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运用实时荧光RT-PCR技术检测柑橘碎叶病毒 被引量：12
1
作者 刘科宏 周常勇 +3 位作者 宋震 周彦 李中安 唐科志 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期748-751,共4页
柑橘碎叶病是由橘碎叶病毒(Citrus tatter leaf virus,CTLV)引起的一种重要的柑橘病害,为更快、更准确的检测CTLV,合成了一对特异性引物ASG-Pf和ASG-Pr,建立了运用SYBRGreenI荧光染料法检测CTLV的实时荧光RT-PCR体系,并对该体系的特异... 柑橘碎叶病是由橘碎叶病毒(Citrus tatter leaf virus,CTLV)引起的一种重要的柑橘病害,为更快、更准确的检测CTLV,合成了一对特异性引物ASG-Pf和ASG-Pr,建立了运用SYBRGreenI荧光染料法检测CTLV的实时荧光RT-PCR体系,并对该体系的特异性、灵敏性和适用性进行了测试。结果表明,该检测体系能特异的检出CTLV,对测试的衰退病毒、温州蜜柑萎缩病毒和鳞皮病毒都不能检出;灵敏度比常规PCR高100倍;适用性广,可检测出多种柑橘类植物中的CTLV。实时荧光RT-PCR检测整个过程完全闭管,无需PCR后处理,且SYBR GreenI荧光染料成本较低,适用于检测柑橘体内含量较低的CTLV病毒。 展开更多
关键词 柑橘碎叶病毒(ctlv) 实时荧光RT—PCR 检测
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柑橘碎叶病毒研究进展 被引量：11
2
作者 孙现超 周常勇 +1 位作者 青玲 杨水英 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期213-216,共4页
起源于我国的柑橘碎叶病是严重危害柑橘的一种重要柑橘病毒病,国内外关于柑橘碎叶病毒的研究对于控制该病害起到了重要的作用。概述了国内外关于柑橘碎叶病毒的生物学、分子生物学、病毒的株系和控制方面的研究进展,尤其是对近些年用分... 起源于我国的柑橘碎叶病是严重危害柑橘的一种重要柑橘病毒病,国内外关于柑橘碎叶病毒的研究对于控制该病害起到了重要的作用。概述了国内外关于柑橘碎叶病毒的生物学、分子生物学、病毒的株系和控制方面的研究进展,尤其是对近些年用分子生物学方法研究病毒的基因组和株系序列差异方面的情况作了详细的介绍。并对柑橘碎叶病毒研究仍未解决的问题和进一步深入研究的内容进行了分析探讨。 展开更多
关键词 柑橘碎叶病毒 生物学 分子生物学 株系 控制
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柑橘碎叶病毒巢式RT-PCR检测方法建立及应用 被引量：12
3
作者 宋震 周常勇 +1 位作者 刘科宏 李中安 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期458-462,共5页
柑橘碎叶病毒(Citrus tatter leaf virus,CTLV)是威胁柑橘生产的重要病原之一。本研究在柑橘碎叶病毒一步法RT-PCR检测体系的基础上建立了CTLV的巢式RT-PCR检测方法,并对其检测灵敏度及特异性进行了分析。结果表明,该方法检测灵敏度比... 柑橘碎叶病毒(Citrus tatter leaf virus,CTLV)是威胁柑橘生产的重要病原之一。本研究在柑橘碎叶病毒一步法RT-PCR检测体系的基础上建立了CTLV的巢式RT-PCR检测方法,并对其检测灵敏度及特异性进行了分析。结果表明,该方法检测灵敏度比一步法RT-PCR至少提高100倍,检测模板总核酸的最低浓度约1.27μg·L-1,具有良好的特异性。在对142个田间样品、24个茎尖苗及20个接毒的腊斯克枳橙的检测中,巢式RT-PCR的CTLV检出率最高,为21.5%,比半巢式RT-PCR检出率高3.2%,比一步法RT-PCR检出率高2.1%。该方法灵敏度高,特异性强,适用于对无病毒苗木生产的监控和田间样品的快速检测。 展开更多
关键词 柑橘碎叶病毒 巢式RT-PCR 检测技术
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砂糖橘上碎叶病毒外壳蛋白基因的克隆及序列分析 被引量：4
4
作者 孟祥春 向旭 +2 位作者 钟云 刘岩 易干军 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期796-798,共3页
利用RT-PCR技术对广东砂糖橘碎叶病毒的外壳蛋白(CTLV-CP)基因进行了克隆和测序分析。DNA序列分析表明,砂糖橘CTLV-CP基因的cDNA序列全长为786bp,编码262个氨基酸。BLAST分析结果显示,所得序列与苹果、梨茎沟病毒(ASGV)外壳蛋白基因及... 利用RT-PCR技术对广东砂糖橘碎叶病毒的外壳蛋白(CTLV-CP)基因进行了克隆和测序分析。DNA序列分析表明,砂糖橘CTLV-CP基因的cDNA序列全长为786bp,编码262个氨基酸。BLAST分析结果显示,所得序列与苹果、梨茎沟病毒(ASGV)外壳蛋白基因及其它柑橘CTLV-CP基因的同源性在87%～91%,证明所克隆的片段为CTLV-CP基因。 展开更多
关键词 砂糖橘 碎叶病毒(ctlv) 外壳蛋白(CP) 克隆
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8种柑橘类植物对柑橘碎叶病毒分子组成的影响 被引量：3
5
作者 刘科宏 宋震 +2 位作者 周彦 李中安 周常勇 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期90-93,共4页
探究不同柑橘类型对柑橘碎叶病毒(Citrus tatter leaf virus,CTLV)变异的影响,为研究寄主-CTLV的互作关系提供基础。将CTLV分离株HH和XLB分别嫁接接种于8种柑橘类植物,对CTLV分离株和获得的亚分离株样品进行CP基因的限制性长度多态性(RF... 探究不同柑橘类型对柑橘碎叶病毒(Citrus tatter leaf virus,CTLV)变异的影响,为研究寄主-CTLV的互作关系提供基础。将CTLV分离株HH和XLB分别嫁接接种于8种柑橘类植物,对CTLV分离株和获得的亚分离株样品进行CP基因的限制性长度多态性(RFLP)和单链构象多态性(SSCP)分析,以及序列比较。结果表明HH和XLB与其各自在不同柑橘植株上的亚分离株的CP/Hinf I RFLP酶切图谱无明显差异;混合侵染的CTLV分离株HH和其亚分离株之间的SSCP谱型存在差异,株系构成单一的CTLV分离株XLB与其亚分离株间的SSCP谱型差异不明显。通过序列分析进一步证实CTLV在不同寄主上其CP基因有几个核苷酸位点发生了变异。CTLV可能受寄主植物的影响发生了变异。 展开更多
关键词 柑橘 柑橘碎叶病毒 CP基因
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柑橘碎叶病毒外壳蛋白基因的原核表达 被引量：3
6
作者 段硕 李敏 +3 位作者 陶珍珍 宋震 李中安 周常勇 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期744-747,共4页
【目的】获得原核表达的柑橘碎叶病毒(Citrus tatter leaf virus,CTLV)的外壳蛋白(Coat protein,CP)。【方法】以感染CTLV的柑橘叶片总RNA为模板,根据已报道CTLV设计引物,运用一步法RT-PCR对CTLV的CP进行扩增并克隆,并将CP克隆至表达载... 【目的】获得原核表达的柑橘碎叶病毒(Citrus tatter leaf virus,CTLV)的外壳蛋白(Coat protein,CP)。【方法】以感染CTLV的柑橘叶片总RNA为模板,根据已报道CTLV设计引物,运用一步法RT-PCR对CTLV的CP进行扩增并克隆,并将CP克隆至表达载体pET28a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达获得表达蛋白。【结果】扩增测序结果显示,克隆产物CP区域序列全长714 bp,与已报道CP核苷酸序列(GenBank序列号:FJ223212)相似性达100%,推测编码238个氨基酸,表达蛋白的大小约27 kD。重组质粒经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析结果显示,重组质粒高效表达约30 kD蛋白,酶联免疫吸附(Enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)检测结果表明,该蛋白稀释5000倍仍能与苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus,ASGV)抗体发生阳性反应,证实表达蛋白为CTLV的CP。【结论】克隆了CTLV的CP,通过原核表达系统高效表达了CTLV的CP,为制备CTLV抗体奠定了基础。 展开更多
关键词 柑橘碎叶病毒 CP 原核表达 蛋白纯化
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脱除柑桔碎叶病病毒的初步研究 被引量：3
7
作者 宋瑞琳 吴如健 +2 位作者 陈菁瑛 黄兆才 陈景耀 《福建省农科院学报》 1994年第1期57-59,共3页
对感染碎叶病毒的柑桔植株分别进行茎尖嫁接，热处理和预热处理结合茎尖嫁接的脱毒试验。白天４０℃１６ｈ，夜间３０℃８ｈ，预热处理３０天以上的柑桔植株再进行茎尖嫁接，均能获得良好的脱毒效果。但是，若茎尖取０．４ｍｍ或更长就... 对感染碎叶病毒的柑桔植株分别进行茎尖嫁接，热处理和预热处理结合茎尖嫁接的脱毒试验。白天４０℃１６ｈ，夜间３０℃８ｈ，预热处理３０天以上的柑桔植株再进行茎尖嫁接，均能获得良好的脱毒效果。但是，若茎尖取０．４ｍｍ或更长就没有得到脱毒植株。单用茎尖嫁接方法不能脱除碎叶病病毒；单用热处理方法虽也获得过无碎叶病的植株，但要取得满意的脱除效果是很困难的。 展开更多
关键词 柑桔 碎叶病 病毒 脱除
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枳砧甜橙黄化问题的研究 被引量：3
8
作者 吴世盘 李学柱 +1 位作者 吴泰旭 周友智 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 1991年第3期28-32,共5页
枳砧嫁接各种柑桔类品种,只有少酸类甜橙发生黄化。不同株系枳的单株嫁接甜橙,黄化程度有明显差异,用茎尖脱毒的暗柳橙接穗嫁接成苗后出现的黄化率反而高于用黄化的改良橙接穗。 在防虫网室中用实生暗柳橙接穗嫁接小叶大花系枳出现7.4... 枳砧嫁接各种柑桔类品种,只有少酸类甜橙发生黄化。不同株系枳的单株嫁接甜橙,黄化程度有明显差异,用茎尖脱毒的暗柳橙接穗嫁接成苗后出现的黄化率反而高于用黄化的改良橙接穗。 在防虫网室中用实生暗柳橙接穗嫁接小叶大花系枳出现7.4％的黄化株和59.2％轻度黄化株,在这些黄化株上嫁接腊斯克枳橙不表现碎叶病症状,因而认为枳砧甜橙黄化系嫁接不亲和引起,与碎叶病毒无关。 展开更多
关键词 柑桔 黄化 嫁接 不亲和 碎叶病毒
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浙江南部柑桔病毒病和类似病毒病鉴定 被引量：1
9
作者 谢佩华 金显忠 何献武 《中国柑桔》 1992年第4期13-17,共5页
应用指示植物对采自浙南8个县(市、区)28个乡镇田间40个柑桔品种133份样品的带毒情况进行了检测。结果表明:浙南至少已发生4种柑桔病毒病或类似病毒病害。感染了碎叶病毒(TLV)的有8个品种,衰退病毒(CTV)18个品种,裂皮病类病毒(CEV)11个... 应用指示植物对采自浙南8个县(市、区)28个乡镇田间40个柑桔品种133份样品的带毒情况进行了检测。结果表明:浙南至少已发生4种柑桔病毒病或类似病毒病害。感染了碎叶病毒(TLV)的有8个品种,衰退病毒(CTV)18个品种,裂皮病类病毒(CEV)11个品种,黄龙病类细菌(CYS)2个品种。共计有27个品种感染1种或1种以上病毒类病害,其中感染3种的有2个品种,感染2种的有9个品种。 展开更多
关键词 柑桔类果树 病毒病 鉴定
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柑橘碎叶病毒分离株全基因组遗传多样性及遗传进化分析
10
作者 邓国荣 谢祥恩 +2 位作者 张朝玉 邓越英 陈毅群 《福建农业科技》 2025年第6期80-86,共7页
为明确柑橘碎叶病毒(Citrus tatter leaf virus,CTLV)的遗传多样性及进化特征,对7个不同柑橘种的41份CTLV分离株全基因组进行遗传多样性及遗传进化分析。结果表明:不同柑橘种的41份CTLV分离株碱基组成呈AT偏好,碱基转换与颠换比值为2.87... 为明确柑橘碎叶病毒(Citrus tatter leaf virus,CTLV)的遗传多样性及进化特征,对7个不同柑橘种的41份CTLV分离株全基因组进行遗传多样性及遗传进化分析。结果表明:不同柑橘种的41份CTLV分离株碱基组成呈AT偏好,碱基转换与颠换比值为2.875~5.112,核苷酸多样性Pi值为0.030~0.177,单倍型多样性Hd值为0.900~1.000;中性检验值多为负值且不显著,表明种群未历经扩张事件;非同义突变与同义突变比值在0.059~0.754,为负向选择;分子变异分析(AMOVA)中FST值为0.193,种群间存在较大遗传分化,且变异主要源于种群内部;系统进化分析表明,CTLV分离株的聚类不存在明显的寄主特异性。研究显示41份CTLV分离株具有高核苷酸和单倍型多样性,基因突变和负向选择是其遗传进化的关键驱动力,而寄主差异对CTLV遗传进化影响较小。 展开更多
关键词 柑橘碎叶病毒 遗传多样性 全基因组 遗传进化
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