸残基.根... 采用RT-PCR、RACE等方法从超旱生耐盐植物梭梭（Haloxylon ammodendron）中扩增出甜菜碱合成过程中的限速酶胆碱单加氧酶（CMO）编码基因的cDNA序列（命名为HaCMO）,其开放阅读框为1 344 bp,推测的氨基酸序列全长为447个氨基酸残基.根据已获得的开放阅读框,构建重组植物表达载体pCAMBIA2300-HaCMO.HaCMO核苷酸序列与藜科几种盐生植物如菠菜（Spinacia oleracea）、山菠菜（Atriplex hortensis）、辽宁碱蓬（Suaeda liaotungensis）、盐角草（Salicornia europaea）和甜菜（Beta vulgaris）等的一致性均在74.5%以上,推导编码蛋白的氨基酸序列一致性均在73.5%以上,表明CMO编码基因在藜科植物中是一种比较保守的基因.研究结果为进一步从分子水平探明梭梭的抗旱、耐盐机制,挖掘并利用植物抗逆基因奠定了基础. 展开更多
关键词 梭梭 胆碱单加氧酶 基因克隆 植物表达载体
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激发子隐地蛋白(cryptogein)基因的克隆及其植物表达载体的构建 被引量：6
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作者 蒋冬花 孔世海 郭泽建 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期649-654,共6页
从隐地疫霉(Phytophthoracryptogea)中克隆cryptogein蛋白激发子基因,经测序证实后.针对病原菌侵染和cryptogein基因本身的特点,选用能在根、茎、叶等的表皮细胞中特异性表达的、弱组成型、并受病原菌诱导的水稻苯丙氨酸解氨酶基因(PAL... 从隐地疫霉(Phytophthoracryptogea)中克隆cryptogein蛋白激发子基因,经测序证实后.针对病原菌侵染和cryptogein基因本身的特点,选用能在根、茎、叶等的表皮细胞中特异性表达的、弱组成型、并受病原菌诱导的水稻苯丙氨酸解氨酶基因(PAL)的启动子;同时为了使表达的cryptogein蛋白能分泌到细胞外,更好地与植物细胞膜受体互作,在cryptogein基因前还融合了烟草病程相关蛋白PR1b的信号肽.然后将此融合基因克隆到植物表达载体CHF3中,获得植物双元表达载体CHF3-PAL-PR1b-Cry,再将此载体转入根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)EHA105中. 展开更多
关键词 激发子 隐地蛋白 CRYPTOGEIN 植物表达载体 基因克隆 植物病害
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