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人可溶性单链β2m-HLA-A2-BSP融合蛋白表达载体的构建及其表达
被引量：
1
1
作者
熊敏
杨敬宁
+1 位作者
李青
吴雄文
《华中科技大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第1期1-4,共4页
目的构建并表达了人可溶性单链β2m-HLA-A2-BSP(scHLA-A2)融合蛋白表达载体,为进一步制备HLA-A2四聚体及其功能研究奠定了基础。方法应用重叠延伸PCR(overlap-PCR)对编码HLA-A2的cDNA序列进行一个碱基的同义突变,并将β2m和HLA-A2胞外...
目的构建并表达了人可溶性单链β2m-HLA-A2-BSP(scHLA-A2)融合蛋白表达载体,为进一步制备HLA-A2四聚体及其功能研究奠定了基础。方法应用重叠延伸PCR(overlap-PCR)对编码HLA-A2的cDNA序列进行一个碱基的同义突变,并将β2m和HLA-A2胞外段亚单位两段编码序列的cDNA通过一疏水性多肽接头(Gly4Ser)3的DNA序列进行前后拼接,并利用引物所带的BSP编码序列,构建单链β2m-HLA-A2-BSP融合基因,将测序正确的β2m-HLA-A2-BSP融合基因插入原核表达载体pET-22b中,转化BL21(DE3)细菌,SDS-PAGE检测其表达,融合蛋白于体外抗原肽存在条件下稀释复性后由Western blot鉴定其空间构象。结果经DNA序列分析表明:同义突变与预期结果一致,β2m和HLA-A2-BSPl、inker的连接顺序、方向及序列完全正确,表达载体转化BL21(DE3)细菌后可表达β2m-HLA-A2-BSP融合蛋白,SDS-PAGE显示该融合蛋白分子量为45 kD,与理论值一致,将融合蛋白与特异性抗原肽在体外进行稀释复性后经Western blot鉴定表明该复合物能与HLA-Ⅰ类分子特异性结合的单克隆抗体W6/32结合。结论人可溶性单链β2m-HLA-A2-BSP融合蛋白的构建及其表达获得成功,经体外复性可获得HLA-Ⅰ类分子天然构象。
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关键词
重叠延伸聚合酶链式反应
β2m-HLA-A2-
bsp
融合蛋白
同义突变
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职称材料
TIF1γ基因启动子区域突变和甲基化与非小细胞肺癌的关系研究
被引量：
3
2
作者
汪龙强
雷哲
+2 位作者
刘霞
刘仍允
张洪涛
《中国肺癌杂志》
CAS
北大核心
2013年第5期227-232,共6页
背景与目的TIF1γ(transcription intermediary factor 1gamma)属于转录中介因子1家族的成员,可干扰TGF-β/Smad信号通路,抑制TGF-β介导的信号传导,且TIF1γ在多种肿瘤细胞的表达减弱或缺失表明TIF1γ在癌症的发生发展过程中起到抑癌...
背景与目的TIF1γ(transcription intermediary factor 1gamma)属于转录中介因子1家族的成员,可干扰TGF-β/Smad信号通路,抑制TGF-β介导的信号传导,且TIF1γ在多种肿瘤细胞的表达减弱或缺失表明TIF1γ在癌症的发生发展过程中起到抑癌的作用。本研究旨在探索TIF1γ在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞与组织中的表达差异以确定TIF1γ与肺癌发生关系以及肺癌细胞中TIF1γ表达调控的潜在机制。方法选取13例NSCLC患者癌组织以及对应的癌旁组织样本,培养正常支气管上皮细胞HBE和NSCLC细胞株:A549和95C。运用Real-time PCR和Westernblot检测细胞与组织中TIF1γ基因的表达,并用ImageJ灰度扫描软件计算TIF1γ的相对表达量。通过DNA测序的方法检测TIF1γ基因启动子区域突变情况,并采用Bisulfite-sequencing PCR(BSP)克隆测序方法检测TIF1γ基因启动子区域甲基化情况。结果相对于HBE,TIF1γmRNA和蛋白在A549和95C中明显下调(P<0.05),13对组织样本中,9个(69.2%)癌旁组织样本里TIF1γ mRNA的表达量高于癌组织样本(P<0.05)。突变检测表明TIF1γ基因启动子区-287﹣-5在细胞株中没有突变发生。经BSP克隆测序方法分析发现在TIF1γ基因启动子-287﹣-5区域里存在5个可被甲基化的CpG位点(-214、-128、-124、-65和-55)。但这些CpG位点的甲基化频率在NSCLC细胞株中相比HBE没有明显差异。结论TIF1γ在NSCLC的发生中可能起抑癌的作用,TIF1γ基因启动子区域-287﹣-5在正常细胞和NSCLC细胞中都没有发生突变,但在-287﹣-5区域中存在5个可被甲基化的CpG位点。
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关键词
肺肿瘤
TIF1γ
甲基化
bisulfite-sequencing
pcr
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职称材料
假单胞菌单基因甲基化位点的检测与自发表型变异分析
3
作者
叶惠闽
黄显清
张雪洪
《实验室研究与探索》
CAS
北大核心
2021年第4期38-42,共5页
重亚硫酸盐测序(BSP)技术是一种广泛应用的DNA甲基化检测技术,其检测分辨率达到单碱基水平,可用于短片段的高精度测序。利用BSP技术对DNA水平上不存在差异的绿针假单胞菌HT66及其荧光表型突变株HT66-FLUO的同一基因片段gacS并行测定,发...
重亚硫酸盐测序(BSP)技术是一种广泛应用的DNA甲基化检测技术,其检测分辨率达到单碱基水平,可用于短片段的高精度测序。利用BSP技术对DNA水平上不存在差异的绿针假单胞菌HT66及其荧光表型突变株HT66-FLUO的同一基因片段gacS并行测定,发现HT66-FLUO的gacS中存在2个甲基化位点,甲基化率分别为50%和100%,确定全局性调控基因gacS发生了甲基化修饰,从而影响了gacS的功能,导致HT66-FLUO自发表型变异。研究表明,BSP检测方法可应用于细菌单基因的甲基化位点分析,为细菌甲基化研究提供借鉴。
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关键词
DNA甲基化
重亚硫酸盐测序
绿针假单胞菌
表型突变株
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职称材料
题名
人可溶性单链β2m-HLA-A2-BSP融合蛋白表达载体的构建及其表达
被引量：
1
1
作者
熊敏
杨敬宁
李青
吴雄文
机构
华中科技大学同济医学院基础医学院免疫学系
出处
《华中科技大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第1期1-4,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.30271201)
文摘
目的构建并表达了人可溶性单链β2m-HLA-A2-BSP(scHLA-A2)融合蛋白表达载体,为进一步制备HLA-A2四聚体及其功能研究奠定了基础。方法应用重叠延伸PCR(overlap-PCR)对编码HLA-A2的cDNA序列进行一个碱基的同义突变,并将β2m和HLA-A2胞外段亚单位两段编码序列的cDNA通过一疏水性多肽接头(Gly4Ser)3的DNA序列进行前后拼接,并利用引物所带的BSP编码序列,构建单链β2m-HLA-A2-BSP融合基因,将测序正确的β2m-HLA-A2-BSP融合基因插入原核表达载体pET-22b中,转化BL21(DE3)细菌,SDS-PAGE检测其表达,融合蛋白于体外抗原肽存在条件下稀释复性后由Western blot鉴定其空间构象。结果经DNA序列分析表明:同义突变与预期结果一致,β2m和HLA-A2-BSPl、inker的连接顺序、方向及序列完全正确,表达载体转化BL21(DE3)细菌后可表达β2m-HLA-A2-BSP融合蛋白,SDS-PAGE显示该融合蛋白分子量为45 kD,与理论值一致,将融合蛋白与特异性抗原肽在体外进行稀释复性后经Western blot鉴定表明该复合物能与HLA-Ⅰ类分子特异性结合的单克隆抗体W6/32结合。结论人可溶性单链β2m-HLA-A2-BSP融合蛋白的构建及其表达获得成功,经体外复性可获得HLA-Ⅰ类分子天然构象。
关键词
重叠延伸聚合酶链式反应
β2m-HLA-A2-
bsp
融合蛋白
同义突变
Keywords
overlap-
pcr
β2m-HLA-A2-
bsp
fusion protein
synonymous mutation
分类号
Q782 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
TIF1γ基因启动子区域突变和甲基化与非小细胞肺癌的关系研究
被引量：
3
2
作者
汪龙强
雷哲
刘霞
刘仍允
张洪涛
机构
苏州大学癌症分子遗传学实验室、苏州市癌症分子遗传学重点实验室
出处
《中国肺癌杂志》
CAS
北大核心
2013年第5期227-232,共6页
基金
国家自然科学基金(No.81171894)
教育部“新世纪优秀人才支持计划”(No.NCET-09-0165)
+2 种基金
江苏省人事厅“333工程”
苏州市癌症分子遗传学重点实验室(No.SZS201209)
苏州大学"东吴学者"计划资助~~
文摘
背景与目的TIF1γ(transcription intermediary factor 1gamma)属于转录中介因子1家族的成员,可干扰TGF-β/Smad信号通路,抑制TGF-β介导的信号传导,且TIF1γ在多种肿瘤细胞的表达减弱或缺失表明TIF1γ在癌症的发生发展过程中起到抑癌的作用。本研究旨在探索TIF1γ在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞与组织中的表达差异以确定TIF1γ与肺癌发生关系以及肺癌细胞中TIF1γ表达调控的潜在机制。方法选取13例NSCLC患者癌组织以及对应的癌旁组织样本,培养正常支气管上皮细胞HBE和NSCLC细胞株:A549和95C。运用Real-time PCR和Westernblot检测细胞与组织中TIF1γ基因的表达,并用ImageJ灰度扫描软件计算TIF1γ的相对表达量。通过DNA测序的方法检测TIF1γ基因启动子区域突变情况,并采用Bisulfite-sequencing PCR(BSP)克隆测序方法检测TIF1γ基因启动子区域甲基化情况。结果相对于HBE,TIF1γmRNA和蛋白在A549和95C中明显下调(P<0.05),13对组织样本中,9个(69.2%)癌旁组织样本里TIF1γ mRNA的表达量高于癌组织样本(P<0.05)。突变检测表明TIF1γ基因启动子区-287﹣-5在细胞株中没有突变发生。经BSP克隆测序方法分析发现在TIF1γ基因启动子-287﹣-5区域里存在5个可被甲基化的CpG位点(-214、-128、-124、-65和-55)。但这些CpG位点的甲基化频率在NSCLC细胞株中相比HBE没有明显差异。结论TIF1γ在NSCLC的发生中可能起抑癌的作用,TIF1γ基因启动子区域-287﹣-5在正常细胞和NSCLC细胞中都没有发生突变,但在-287﹣-5区域中存在5个可被甲基化的CpG位点。
关键词
肺肿瘤
TIF1γ
甲基化
bisulfite-sequencing
pcr
Keywords
Lung neoplasms
TIF1γ
Methylation
bisulfite-sequencing pcr （bsp）
分类号
R734.2 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
假单胞菌单基因甲基化位点的检测与自发表型变异分析
3
作者
叶惠闽
黄显清
张雪洪
机构
上海交通大学生命科学技术学院微生物代谢国家重点实验室
出处
《实验室研究与探索》
CAS
北大核心
2021年第4期38-42,共5页
基金
国家自然科学基金项目(31670033)。
文摘
重亚硫酸盐测序(BSP)技术是一种广泛应用的DNA甲基化检测技术,其检测分辨率达到单碱基水平,可用于短片段的高精度测序。利用BSP技术对DNA水平上不存在差异的绿针假单胞菌HT66及其荧光表型突变株HT66-FLUO的同一基因片段gacS并行测定,发现HT66-FLUO的gacS中存在2个甲基化位点,甲基化率分别为50%和100%,确定全局性调控基因gacS发生了甲基化修饰,从而影响了gacS的功能,导致HT66-FLUO自发表型变异。研究表明,BSP检测方法可应用于细菌单基因的甲基化位点分析,为细菌甲基化研究提供借鉴。
关键词
DNA甲基化
重亚硫酸盐测序
绿针假单胞菌
表型突变株
Keywords
DNA methylation
bisulfite sequencing
pcr
(
bsp
)
Pseudomonas chlororaphis
phenotypic variant strains
分类号
Q93-31 [生物学—微生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人可溶性单链β2m-HLA-A2-BSP融合蛋白表达载体的构建及其表达
熊敏
杨敬宁
李青
吴雄文
《华中科技大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2006
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
TIF1γ基因启动子区域突变和甲基化与非小细胞肺癌的关系研究
汪龙强
雷哲
刘霞
刘仍允
张洪涛
《中国肺癌杂志》
CAS
北大核心
2013
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
假单胞菌单基因甲基化位点的检测与自发表型变异分析
叶惠闽
黄显清
张雪洪
《实验室研究与探索》
CAS
北大核心
2021
0
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职称材料
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