基于PERK-eIF2α-ATF4-CHOP通路探讨中医药干预糖尿病肾病的作用机制

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作者 王茂泓 郑航 +1 位作者 李雪 张珍珍 《科学技术与工程》 北大核心 2025年第8期3079-3088,共10页

糖尿病肾病发病机制复杂,最终可进展为终末期肾病,给患者带来沉重负担,目前的治疗手段疗效有限。蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase RNA-like endoplasmic reticulum kinase, PERK)-真核翻译起始因子2α激酶(eukaryotic initiation ... 糖尿病肾病发病机制复杂,最终可进展为终末期肾病,给患者带来沉重负担,目前的治疗手段疗效有限。蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase RNA-like endoplasmic reticulum kinase, PERK)-真核翻译起始因子2α激酶(eukaryotic initiation factor-2α, eIF2α)-转录激活因子4(activating transcription factor 4,ATF4)-C/EBP同源蛋白(C/EBP-homologous protein, CHOP)信号通路作为内质网应激的关键通路,其下游调控的细胞凋亡和自噬等病理过程与糖尿病肾病的进展关系密切。中医药通过益气养阴、健脾益肾、利水消肿、清热解毒、活血祛瘀等治法调控PERK-eIF2α-ATF4-CHOP通路,起到保护肾小球滤过屏障、减少毛细血管基底膜增厚、增加尿蛋白质重吸收、延缓肾间质纤维化的作用。阐释PERK-eIF2α-ATF4-CHOP信号通路在糖尿病肾病中的作用机制,归纳中医治法干预该通路的理论基础,总结中药有效成分干预该通路的作用机制的研究进展,旨在为中医药防治糖尿病肾病提供新的思路和方法。 展开更多

关键词 中医药 糖尿病肾病 内质网应激 蛋白激酶R样内质网激酶-c/ebp同源蛋白(PERK-cHOP)信号通路

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流体剪应力对人脐静脉内皮细胞葡萄糖调节蛋白78和C/EBP同源蛋白表达的影响

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作者 张森 王先伟 +3 位作者 黄家明 张昊然 李梅 陈东 《中国脑血管病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期388-395,共8页

目的探索流体剪应力对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和C/EBP同源蛋白(CHOP)表达的影响。方法以HUVECs作为实验细胞,设计并构建流体动力学模拟实验系统,控制流体动力学模拟实验系统中灌流液的流速,以实现对实验细胞... 目的探索流体剪应力对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和C/EBP同源蛋白(CHOP)表达的影响。方法以HUVECs作为实验细胞,设计并构建流体动力学模拟实验系统,控制流体动力学模拟实验系统中灌流液的流速,以实现对实验细胞施加不同的流体剪应力。按实验细胞在实验系统中所承受的不同流体剪应力,将实验细胞分为低剪应力组(A组;0.4 Pa)、中剪应力组(B组;0.8 Pa)和高剪应力组(C组;1.2 Pa)。每组HUVECs包含3个细胞玻片,每个玻片经实验系统灌流液反复循环流经12 h。采用蛋白质印迹法对各组细胞中GRP78和CHOP蛋白水平进行检测,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应技术测定各组细胞GRP78和CHOP蛋白及其信使RNA(mRNA)相对水平。应用GraphPad Prism 8.0软件对数据进行统计学分析。结果(1)A、B、C组HUVECs中GRP78蛋白相对表达水平分别为1.33±0.46、0.93±0.34、0.64±0.30;多组间比较差异有统计学意义(F=36.17,P<0.05)。A组GRP78蛋白相对表达水平高于B组、C组(均P<0.01),B组GRP78蛋白相对表达水平高于C组(P=0.0013)。3组HUVECs中CHOP蛋白相对表达水平分别为:A组1.29±0.38,B组0.90±0.34,C组0.59±0.29;多组间比较差异有统计学意义(F=41.27,P<0.05)。A组CHOP蛋白相对表达水平高于B组、C组(均P<0.01),B组CHOP蛋白相对表达水平高于C组(P=0.0004)。(2)A、B、C组HUVECs中GRP78 mRNA相对表达水平分别为18.3±3.4、11.3±1.8、5.4±2.2;多组间比较差异有统计学意义(F=189.20,P<0.05)。A组GRP78 mRNA相对表达水平高于B组、C组(均P<0.01),B组GRP78 mRNA相对表达水平高于C组(P<0.01)。3组HUVECs中CHOP mRNA相对表达水平分别为:A组20.4±3.8,B组14.2±2.1,C组7.8±1.3;多组间比较差异有统计学意义(F=171.80,P<0.05)。A组CHOP mRNA相对表达水平高于B组、C组(均P<0.01),B组CHOP mRNA相对表达水平高于C组(P<0.01)。结论低流体剪应力可能增加HUVECs中GRP78、CHOP的蛋白及其mRNA表达水平。 展开更多

关键词 血流动力学 人脐静脉内皮细胞 内质网应激 流体剪应力 葡萄糖调节蛋白78 c/ebp同源蛋白

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C/EBPβ在人正常肝细胞和肝癌细胞系中的差异表达及其与内质网应激相关细胞死亡的关系 被引量：1

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作者 卢新兰 卢桂芳 +6 位作者 王新 张俊 张丹 赵艳 闫红林 任牡丹 和水祥 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期487-491,共5页

目的观察转录因子C/EBPβ在人永生化正常肝细胞和肝癌细胞系中的表达差异性,探讨其与肝癌细胞内质网应激介导的细胞死亡的相关性。方法培养人永生化正常肝细胞系HHL5、HL7702和肝癌SMMC7721、Bel7402、HepG2、Hep3B细胞系;Hep3B细胞用... 目的观察转录因子C/EBPβ在人永生化正常肝细胞和肝癌细胞系中的表达差异性,探讨其与肝癌细胞内质网应激介导的细胞死亡的相关性。方法培养人永生化正常肝细胞系HHL5、HL7702和肝癌SMMC7721、Bel7402、HepG2、Hep3B细胞系;Hep3B细胞用衣霉素诱导内质网应激细胞模型;倒置光学显微镜下观察细胞形态;MTT法检测细胞生长抑制率;Hoechst 33258染色后荧光显微镜下检测细胞凋亡;RT-PCR和Western blotting技术分别检测mRNA和蛋白的表达水平。结果 C/EBPβ的mRNA和蛋白亚型C/EBPβ-1在4种人肝癌细胞系和永生化正常肝细胞系中均有表达,但C/EBPβ-3仅在人永生化正常肝细胞系中表达,在肝癌细胞系中不表达;衣霉素能够上调人肝癌Hep3B细胞C/EBPβ的mRNA和蛋白表达水平,明显上调C/EBPβ-3的表达水平;衣霉素能够诱导人肝癌Hep3B细胞内质网应激介导的细胞死亡,表现为细胞凋亡和类凋亡两种方式。结论 C/EBPβ的蛋白亚型C/EBPβ-3在人永生化正常肝细胞中表达而在肝癌细胞中不表达;C/EBPβ参与内质网应激介导的人肝癌细胞死亡。 展开更多

关键词 肝细胞癌 c/ebpΒ 内质网应激 细胞凋亡 类凋亡

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内质网应激通过C/EBP同源蛋白调控死亡受体5对肝星状细胞凋亡的影响 被引量：2

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作者 谢加力 李俊 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2020年第2期159-166,共8页

目的:研究内质网应激(ERS)与肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对肝星状细胞凋亡的影响以及在凋亡过程中二者相互关系。方法:以大鼠肝星状细胞HSC-T6为研究对象,使用毒胡萝卜素作为内质网应激诱导剂,熊去氧胆酸作为内质网应激抑制剂,... 目的:研究内质网应激(ERS)与肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对肝星状细胞凋亡的影响以及在凋亡过程中二者相互关系。方法:以大鼠肝星状细胞HSC-T6为研究对象,使用毒胡萝卜素作为内质网应激诱导剂,熊去氧胆酸作为内质网应激抑制剂,SP600125作为c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂,将HSC-T6分成正常组、DMSO组、TRAIL组、毒胡萝卜素组、熊去氧胆酸组、siCHOP组及SP600125组。利用流式法检测毒胡萝卜素诱导HSC-T6凋亡程度;应用小分子RNA干扰技术沉默CHOP基因;免疫组化法检测Caspase-8表达;RT-PCR与Western blot法检测ERS标志性蛋白C/EBP同源蛋白(CHOP)及肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis inducing ligand,TRAIL)受体死亡受体5(DR5)的表达。结果:随着毒胡萝卜素浓度增加(1μmol/L,2μmol/L,4μmol/L,8μmol/L,16μmol/L),可诱导HSC-T6发生不同程度的凋亡。RT-PCR与Western blot结果表明ERS标志性蛋白CHOP可诱导TRAIL受体DR5及Caspase-8表达上调;同时,siCHOP及JNK抑制剂SP600125的应用,均可使HSC细胞中DR5及下游Caspase-8的表达随之减少。结论:CHOP和JNK可能是调节DR5表达的潜在因子,两者在诱导肝星状细胞凋亡的过程中发挥着重要的作用。 展开更多

关键词 内质网应激 肝星状细胞 c/ebp同源蛋白 c-JUN氨基末端激酶 死亡受体5

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熄风解痉汤调控内质网应激在蛛网膜下腔出血后早期脑损伤中的应用

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作者 向兴刚 周益凡 +4 位作者 依马木·依达依吐拉 赵永 买买江·阿不力孜 林琳 马震 《世界中医药》 北大核心 2025年第11期1889-1897,1905,共10页

目的:探讨熄风解痉汤(XFJJT)对蛛网膜下腔出血(SAH)大鼠早期脑损伤(EBI)中内质网应激(ER应激)的调控作用。方法:将96只无特定病原体(SPF)级SD大鼠随机分为对照组、假手术组(Sham组)、SAH组、SAH+XFJJT组,每组24只。SAH+XFJJT组在造模成... 目的:探讨熄风解痉汤(XFJJT)对蛛网膜下腔出血(SAH)大鼠早期脑损伤(EBI)中内质网应激(ER应激)的调控作用。方法:将96只无特定病原体(SPF)级SD大鼠随机分为对照组、假手术组(Sham组)、SAH组、SAH+XFJJT组,每组24只。SAH+XFJJT组在造模成功后3 h开始给药,每日早、晚灌胃XFJJT 1.5 mL,持续72 h。建模后6、12、24、48、72 h记录Garcia评分;建模后3、6、12、24、48、72 h处死大鼠,苏木精-伊红(HE)染色观察海马神经细胞形态;TUNEL检测神经元凋亡;蛋白免疫印迹检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、CAAT/增强子结合同源蛋白(CHOP)、半胱氨酸酶12(Caspase-12)表达,以及脑含水量和血脑屏障完整性。结果:SAH组6、12、24、48、72 h神经评分低于对照组和Sham组,SAH+XFJJT组高于SAH组(P<0.05);对照组和Sham组各时点GRP78、CHOP、Caspase-12表达低于SAH组(P<0.05),SAH+XFJJT组6、12、24、48、72 h表达低于SAH组(P<0.05);SAH组脑组织伊文思蓝(EB)含量高于对照组和Sham组,SAH+XFJJT组6、48、72 h低于SAH组(P<0.05);SAH组脑组织含水量高于对照组和Sham组,SAH+XFJJT组降低(P<0.05);SAH组6 h TUNEL阳性细胞增多,24 h达高峰,72 h减少,SAH+XFJJT组24、48、72 h凋亡率低于SAH组(P<0.05)。结论:SAH后EBI中存在ER应激反应,XFJJT可调控GRP78、CHOP、Caspase-12表达,改善神经评分,减轻脑含水量,并对血脑屏障通透性产生影响。 展开更多

关键词 熄风解痉汤 蛛网膜下腔出血 内质网应激 早期脑损伤 海马葡萄糖调节蛋白78 cAAT/增强子结合同源蛋白 半胱氨酸酶12 血脑屏障

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降糖舒心方对糖尿病心肌内质网应激c-JNK凋亡旁路的影响 被引量：11

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作者 符显昭 冯雪萍 +5 位作者 黄文华 李春燕 李星婵 丘海先 王清礼 班富度 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2018年第10期2423-2427,I0026-I0029,共9页

目的：探讨降糖舒心方（JTSX）抑制SD糖尿病大鼠心肌细胞内质网应激c-JNK凋亡旁路,减轻糖尿病心肌重构的分子机制。方法：采用高脂饲养＋链脲佐菌素制备2型糖尿病大鼠模型,成模后随机分为模型组、西药组、JTSX低剂量组（JTSX1组）和JTS... 目的：探讨降糖舒心方（JTSX）抑制SD糖尿病大鼠心肌细胞内质网应激c-JNK凋亡旁路,减轻糖尿病心肌重构的分子机制。方法：采用高脂饲养＋链脲佐菌素制备2型糖尿病大鼠模型,成模后随机分为模型组、西药组、JTSX低剂量组（JTSX1组）和JTSX高剂量组（JTSX2组）,另设正常组作对照。相应药物干预8周后,检测空腹血糖（FBG）、血脂、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）变化。用透射电镜观察心肌组织超微结构; TUNEL法检测心肌细胞凋亡水平;用RT-PCR和免疫组化分别检测c-JUN氨酸端激酶（c-JNK）和糖调节蛋白78（GRP78）的mRNA转录及其功能蛋白的表达水平。结果：与模型组相比,各给药组均能明显降低FBG（P 〈0. 05）,升高SOD、GSH-Px（P 〈0. 05）;均可降低TG、LDL-C（P 〈0. 05）,升高HDL-C（P 〈0. 05）;均可下调c-JNK、GRP78mRNA转录及其蛋白表达（P 〈0. 05）,降低心肌细胞凋亡指数（AI）（P 〈0. 05）,并改善心肌组织超微结构;与西药组相比,JTSX2疗效更显著（P 〈0. 05）。结论：JTSX能改善糖尿病代谢紊乱,提高抗氧化应激能力,抑制内质网应激细胞凋亡通路,从而改善心肌重构,疗效具有剂量依赖性。 展开更多

关键词 糖尿病 内质网应激 细胞凋亡 c-JUN氨基端激酶 糖调节蛋白78 心肌重构 降糖舒心方

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内质网应激相关CHOP在SAH后细胞凋亡中的作用及机制 被引量：1

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作者 郝璞珩 王辉 +2 位作者 卫萍 金林 陈斌 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期665-669,共5页

目的探讨内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)相关C/EBP同源蛋白(C/EBP homoiogousprotein,CHOP)在蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)后神经元凋亡的作用机制。方法血管内穿刺方法建立大鼠SAH模型,脑室内给药建立S... 目的探讨内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)相关C/EBP同源蛋白(C/EBP homoiogousprotein,CHOP)在蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)后神经元凋亡的作用机制。方法血管内穿刺方法建立大鼠SAH模型,脑室内给药建立SAH+sh-con组和SAH+sh-RNAi组,应用神经行为学评分法进行神经行为学评分,Real-time PCR检测Caspase-3、Bim、Bcl-2的mRNA表达,Western blot检测CHOP蛋白表达,TUNEL法检测神经元凋亡。结果 SAH组和SAH+sh-con组Caspase-3、Bim mRNA及CHOP蛋白表达较空白组明显增多,Bcl-2mRNA表达减少,神经元凋亡增多(P<0.05);与空白组比较,SAH+sh-RNAi组Caspase-3、Bim mRNA及CHOP蛋白表达增多,Bcl-2mRNA表达减少,神经元凋亡增多,差异有统计学意义(P<0.05),而与SAH组和SAH+sh-con组比较,Caspase-3、Bim mRNA及CHOP蛋白表达减少,Bcl-2mRNA表达增多,神经元凋亡减少,差异具有统计学意义(P<0.05);CHOP蛋白表达增多与神经元凋亡之间存在正相关(r=0.832,P<0.05)。结论 ERS凋亡通路参与了SAH后神经元凋亡过程,抑制CHOP蛋白表达可以有效减少凋亡以改善预后。 展开更多

关键词 蛛网膜下腔出血 早期脑损伤 内质网应激 c/ebp同源蛋白 凋亡

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GRP78和CHOP蛋白表达增加与脓毒性休克大鼠肺血管通透性改变的关系 被引量：5

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作者 胡畔 李涛 +1 位作者 丁晓莉 刘良明 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期854-857,共4页

目的研究脓毒性休克大鼠内质网应激模型中葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein78,GRP78)和C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)蛋白表达的变化及其与血管通透性改变的关系。方法 42只... 目的研究脓毒性休克大鼠内质网应激模型中葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein78,GRP78)和C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)蛋白表达的变化及其与血管通透性改变的关系。方法 42只成年SD大鼠,雌雄各半,体质量200～220 g,随机分为3组:①假手术组;②盲肠造瘘组,按照术后时间长短盲肠造瘘组又分为术后1、2、4、6、8 h等5个亚组;③盲肠造瘘+牛磺酸组(n=6)。用异硫氰酸荧光素标记的牛血清白蛋白注入肺组织,在术后1、2、4、6、8 h时分别取各组相应大鼠肺脏,牛磺酸干预组于术后6 h取出,生理盐水进行肺灌洗,观察其荧光物质渗透率的变化测量肺毛细血管通透性;Western blot方法测量肺血管内皮细胞GRP78和CHOP蛋白的表达并对各组进行比较。结果①大鼠盲肠造瘘术后1、2、4、6、8 h后GRP78和CHOP蛋白表达均呈递增趋势[(P(GRP78)<0.05;P(CHOP)<0.05],肺血管荧光物质渗透率也随着时间的延长呈直线递增的趋势(P=0.006<0.05),盲肠造瘘组各组GRP78和CHOP蛋白的表达与肺血管荧光物质渗透率的改变呈正相关(R2=0.785,P<0.05;R2=0.881,P<0.05);②牛磺酸处理后,6 h点肺血管荧光物质渗透率显著低于单纯盲肠造瘘术后(P=0.007<0.05),GRP78和CHOP蛋白的表达也较盲肠造瘘组低(P=0.004<0.05)。结论脓毒性休克内质网应激参与了血管通透性增高的发生,GRP78和CHOP蛋白为重要的参与分子。 展开更多

关键词 内质网应激 GRP78 cHOP 脓毒性休克 血管通透性

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单宁酸调控ATF6-CHOP通路增强顺铂诱导肝癌HepG2细胞凋亡的作用 被引量：3

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作者 耿娜娜 吴明松 +3 位作者 郑翔 杨蕾 王宏阳 李学英 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2018年第1期12-15,共4页

目的检测内质网应激ATF6-CHOP通路的激活水平,以探究单宁酸(TA)联合顺铂(CDDP)抗肝癌的分子机制。方法用180μmol/L TA、0.9μg/m L CDDP单独用药或者联合用药处理肝癌Hep G2细胞24和48 h后,利用实时荧光定量PCR(q-RT-PCR)、蛋白免疫印... 目的检测内质网应激ATF6-CHOP通路的激活水平,以探究单宁酸(TA)联合顺铂(CDDP)抗肝癌的分子机制。方法用180μmol/L TA、0.9μg/m L CDDP单独用药或者联合用药处理肝癌Hep G2细胞24和48 h后,利用实时荧光定量PCR(q-RT-PCR)、蛋白免疫印迹(Western Blot)技术检测细胞ATF6(ATF6α)、ATF6B(ATF6β)和CHOP的表达水平。结果药物处理24和48 h后,与对照组相比,TA组、CD-DP组和联合用药组ATF6 m RNA和蛋白水平、ATF6B蛋白水平、CHOP m RNA和蛋白水平均显著升高(P<0.01或P<0.05)。结论 TA能够联合CDDP增强肝癌Hep G2细胞内质网应激ATF6-CHOP通路的激活水平,ATF6-CHOP通路可能是TA和CDDP协同抗肝癌的分子机制之一。 展开更多

关键词 单宁酸 顺铂 肝癌 内质网应激 转录活化因子6 c/ebp同源蛋白

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芹菜素对妊娠期糖尿病大鼠内质网应激CHOP信号通路的影响 被引量：7

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作者 陈雪宁 黄河 +3 位作者 蔡志善 符大天 杨树博 张蕾 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2021年第2期45-50,共6页

目的探讨芹菜素(AP)对妊娠糖尿病(GDM)大鼠胰腺组织内质网应激增强子结合(C/EBP)同源蛋白(CHOP)信号通路的影响。方法将受孕后的育龄雌性SD大鼠随机分为正常妊娠组(Normal组)、模型组(GDM组)、AP低(0.23 g/kg)、中(0.46 g/kg)、高(0.92 ... 目的探讨芹菜素(AP)对妊娠糖尿病(GDM)大鼠胰腺组织内质网应激增强子结合(C/EBP)同源蛋白(CHOP)信号通路的影响。方法将受孕后的育龄雌性SD大鼠随机分为正常妊娠组(Normal组)、模型组(GDM组)、AP低(0.23 g/kg)、中(0.46 g/kg)、高(0.92 g/kg)剂量组、胰岛素阳性组(20 U/kg),每组10只。除Normal组外,其余各组均在受孕当日经腹腔注射链脲佐菌素(STZ)45 mg/kg建立GDM模型;各组均在妊娠第5天开始给药,AP各剂量组灌胃给予相应剂量AP,胰岛素阳性组经皮下注射相应剂量胰岛素,Normal组和GDM组灌胃给予相应剂量生理盐水,各组均连续给药2周,每天1次。各组大鼠末次给药12 h后,用试剂盒检测空腹血糖(FBG)含量及胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);采用苏木精-伊红染色(HE)观察胰腺组织形态学改变;TUNEL法检测胰岛细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测胰腺组织内质网应激CHOP通路相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12(caspase-12)相对表达水平。结果与Normal组相比,GDM组大鼠FBG含量、HOMA-IR、胰岛细胞凋亡率及胰腺组织损伤、胰腺组织GRP78、caspase-12及CHOP蛋白表达均升高(P<0.05);与GDM组相比,AP低、中、高剂量组及阳性组FBG含量、HOMA-IR、胰岛细胞凋亡率及胰腺组织损伤、胰腺组织GRP78、caspase-12及CHOP蛋白表达均降低(P<0.05),且AP各剂量组上述指标呈剂量依赖性降低;与AP高剂量组相比,阳性组上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论AP可抑制GDM大鼠胰腺组织GRP78/CHOP/caspase-12信号通路蛋白表达,降低胰腺组织ERS,改善GDM大鼠胰腺组织损伤和胰岛细胞凋亡。 展开更多

关键词 芹菜素 妊娠糖尿病 增强子结合同源蛋白通路 内质网应激 胰腺

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砷及MPST过表达对SH-SY5Y细胞GRP78/CHOP通路的影响 被引量：2

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作者 李成 楼迪栋 +3 位作者 齐晓岚 范海琼 朱卫 潘际刚 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期131-135,共5页

目的探讨内质网应激是否参与亚砷酸钠(NaAsO2)神经毒性损伤,明确3-巯基丙酮酸硫转移酶(3-mercaptopyruvate sulfurtransferase,MPST)过表达是否调节砷诱导的内质网应激。方法通过构建MPST基因慢病毒表达载体来获得稳定表达外源MPST基因... 目的探讨内质网应激是否参与亚砷酸钠(NaAsO2)神经毒性损伤,明确3-巯基丙酮酸硫转移酶(3-mercaptopyruvate sulfurtransferase,MPST)过表达是否调节砷诱导的内质网应激。方法通过构建MPST基因慢病毒表达载体来获得稳定表达外源MPST基因的SH-SY5Y细胞株作为SH-MPST过表达组,另设空载体转染细胞为SH-PEB组,染砷组(NaAsO2组),内质网应激阻断剂TUDCA组,TUDCA预处理染砷组。Western blot法分别检测过表达MPST、染砷及TUDCA预处理后细胞内GRP78和CHOP蛋白表达的变化。结果单纯MPST过表达不影响SH-SY5Y细胞内GRP78、CHOP蛋白的表达水平;经NaAsO2处理后,SH-PEB细胞内GRP78、CHOP蛋白明显上调(P<0.01),而被内质网应激阻断剂TUDCA所拮抗;MPST过表达则抑制砷对GRP78、CHOP蛋白的上调(P<0.01);然而,TUDCA预处理则明显逆转MPST过表达对GRP78、CHOP蛋白的影响(P<0.01)。结论GRP78/CHOP内质网应激通路参与了砷诱导的神经毒性损伤;MPST过表达可降低砷诱导的内质网应激水平。 展开更多

关键词 亚砷酸钠 内质网应激 3-巯基丙酮酸硫转移酶 硫化氢 葡萄糖调节蛋白78 环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白 SH-SY5Y细胞

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维生素E琥珀酸酯诱导内质网应激激活JNK的表达对人胃癌SGC-7901细胞自噬的影响 被引量：5

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作者 曹晓倩 苑瑾慧 +2 位作者 杜美志 王弈丹 侯丽颖 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期109-114,共6页

目的:研究c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)在维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate,VES)激活内质网应激诱导人胃癌SGC-7901细胞自噬过程中发挥的作用。方法:用不同剂量VES(5、10、15、20μg/ml)分别处理SGC-7901细胞24... 目的:研究c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)在维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate,VES)激活内质网应激诱导人胃癌SGC-7901细胞自噬过程中发挥的作用。方法:用不同剂量VES(5、10、15、20μg/ml)分别处理SGC-7901细胞24 h,采用qPCR和WB法分别检测自噬标志物LC3和Beclin-1 mRNA和蛋白的表达水平;在内质网应激抑制剂4-PBA的作用下,激光共聚焦显微镜观察LC3的荧光强度和分布,然后采用qPCR检测内质网应激标志物GRP78、GRP94 mRNA和自噬标志物LC3、Beclin-1 mRNA的表达水平;在JNK抑制剂SP600125的作用下,采用WB法检测p-JNK和自噬标志蛋白LC3和Beclin-1的表达变化。结果:与溶剂对照组相比,随着VES作用浓度的升高,SGC-7901细胞中Beclin-1和LC3的mRNA和蛋白表达水平呈现逐渐升高的趋势(均P<0.05),且LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值也显著增加(均P<0.01);与20μg/ml VES组比较,经内质网应激抑制剂4-PBA预处理组的SGC-7901细胞中GRP78、GRP94、LC3和Beclin-1 mRNA表达均降低(均P<0.01)、LC3的点状聚集强度下降;在JNK抑制剂SP600125预处理组的SGC-7901细胞中,p-JNK、LC3、Beclin-1的蛋白表达水平均较20μg/ml VES组降低(均P<0.01)。结论:VES可通过激活内质网应激诱导SGC-7901细胞发生自噬,同时JNK参与了内质网应激对自噬的调控过程。 展开更多

关键词 维生素E琥珀酸酯 胃肿瘤 内质网应激 自噬 c-JUN氨基末端激酶

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姜黄素通过抑制内质网应激和JNK通路过度活化减轻小鼠肺缺血再灌注损伤 被引量：28

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作者 赵珊 马迎春 +5 位作者 刘亚坤 周俊辉 郝卯林 陈海娥 孙勤 王万铁 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期308-313,共6页

目的:探讨姜黄素(curcumin,Cur)是否通过抑制内质网应激和c-Jun氨基末端激酶(JNK)通路过度活化来减轻小鼠肺缺血再灌注(I/R)损伤。方法:采用C57BL/6J小鼠左侧肺原位I/R损伤模型。实验随机分为6组(每组10只),包括假手术组(sham组)、I/R组... 目的:探讨姜黄素(curcumin,Cur)是否通过抑制内质网应激和c-Jun氨基末端激酶(JNK)通路过度活化来减轻小鼠肺缺血再灌注(I/R)损伤。方法:采用C57BL/6J小鼠左侧肺原位I/R损伤模型。实验随机分为6组(每组10只),包括假手术组(sham组)、I/R组、DMSO组(I/R+DMSO组)和Cur组(I/R+Cur低、中、高剂量组)。实验结束后处死小鼠,留取左肺,检测肺湿干重比(W/D)和总肺水含量(TLW);光镜、电镜观察肺组织形态结构变化,并进行肺组织损伤评估(IQA);RT-PCR检测JNK和葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的mRNA表达;West-ern blotting检测磷酸化JNK(p-JNK)和GRP78的蛋白表达;原位缺口末端标记法(TUNEL法)检测肺细胞凋亡指数(AI)。结果:与sham组相比,I/R组和DMSO组W/D、TLW、IQA及AI均明显升高(P<0.01),JNK、GRP78 mRNA和p-JNK、GRP78蛋白表达量上升(P<0.01),光镜、电镜均显示肺组织结构出现明显损伤性变化。I/R组与DMSO组相比,上述各指标无显著差异(P>0.05)。与I/R组和DMSO组相比,I/R+Cur低、中、高剂量组各组GRP78mRNA和蛋白表达量无明显变化(P>0.05),W/D、TLW、IQA及AI下降(P<0.05或P<0.01)且肺组织损伤减轻,JNK mRNA和p-JNK蛋白质表达量亦下降,以I/R+Cur高剂量组下降最为明显(P<0.01)。结论:缺血/再灌注引发肺组织细胞发生过度的内质网应激,损伤肺组织。Cur能减轻肺缺血/再灌注损伤,其机制可能与抑制JNK信号通路的过度活化有关。 展开更多

关键词 内质网应激 c—Jun氨基末端激酶 再灌注损伤 细胞凋亡 姜黄素

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内质网应激对微囊化HepG2细胞脂代谢影响及调控研究 被引量：2

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作者 肖静 张英 +2 位作者 于玮婷 王为 马小军 《中国生物医学工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期606-612,共7页

研究内质网应激发生对微囊化细胞脂代谢调节的影响,探讨内质网应激拮抗剂对微囊化细胞生长代谢调控的可行性。采用静电液滴法制备微囊化细胞,Real-time PCR法检测微囊化对葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和C/EBP同源蛋白(CHOP)表达影响;通过MT... 研究内质网应激发生对微囊化细胞脂代谢调节的影响,探讨内质网应激拮抗剂对微囊化细胞生长代谢调控的可行性。采用静电液滴法制备微囊化细胞,Real-time PCR法检测微囊化对葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和C/EBP同源蛋白(CHOP)表达影响;通过MTT法检测细胞活性,ELISA法检测白蛋白含量,乙烷-丙酮法抽提测定胞内总胆固醇和甘油三酯含量,并比较拮抗剂四苯基丁酸(4-PBA)干预后相关指标变化。结果显示,微囊细胞中内质网应激标识蛋白GRP78和CHOP表达量分别为同天数下平面细胞3.6倍和1.9倍(P<0.05),胞内总胆固醇(CHO)和甘油三酯(TG)含量分别为平面细胞1.7倍和3.2倍(P<0.05)。内质网应激拮抗剂4-PBA在1.0 mM可显著增加微囊化细胞活性。干预后GRP78和CHOP基因表达水平降低50%和30%(P<0.05),胞内CHO和TG含量降低30%和15%(P<0.05),并使白蛋白水平较对照组显著提高(P<0.05)。结果提示微囊内存在内质网应激,且与微囊细胞脂代谢失调有关;内质网应激拮抗剂能缓解微囊对细胞的以上作用。 展开更多

关键词 微囊化细胞 内质网应激 葡萄糖调节蛋白78 c ebp同源蛋白

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JNK信号途径通过内质网应激反应介导心肌梗死后心力衰竭小鼠心肌组织的凋亡 被引量：3

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作者 陈鹏 杨成明 +3 位作者 曾春雨 王旭开 熊秀勤 何多芬 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第24期2455-2458,共4页

目的探讨在心肌梗死后心力衰竭诱导的内质网应激反应中c-Jun氨基端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)通路介导心肌细胞凋亡可能的作用及机制。方法结扎小鼠左冠状动脉主干建立心肌梗死后心力衰竭(心衰)模型,32只小鼠采用随机数字法分4... 目的探讨在心肌梗死后心力衰竭诱导的内质网应激反应中c-Jun氨基端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)通路介导心肌细胞凋亡可能的作用及机制。方法结扎小鼠左冠状动脉主干建立心肌梗死后心力衰竭(心衰)模型,32只小鼠采用随机数字法分4组:假手术组、心肌梗死后2、4、6周组,采用超声心动图观察心室扩张及心功能变化情况,Western blot检测内质网分子伴侣GRP78蛋白以及JNK蛋白及其磷酸化水平的表达。采用TUNEL法观察心肌细胞的凋亡情况。结果与假手术组相比较,心肌梗死后心力衰竭的小鼠左心室扩大,心功能下降。小鼠心肌组织GRP78表达明显增高(P<0.05),JNK蛋白表达没有明显变化,但其活化形式磷酸化JNK表达增高(P<0.05)。TUNEL染色显示心肌梗死后心力衰竭的小鼠心肌组织凋亡明显增多(P<0.05)。结论心肌梗死后心力衰竭诱导内质网应激反应,并激活JNK信号途径促进了心肌细胞的凋亡。 展开更多

关键词 心力衰竭 c-JUN氨基末端激酶 内质网 应激 细胞凋亡

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滋补脾阴方药对脾阴虚痴呆大鼠脑组织内质网应激影响的研究 被引量：12

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作者 战丽彬 林海燕 +2 位作者 宫晓洋 刘莉 梁丽娜 《世界科学技术-中医药现代化》 2011年第6期993-998,共6页

目的:观察滋补脾阴方药(ZBPYR)对脾阴虚痴呆大鼠不同脑区内质网应激的影响。方法:通过证病结合的方法建立脾阴虚痴呆大鼠模型,以免疫组化方法检测各组大鼠海马(CA1、CA3、DG区)、大脑皮质中内质网应激相关分子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)... 目的:观察滋补脾阴方药(ZBPYR)对脾阴虚痴呆大鼠不同脑区内质网应激的影响。方法:通过证病结合的方法建立脾阴虚痴呆大鼠模型,以免疫组化方法检测各组大鼠海马(CA1、CA3、DG区)、大脑皮质中内质网应激相关分子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、凋亡促进因子CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)的表达变化。结果:与脾阴虚痴呆组比较,ZBPYR治疗组大鼠海马CA1区(0.2913±0.0025)、CA3区(0.2835±0.0012)、DG区(0.2855±0.0002)、大脑皮质(0.2929±0.0028)GRP78蛋白表达水平明显上调(P<0.05);海马CA1区(0.2476±0.0012)、CA3区(0.2499±0.0013)、DG区(0.2519±0.0023)、大脑皮质(0.2488±0.0007)CHOP蛋白表达水平明显下调(P<0.05)。结论:滋补脾阴方药改善脾阴虚痴呆大鼠的学习记忆能力,可能是通过增强内质网应激介导的未折叠蛋白反应的存活途径,抑制凋亡途径而实现。 展开更多

关键词 阿尔茨海默病 脾阴虚痴呆 滋补脾阴方药 内质网应激 葡萄糖调节蛋白78ccAAT/增强子结合蛋白同源蛋白

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基于JNK信号通路探究半胱氨酸在非酒精性脂肪性肝炎发病机制中的作用 被引量：2

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作者 刘庆生 丁滨 +4 位作者 窦晓兵 潘然 张福利 丁蕾 桑怡 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2016年第4期366-371,共6页

目的:通过体外细胞实验,研究半胱氨酸(cysteine,CYS)加剧棕榈酸(palmitate,PAL)诱导肝细胞死亡的作用机制。方法:以人肝细胞株Hep G2为细胞模型,采用LDH、MTT技术以及Hoechst染色法检测细胞增殖活性,通过酶化学方法检测细胞内谷胱甘肽(g... 目的:通过体外细胞实验,研究半胱氨酸(cysteine,CYS)加剧棕榈酸(palmitate,PAL)诱导肝细胞死亡的作用机制。方法:以人肝细胞株Hep G2为细胞模型,采用LDH、MTT技术以及Hoechst染色法检测细胞增殖活性,通过酶化学方法检测细胞内谷胱甘肽(glutathione,GSH)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,应用DCFH-DA探针检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,利用Western blot技术检测细胞内质网应激相关蛋白C/EBP同源转录因子(C/EBP homologous transcription factor,CHOP),GRP-78以及磷酸化的c-Jun氨基末端激酶(phosphorylated c-jun N-terminal kinase,p-JNK)的表达量。结果:(1)PAL可以显著抑制Hep G2细胞的增殖活性。(2)PAL提高Hep G2细胞内的GSH水平,但不影响MDA和ROS水平。(3)CYS显著加剧PAL诱导肝细胞死亡的作用。(4)CYS/PAL协同作用不影响细胞内MDA和ROS水平。(5)CYS/PAL协同作用可显著提高肝细胞内质网应激相关蛋白GRP-78、CHOP和p-JNK的表达。(6)抑制JNK通路可抑制PAL诱导的细胞死亡。结论:CYS通过激活JNK通路导致内质网应激加强,从而加剧PAL诱导细胞死亡,参与NASH发病机制。 展开更多

关键词 半胱氨酸 棕榈酸 内质网应激 肝细胞 c-Jun氨基末端激酶(JNK)

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β_1-肾上腺素受体自身抗体通过激活内质网应激诱导心肌细胞凋亡 被引量：4

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作者 侯晓鸿 宁娜 +5 位作者 李杨 何金玲 燕子 原媛 王丽 王晓晖 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期1921-1927,共7页

目的:探讨内质网应激在β_1-肾上腺素受体自身抗体(β_1-AA)引起心肌细胞凋亡中的作用。方法:采用β_1-肾上腺素受体细胞外第二环抗原肽段主动免疫大鼠,应用SA-ELISA法检测大鼠血清中β_1-AA的水平,TUNEL染色检测心肌组织的凋亡水平,Wes... 目的:探讨内质网应激在β_1-肾上腺素受体自身抗体(β_1-AA)引起心肌细胞凋亡中的作用。方法:采用β_1-肾上腺素受体细胞外第二环抗原肽段主动免疫大鼠,应用SA-ELISA法检测大鼠血清中β_1-AA的水平,TUNEL染色检测心肌组织的凋亡水平,Western blot法和免疫组化法检测心肌组织中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)及caspase-12的蛋白表达。利用亲和层析法纯化的β_1-AA处理H9c2心肌细胞,CCK-8法检测细胞活力,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测心肌细胞凋亡;采用内质网应激抑制剂4-苯基丁酸(4-PBA)预处理H9c2心肌细胞,再给予β_1-AA干预,CCK-8法和流式细胞术分别检测细胞活力及凋亡的变化情况。结果:与对照组相比,主动免疫大鼠血清中β_1-AA水平在免疫2周时显著增加,进一步增加至8周,并且主动免疫2周大鼠心肌组织凋亡率明显升高,持续升高至8周。与对照组相比,主动免疫大鼠心肌组织中GRP78、CHOP及caspase-12的蛋白表达在免疫4周和8周时均明显增加。β_1-AA引起H9c2心肌细胞活力持续降低,凋亡明显增加。与β_1-AA单独处理组相比,内质网应激抑制剂4-PBA预处理H9c2心肌细胞可以有效逆转β_1-AA诱导的细胞凋亡增加和活力下降。结论:β_1-AA可以通过激活内质网应激诱导心肌细胞凋亡。 展开更多

关键词 β1-肾上腺素受体自身抗体 内质网应激 细胞凋亡 葡萄糖调节蛋白78 c/ebp同源蛋白 cASPASE-12

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护肝清脂片药物血清对非酒精性脂肪肝细胞模型内质网应激的影响 被引量：12

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作者 杨妙婷 陈芝娟 +2 位作者 肖淳欣 唐外姣 周本杰 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期1277-1287,共11页

目的探讨护肝清脂片药物血清对混合脂肪酸诱导的非酒精性脂肪肝HepG2细胞模型内质网应激(ER stress)的影响及其可能机制。方法油酸和棕榈酸以2∶1比例混合制备成1 mmol/L游离脂肪酸(FFA)混合液,诱导HepG2细胞24 h发生脂肪变性,建立NAFL... 目的探讨护肝清脂片药物血清对混合脂肪酸诱导的非酒精性脂肪肝HepG2细胞模型内质网应激(ER stress)的影响及其可能机制。方法油酸和棕榈酸以2∶1比例混合制备成1 mmol/L游离脂肪酸(FFA)混合液,诱导HepG2细胞24 h发生脂肪变性,建立NAFLD体外模型,将HepG2细胞分为对照组(CON)、FFA组、护肝清脂片低剂量组(HG-L)、护肝清脂片中剂量组(HGM)、护肝清脂片高剂量组(HG-H)及非诺贝特阳性对照组(FF),在加入1 mmol/L FFA前分别加入各组对应的药物血清作用24 h,CON组及FFA组则加入大鼠空白血清作为对照。油红O染色观察细胞内脂滴分布;试剂盒检测细胞内甘油三酯(TG)含量及培养上清液谷草转氨酶(AST/GOT)、谷丙转氨酶(ALT/GPT)的水平;透射电镜观察细胞内质网形态结构的改变;Western blot、qRT-PCR技术检测ERS相关信号分子GRP78、PERK、p-PERK、ATF6、ATF4、XBP-1、CASPASE-12、CHOP、PKC-δ、p-PKC-δ蛋白及(或)mRNA的表达情况。利用siRNA瞬时转染技术沉默PKC-δ在HepG2细胞中的表达后观察GRP78、PERK、p-PERK、CASPASE-12和CHOP蛋白表达变化。结果与CON组相比,FF组HepG2细胞油红染色可见红色脂滴密布细胞质,TG、AST、ALT含量升高(P<0.001);与FF组相比,HG-L、HG-M、HG-H及FF均在不同程度上降低TG、AST、ALT含量,减少细胞内脂滴堆积,差异有统计学意义(P<0.05),并能够在蛋白及mRNA水平上有效地下调ERS相关信号分子GRP78、p-PERK、ATF6、ATF4、CHOP、CASPASE-12、XBP-1、PKC-δ、p-PKC-δ的表达,差异有统计学意义(P<0.05)。在1 mmol/L FFA共同作用下,PKC-δsiRNA转染组GRP78、p-PERK、CHOP、CASPASE-12蛋白表达均较对照组明显下调,差异具有统计学意义(P<0.001)。然而,与PKC-δsiRNA+FFA组相比,PKC-δsiRNA+HG-H组GRP78和P-PERK表达下调更显著(P<0.001,0.01),CHOP和CASPASE-12则无统计学差异(P>0.05)。结论护肝清脂片药物血清可以有效地防治混合脂肪酸诱导的NAFLD细胞模型脂肪变性,改善HepG2功能状态,有效地缓解1 mmol/L游离脂肪酸所致的内质网应激,其作用机制在一定程度上与下调PKC-δ表达有关。 展开更多

关键词 护肝清脂药物血清 非酒精性脂肪肝 内质网应激 脂肪变性 蛋白激酶c-δ

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龙蛭汤对脑缺血再灌注损伤大鼠血管新生的促进作用 被引量：1

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作者 李南方 陈永斌 +3 位作者 刘启华 黄显雯 范俊逸 罗燕萍 《辽宁中医杂志》 CAS 2022年第9期195-198,227,共5页

目的探究龙蛭汤对大鼠脑缺血再灌注损伤后脑血管新生的促进作用及其与内质网应激之间的关系。方法将72只大鼠随机分为6组:假手术组、模型组、龙蛭汤组、丁苯酞组、4-苯基丁酸(4-PBA)组、4-PBA+龙蛭汤组,每组12只。除假手术组外,其余5组... 目的探究龙蛭汤对大鼠脑缺血再灌注损伤后脑血管新生的促进作用及其与内质网应激之间的关系。方法将72只大鼠随机分为6组:假手术组、模型组、龙蛭汤组、丁苯酞组、4-苯基丁酸(4-PBA)组、4-PBA+龙蛭汤组,每组12只。除假手术组外,其余5组均采用改良线栓法建立右侧脑缺血再灌注损伤大鼠模型。于术后第3天,对各组大鼠进行神经功能评分;采用实时荧光定量聚合酶链式反应法(RT-PCR)比较各组大鼠葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和特异性蛋白C增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)mRNA的表达;通过免疫组织化学法计算各组大鼠脑微血管密度(MVD);采用免疫印迹法(Western Blot)比较各组大鼠GRP78和CHOP蛋白的表达。结果与假手术组相比,模型组可见明显的神经功能缺损评分和微血管密度计数升高,海马组织中GRP78和CHOP蛋白和mRNA的表达均明显升高(P<0.05);与模型组相比,其余4组的神经功能评分、海马组织中GRP78和CHOP蛋白和mRNA的表达量均有不同程度降低(P<0.05),且龙蛭汤组、丁苯酞组、4-PBA+龙蛭汤组微血管密度均比模型组高(P<0.05)。结论龙蛭汤可能通过下调内质网应激相关因子GRP78和CHOP的表达以抑制大鼠脑组织过度的内质网应激反应,进而促进血管新生。 展开更多

关键词 龙蛭汤 血管新生 脑缺血再灌注 内质网应激 葡萄糖调节蛋白78 特异性蛋白c增强子结合蛋白同源蛋白

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