六种不同蛋白质载体制备克伦特罗抗血清的比较 被引量：13

1

作者 陈继明 陆承平 +1 位作者 龚晓明 韩正康 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第4期83-86,共4页

以偶氮法将β激动剂克伦特罗（ＣＬ）连接小鼠血清白蛋白（ＭＳＡ）、小鼠ＩｇＭ（ＭＩＭ）、小鼠全血清（ＭＷＳ）、牛血清白蛋白（ＢＳＡ）、嗜水气单胞菌（ＡＨＪ）、虾全血清（ＳＷＳ）。各连接物分别免疫６组小鼠。免疫４次后用间... 以偶氮法将β激动剂克伦特罗（ＣＬ）连接小鼠血清白蛋白（ＭＳＡ）、小鼠ＩｇＭ（ＭＩＭ）、小鼠全血清（ＭＷＳ）、牛血清白蛋白（ＢＳＡ）、嗜水气单胞菌（ＡＨＪ）、虾全血清（ＳＷＳ）。各连接物分别免疫６组小鼠。免疫４次后用间接抑制ＥＬＩＳＡ、间接ＥＬＩＳＡ检测各组血清特异性和抗ＣＬ的效价。结果表明，各组鼠血清均含有抗ＣＬ的特异性的抗体；ＡＨＪ、ＳＷＳ、ＭＷＳ、ＭＳＡ组血清效价显著高于ＭＩＭ、ＢＳＡ组。提示组分复杂的蛋白质载体具有一定的优越性。 展开更多

关键词 载体 克伦特罗 抗血清

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副猪嗜血杆菌分型血清的制备及其在流行病学研究上的应用 被引量：7

2

作者 储岳峰 高鹏程 +4 位作者 赵萍 贺英 樊祜卿 逯忠新 赵海燕 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2010年第5期999-1002,共4页

用副猪嗜血杆菌1~15血清型参考菌株和2株澳大利亚分离株高免健康家兔制备副猪嗜血杆菌分型血清,建立副猪嗜血杆菌KRG血清学分型方法（基于热稳定抗原免疫扩散试验的血清学分型方法）,并用该方法对田间分离的62株副猪嗜血杆菌进行血清型... 用副猪嗜血杆菌1~15血清型参考菌株和2株澳大利亚分离株高免健康家兔制备副猪嗜血杆菌分型血清,建立副猪嗜血杆菌KRG血清学分型方法（基于热稳定抗原免疫扩散试验的血清学分型方法）,并用该方法对田间分离的62株副猪嗜血杆菌进行血清型鉴定。结果顺利制备出了副猪嗜血杆菌15个血清型菌株的分型血清,建立了副猪嗜血杆菌KRG分型方法,62株副猪嗜血杆菌分离株中血清5型占22.5%、4型占16.1%、12型占14.5%、不能分型的菌株占16.2%。试验建立的副猪嗜血杆菌KRG分型方法,可为中国副猪嗜血杆菌血清学分型提供技术支持;血清型5、4、12为中国部分地区近2年最流行的血清型,为副猪嗜血杆菌病的防制提供了有效的参考依据。 展开更多

关键词 副猪嗜血杆菌 分型血清 血清型鉴定 流行病学

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胸膜肺炎放线杆菌生物Ⅰ型标准抗血清的制备及初步临床应用 被引量：5

3

作者 陈凡 何启盖 +5 位作者 陈焕春 刘正飞 张震亚 张迎 Ross Bowle Pat Blackall 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期458-461,共4页

用十三种血清型的胸膜肺炎放线杆菌标准菌株免疫家兔,制备了标准抗血清,通过玻片凝集试验,琼脂扩散试验和免疫电泳试验,对抗血清的特异性、效价和保存期进行了监测,结果表明,制备的抗血清有较好的特异性,在4℃可以保存一个月、-20℃和、... 用十三种血清型的胸膜肺炎放线杆菌标准菌株免疫家兔,制备了标准抗血清,通过玻片凝集试验,琼脂扩散试验和免疫电泳试验,对抗血清的特异性、效价和保存期进行了监测,结果表明,制备的抗血清有较好的特异性,在4℃可以保存一个月、-20℃和、-80℃下保存一年无明显变化。用抗血清对从湖南,安徽,河南等地分离的胸膜肺炎菌株进行分型鉴定,分别为血清2,3,8型;而PCR检测均为阳性,说明抗血清可用于野生株的鉴定和流行病学调查。 展开更多

关键词 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌 抗血清 血清分型

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猪γ干扰素的体外表达及其多克隆抗血清的制备 被引量：7

4

作者 闫丽萍 周艳君 +2 位作者 仇华吉 魏萍 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期252-255,共4页

从健康仔猪前腔静脉无菌采血 ,分离外周血单个核细胞 ,提取细胞总RNA ,用猪γ干扰素 (IFN_γ)基因特异性引物通过RT_PCR扩增猪IFN_γ的全长cDNA序列 ,将其克隆到pMD18_T载体中 ,再亚克隆到pUC18和表达载体pET_30a中 ,经测序发现其序列与... 从健康仔猪前腔静脉无菌采血 ,分离外周血单个核细胞 ,提取细胞总RNA ,用猪γ干扰素 (IFN_γ)基因特异性引物通过RT_PCR扩增猪IFN_γ的全长cDNA序列 ,将其克隆到pMD18_T载体中 ,再亚克隆到pUC18和表达载体pET_30a中 ,经测序发现其序列与GenBank报道的IFN_γ基因序列基本一致。将重组质粒pET_30a_IFN_γ转化大肠杆菌BL2 1,于 37℃经IPTG诱导表达 ,IFN_γ基因获得表达 ,表达产物以包涵体形式存在 ,占菌体总蛋白的 39%。经SDS_PAGE及Westernblot分析表明 ,表达的融合蛋白分子量约为 2 5ku。将包涵体用 8mol/L脲变性 ,用ProBondTMPurificationSysterm纯化 ,经透析复性 ,得到纯化的目的蛋白 ,含量可达 0 3mg/mL。将复性蛋白免疫新西兰白兔三次 ,制备了高滴度的猪IFN_γ抗血清。本实验表达和纯化了猪IFN_γ ,并制备兔抗猪IFN_γ的抗血清 ,为下一阶段关于猪γ干扰素重组蛋白其应用奠定了基础。 展开更多

关键词 猪Γ干扰素 重组细胞因子 抗血清

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猪肺炎支原体P52蛋白的原核表达及抗血清制备 被引量：4

5

作者 曹培丽 李媛 +3 位作者 陈超 郭丹 辛九庆 李继昌 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期572-576,共5页

为表达猪肺炎支原体(Mhp)P52蛋白及制备其血清,本实验利用PCR从MhpJ株扩增P52基因,克隆到表达载体pET-30a中,获得重组质粒pET-P52,经IPTG诱导,通过SDS-PAGE和westernblot检测重组蛋白表达及其免疫学活性。以该重组蛋白为抗原免疫兔制备... 为表达猪肺炎支原体(Mhp)P52蛋白及制备其血清,本实验利用PCR从MhpJ株扩增P52基因,克隆到表达载体pET-30a中,获得重组质粒pET-P52,经IPTG诱导,通过SDS-PAGE和westernblot检测重组蛋白表达及其免疫学活性。以该重组蛋白为抗原免疫兔制备抗血清,采用间接ELISA检测抗血清效价,并利用抗血清通过间接免疫荧光检测P52基因在AD-293细胞中的表达情况。结果表明,PCR扩增目的基因为1202bp,SDS-PAGE检测重组蛋白大小约52ku,其表达量占菌体总蛋白的28%。Westernblot检测表明,目的蛋白能与Mhp阳性血清发生特异性反应,具有良好的免疫活性。间接免疫荧光检测到P52基因在AD-293细胞中表达。本研究为构建P52蛋白腺病毒载体疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 猪肺炎支原体 P52蛋白 原核表达 抗血清

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牛冠状病毒S蛋白抗原表位基因的串联表达及抗血清制备 被引量：6

6

作者 程凯慧 沈付娆 +6 位作者 邹积振 朱彤 苗自利 张亮 解晓莉 杨宏军 何洪彬 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2018年第10期59-61,66,共4页

为了构建牛冠状病毒(BCoV)抗原表位基因原核表达载体,并制备多克隆抗体,利用基因合成技术获得BCoV S蛋白两段抗原表位(351 aa～403 aa、771 aa～784 aa)的基因串联体R,将其重组到pET-28a(+)质粒中,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,... 为了构建牛冠状病毒(BCoV)抗原表位基因原核表达载体,并制备多克隆抗体,利用基因合成技术获得BCoV S蛋白两段抗原表位(351 aa～403 aa、771 aa～784 aa)的基因串联体R,将其重组到pET-28a(+)质粒中,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,诱导表达抗原表位融合蛋白,用纯化的蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体。结果显示,成功构建了BCoV抗原表位基因重组表达质粒,获得了融合蛋白的抗血清,Western-Blot检测显示,该抗血清可与BCoV的融合蛋白特异性结合。表明成功构建了BCoV抗原表位基因原核表达载体并获得了BCo V抗血清,本研究为BCoV诊断试剂盒的开发和BCoV多表位疫苗的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 牛冠状病毒 抗原表位 串联表达 抗血清

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传染性胰坏死病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立 被引量：6

7

作者 张琳琳 连科迅 +7 位作者 张英 蒋烨 姜艳萍 崔文 乔薪瑗 唐丽杰 李一经 刘敏 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2014年第4期57-62,72,共7页

以纯化的兔抗传染性胰坏死病病毒(IPNV)VP2重组蛋白多克隆抗体为包被抗体,抗IPNV VP2单克隆抗体为检测抗体建立了IPNV双抗体夹心ELISA方法。优化反应条件为:兔抗IPNV VP2重组蛋白多克隆抗体包被浓度为1.28μg/mL,抗IPNV VP2单克隆抗体... 以纯化的兔抗传染性胰坏死病病毒(IPNV)VP2重组蛋白多克隆抗体为包被抗体,抗IPNV VP2单克隆抗体为检测抗体建立了IPNV双抗体夹心ELISA方法。优化反应条件为:兔抗IPNV VP2重组蛋白多克隆抗体包被浓度为1.28μg/mL,抗IPNV VP2单克隆抗体的工作浓度为1.34μg/mL,酶标二抗稀释比例为1∶2 000,以P/N>2,且OD490 nm>0.101 494作为阳性判定标准。该方法的重复性变异系数均小于10%,与传染性造血器官坏死病毒(IHNV)、病毒性出血败血症病毒(VHSV)、鲤春病毒血症病毒(SVCV)、轮状病毒(HRV)无交叉反应。对41份虹鳟肝脏样品分别进行双抗体夹心ELISA和RT-PCR检测,结果双抗体夹心法与RT-PCR法检测符合率为97%,表明本实验建立的双抗体夹心ELISA检测方法检测IPNV具有较高的敏感性和特异性,可用于IPNV的病原学检测。 展开更多

关键词 传染性胰坏死病毒 双抗体夹心ELISA检测方法 单克隆抗体 兔抗血清

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传染性造血组织坏死病毒核衣壳蛋白的原核表达及抗原性分析 被引量：5

8

作者 赵永欣 赵丽丽 +5 位作者 刘巍巍 王建楠 李一经 乔薪瑗 葛俊伟 刘敏 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2011年第5期40-44,共5页

应用RT-PCR方法扩增了长度为1176 bp的IHNV-ZYX株编码核衣壳(N)蛋白基因,将N基因克隆至原核表达载体pET30b,并在大肠杆菌Rosetta(DE3)中得到了表达。通过SDS-PAGE分析表明,重组菌诱导后得到了预期大小约48 KD的N蛋白,与理论值相符;提取... 应用RT-PCR方法扩增了长度为1176 bp的IHNV-ZYX株编码核衣壳(N)蛋白基因,将N基因克隆至原核表达载体pET30b,并在大肠杆菌Rosetta(DE3)中得到了表达。通过SDS-PAGE分析表明,重组菌诱导后得到了预期大小约48 KD的N蛋白,与理论值相符;提取N蛋白的包涵体,并制备抗血清。间接ELISA和Western-blot-ting实验结果说明,表达的N蛋白与天然的IHNV N蛋白一样具有相同的抗原性。本试验结果为进一步研究分离株IHNV-ZYX N基因的免疫功能,建立灵敏高效的检测传染性造血组织坏死病的方法和研制基因工程疫苗奠定了重要的物质基础。 展开更多

关键词 传染性造血组织坏死病毒 N基因 原核表达 抗血清

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山羊IL-2的体外表达及其多克隆抗血清的制备 被引量：4

9

作者 海岗 刘胜旺 +1 位作者 韩宗玺 陈洪岩 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期685-689,共5页

应用RT-PCR方法从山羊外周血淋巴细胞中克隆了山羊白细胞介素-2(Caprine interleukin-2,CapIL-2)基因并进行测序,将编码山羊IL-2蛋白的基因亚克隆至pET30a(+)上,转化大肠杆菌BL21(DE3)并用IPTG于37℃诱导培养。表达融合蛋白通过ProBondT... 应用RT-PCR方法从山羊外周血淋巴细胞中克隆了山羊白细胞介素-2(Caprine interleukin-2,CapIL-2)基因并进行测序,将编码山羊IL-2蛋白的基因亚克隆至pET30a(+)上,转化大肠杆菌BL21(DE3)并用IPTG于37℃诱导培养。表达融合蛋白通过ProBondTM蛋白纯化试剂盒纯化。纯化产物经3次免疫新西兰白兔,制备出山羊IL-2抗血清。本次试验成功地表达、纯化了山羊IL-2,并制备出兔抗山羊IL-2抗血清,为下一步开展山羊IL-2重组蛋白的应用研究奠定了基础。 展开更多

关键词 山羊IL-2 融合蛋白原核表达 抗血清

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产气荚膜梭菌α毒素基因的克隆、表达及其抗血清的制备 被引量：3

10

作者 彭小兵 田冬青 +3 位作者 李旭妮 彭国瑞 王猛 蒋玉文 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第8期1950-1955,共6页

本试验通过设计并合成1对引物,PCR扩增B型产气荚膜梭菌C58-2株α毒素完整成熟肽序列,并将其插入到pGEM-T Easy载体中,构建克隆载体pGEM-T-α。对克隆载体pGEM-T-α进行EcoRⅠ和HindⅢ的双酶切,将得到的1 125bp片段以正确的阅读框架定向... 本试验通过设计并合成1对引物,PCR扩增B型产气荚膜梭菌C58-2株α毒素完整成熟肽序列,并将其插入到pGEM-T Easy载体中,构建克隆载体pGEM-T-α。对克隆载体pGEM-T-α进行EcoRⅠ和HindⅢ的双酶切,将得到的1 125bp片段以正确的阅读框架定向克隆于pET-28a(+)中,然后将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)plys宿主菌中,37℃、1.0 mmol/L IPTG诱导该片段获得良好表达。经SDS-PAGE分析,其表达的蛋白约为46.1ku,与预期大小一致。Western blotting结果显示,该重组α毒素蛋白可被A型产气荚膜梭菌定型血清识别,表明该重组α毒素蛋白具备与天然毒素相似的反应原性。重组α毒素蛋白在菌液上清、超声波裂解上清和超声波裂解沉淀中均有分布,且以包涵体表达为主,表明重组α毒素蛋白可同时在胞外、周质和胞浆表达。小鼠毒力试验结果表明,重组α毒素蛋白不具有毒性。毒素—抗毒素中和试验结果表明,该抗血清具有α毒素特异性。以重组α毒素蛋白作为抗原免疫家兔制备血清,效价测定结果表明每1mL重组α毒素蛋白抗血清可以中和100MLD的A型毒素。 展开更多

关键词 产气荚膜梭菌 Α毒素 克隆表达 抗血清

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鸡抗REV血清的制备与检定 被引量：7

11

作者 李俊平 杨承槐 +3 位作者 李启红 夏业才 黄建华 陈永忠 《中国兽药杂志》 2011年第9期15-18,共4页

用网状内皮组织增生症病毒(REV)HA9901株免疫SPF鸡,无菌采血制备鸡抗REV血清。通过ELISAI、FA、AGP、HI等方法对制备的血清进行检测,未检出禽类常见的其他17种(或亚型)病毒的抗体,该血清具有良好的特异性。通过测定,该血清用于间接免疫... 用网状内皮组织增生症病毒(REV)HA9901株免疫SPF鸡,无菌采血制备鸡抗REV血清。通过ELISAI、FA、AGP、HI等方法对制备的血清进行检测,未检出禽类常见的其他17种(或亚型)病毒的抗体,该血清具有良好的特异性。通过测定,该血清用于间接免疫荧光试验(IFA)的效价为1∶2000,用于IFA检测REV的染色效果与REV单抗(11B18和11B54的混合物)相当。试验结果表明,该批血清1000倍稀释可作为一抗,用于REV的间接免疫荧光检测。 展开更多

关键词 网状内皮组织增生症病毒 抗血清 间接免疫荧光试验

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金黄色葡萄球菌疫苗候选抗原SirH和StbA及其抗血清的免疫保护作用研究 被引量：1

12

作者 刘丽娜 钟乃凤 +2 位作者 王赟 周静 张洁 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2016年第4期48-51,共4页

为研究金黄色葡萄球菌疫苗候选抗原SirH和StbA及其抗血清的免疫保护作用,分别用纯化蛋白StbA、SirH以及甲醛灭活的金黄色葡萄球菌为免疫原免疫小鼠,收集抗血清,测定血清效价,然后用致死剂量的金黄色葡萄球菌攻击,评价两种抗原的免疫保... 为研究金黄色葡萄球菌疫苗候选抗原SirH和StbA及其抗血清的免疫保护作用,分别用纯化蛋白StbA、SirH以及甲醛灭活的金黄色葡萄球菌为免疫原免疫小鼠,收集抗血清,测定血清效价,然后用致死剂量的金黄色葡萄球菌攻击,评价两种抗原的免疫保护作用。分别用SirH和StbA抗血清免疫小鼠,4 h后用致死剂量的金黄色葡萄球菌攻击,评价抗血清的保护作用。结果显示,StbA和SirH抗血清效价均为1：1 638 400。金黄色葡萄球菌攻击主动免疫小鼠,SirH纯化蛋白免疫组（60%）和StbA纯化蛋白免疫组（70%）存活率均明显高于对照组（0%）（P〈0.05）,金黄色葡萄球菌全菌免疫组（20%）存活率与对照组（0%）差异不具备显著统计学意义（P〉0.05）。SirH纯化蛋白免疫组（60%）和StbA纯化蛋白免疫组（70%）存活率均高于金黄色葡萄球菌全菌免疫组（20%）。将抗血清免疫小鼠后,用金黄色葡萄球菌腹腔内注射攻击小鼠,免疫组小鼠16-18 h内全部死亡,而对照组小鼠在攻毒后12-14 h内全部死亡。结果表明,SirH和StbA是具有潜力的保护性抗原,但其抗血清都不具有保护作用。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 疫苗抗原 抗血清 免疫保护

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黄鳝IgM的分离纯化及兔抗黄鳝IgM抗血清的制备 被引量：2

13

作者 林树柱 李万波 +6 位作者 刘先菊 杨帆 全雄志 宋铭晶 全志云 秦川 张连峰 《中国比较医学杂志》 CAS 2007年第11期644-647,共4页

目的分离纯化黄鳝血清免疫球蛋白,制备其兔抗血清,并检测抗血清的特异性。方法用Protein A亲和层析的方法纯化黄鳝血清免疫球蛋白,通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测蛋白的纯度,免疫大耳白兔制备抗血清,利用免疫双扩散检测抗血清的效价,通... 目的分离纯化黄鳝血清免疫球蛋白,制备其兔抗血清,并检测抗血清的特异性。方法用Protein A亲和层析的方法纯化黄鳝血清免疫球蛋白,通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测蛋白的纯度,免疫大耳白兔制备抗血清,利用免疫双扩散检测抗血清的效价,通过western blotting检测抗血清的特异性。结果纯化了黄鳝血清免疫球蛋白,免疫双扩散法测定兔抗黄鳝免疫球蛋白血清效价为1∶32,western blotting结果显示抗血清具有很好的特异性。结论成功纯化了黄鳝免疫球蛋白,制备了兔抗黄鳝IgM抗血清,为建立黄鳝的血清学检测系统奠定了基础。 展开更多

关键词 亲和层析 黄鳝 免疫球蛋白 抗血清

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副鸡禽杆菌单因子血清的制备与应用 被引量：1

14

作者 赵钦 孙亚妮 +2 位作者 孔义波 张兴晓 姜世金 《西南农业学报》 CSCD 2008年第4期1152-1155,共4页

利用副鸡禽杆菌的A、B和C 3个血清型的参考菌株Hpg-8、CCM6075和Hpg-68分别制备相应的抗血清,然后对抗血清进行交叉吸收试验,得到A型、B型和C型3种单因子血清,不同血清型的单因子血清不与其他血清型菌株发生凝集。利用这3种单因子血清... 利用副鸡禽杆菌的A、B和C 3个血清型的参考菌株Hpg-8、CCM6075和Hpg-68分别制备相应的抗血清,然后对抗血清进行交叉吸收试验,得到A型、B型和C型3种单因子血清,不同血清型的单因子血清不与其他血清型菌株发生凝集。利用这3种单因子血清对临床上分离到的6株副鸡禽杆菌进行血清型的鉴定,结果表明6株地方分离株均为血清A型。 展开更多

关键词 副鸡禽杆菌 血清 鉴定

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呋喃唑酮代谢物人工抗原的合成及抗体的制备 被引量：5

15

作者 贾慧勤 丁焕中 +3 位作者 刘晓云 李小红 张炳旭 鲁晓雄 《中国兽药杂志》 2013年第6期20-23,共4页

为改进和完善免疫检测呋喃唑酮代谢物方法,制备了抗呋喃唑酮代谢物(AOZ)特异性抗体。采用对醛基苯甲酸对AOZ进行衍生化得到CPAOZ,还原CPAOZ结构中的C=N双键得到半抗原,半抗原用N-羟基琥珀酰亚胺活化酯法与BSA偶联制备免疫原,免疫新西兰... 为改进和完善免疫检测呋喃唑酮代谢物方法,制备了抗呋喃唑酮代谢物(AOZ)特异性抗体。采用对醛基苯甲酸对AOZ进行衍生化得到CPAOZ,还原CPAOZ结构中的C=N双键得到半抗原,半抗原用N-羟基琥珀酰亚胺活化酯法与BSA偶联制备免疫原,免疫新西兰大白兔制得特异性抗体,采用间接(竞争)ELISA法评价抗血清效价及特异性。结果显示,试验获得了较高效价(1∶1280000)的抗AOZ血清,AOZ半抑制浓度为5.9 ng/mL;抗血清与结构类似物呋喃它酮代谢物的交叉反应率仅为0.76%,与呋喃妥因代谢物和呋喃西林代谢物无交叉反应;利用该抗体建立的间接竞争ELISA检测法,AOZ在1～27 ng/mL与抑制率呈线性关系。结果表明,该特抗体虽然灵敏度较低,却对AOZ而非AOZ衍生物有特异性,可为畜产品中AOZ残留检测提供新的思路和方法。 展开更多

关键词 呋喃唑酮代谢物 特异性抗体 间接(竞争)ELISA

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内皮素在肠源性内毒素血症发病中的作用 被引量：2

16

作者 王伟阳 董淑云 +1 位作者 张连元 唐朝枢 《北京医科大学学报》 CSCD 1993年第4期242-244,共3页

本实验在整体大鼠和离体大鼠回肠血管灌流模型上,观察外源性给予内皮素和内皮素抗血清对肠道内毒素转运的影响。结果表明,内皮素能促进健康大鼠肠道内毒素的转运,内皮素抗血清能拮抗循环中的内毒素促进肠道内毒素转运的作用。提示,内皮... 本实验在整体大鼠和离体大鼠回肠血管灌流模型上,观察外源性给予内皮素和内皮素抗血清对肠道内毒素转运的影响。结果表明,内皮素能促进健康大鼠肠道内毒素的转运,内皮素抗血清能拮抗循环中的内毒素促进肠道内毒素转运的作用。提示,内皮素可能是循环内毒素促进肠道内毒素转运的中间介质之一,参与肠源性内毒素血症的发病过程。 展开更多

关键词 内皮素 抗血清 内毒素血症 肠源性

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大豆主要过敏原Gly m Bd 28K的分离纯化及多抗血清的制备 被引量：1

17

作者 席俊 高学梅 +1 位作者 闫慧丽 陆启玉 《粮食与油脂》 北大核心 2015年第4期19-21,共3页

该文从脱脂大豆粉中分离纯化28K(Gly m Bd 28K)蛋白,并制备多抗血清。方法用碱溶酸提法提取28K蛋白,盐析法制得28K粗蛋白,DEAE–Sepharose CL–6B层析纯化28K蛋白,SDS–聚丙烯酰胺凝胶电泳检测蛋白的纯度,制备兔抗血清,用间接ELISA法检... 该文从脱脂大豆粉中分离纯化28K(Gly m Bd 28K)蛋白,并制备多抗血清。方法用碱溶酸提法提取28K蛋白,盐析法制得28K粗蛋白,DEAE–Sepharose CL–6B层析纯化28K蛋白,SDS–聚丙烯酰胺凝胶电泳检测蛋白的纯度,制备兔抗血清,用间接ELISA法检测效价。该实验纯化出28K蛋白,制备了抗28K的多抗血清,效价为1∶51200。为研究大豆主要过敏原蛋白28K的单克隆抗体制备及28K的Ig G结合表位的确定奠定了基础。 展开更多

关键词 28K蛋白 分离纯化 多抗血清

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吉林白鹅α干扰素基因的原核表达及抗血清的制备 被引量：1

18

作者 李公美 胡静涛 +4 位作者 李玉梅 李茂辉 闫金明 刘可越 钱爱东 《中国兽药杂志》 2012年第12期9-12,共4页

采用PCR方法扩增了吉林白鹅ɑ干扰素(JL-GoIFN-α)成熟肽编码序列,将IFN-α片段定向插入原核表达载体pGEX-6p-1中,构建重组质粒pGEX-IFN-ɑ,将重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)的感受态细胞里,在IPTG诱导下表达可溶性的融合蛋白(GST-IFN-... 采用PCR方法扩增了吉林白鹅ɑ干扰素(JL-GoIFN-α)成熟肽编码序列,将IFN-α片段定向插入原核表达载体pGEX-6p-1中,构建重组质粒pGEX-IFN-ɑ,将重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)的感受态细胞里,在IPTG诱导下表达可溶性的融合蛋白(GST-IFN-ɑ)。SDS-PAGE、Western-blot检测结果表明,重组吉林白鹅IFN-ɑ融合蛋白(rJL-GoIFN-α)的分子量大小约为43 ku,表达量占菌体总蛋白的25%。重组吉林白鹅α干扰素,经谷胱甘肽Sepharose-4B亲和柱层析纯化后,经过透析复性,得到纯化的目的蛋白,含量可达0.25 mg/mL。将复性蛋白免疫新西兰白兔3次,制备高滴度的鹅IFN-ɑ抗血清。本实验表达和纯化了鹅的IFN-ɑ,并制备了兔抗鹅的IFN-ɑ抗血清,为下一阶段鹅ɑ干扰素重组蛋白的应用奠定了基础。 展开更多

关键词 吉林白鹅 ɑ干扰素 抗血清

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PapG重组蛋白免疫血清抗UPEC粘附作用的研究

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作者 郑铃 刘超斌 +1 位作者 郑秀芬 陈锦英 《中国人兽共患病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期751-754,共4页

目的探讨尿道致病性大肠埃希菌(UPEC)P菌毛粘附素PapG重组蛋白免疫血清的体外抗细菌粘附作用。方法建立UPEC的Vero细胞感染模型,制备PapG重组蛋白和谷胱甘肽S-转移酶(GST)担体蛋白免疫血清,检测这两种抗血清在血凝和细胞粘附抑制试验中... 目的探讨尿道致病性大肠埃希菌(UPEC)P菌毛粘附素PapG重组蛋白免疫血清的体外抗细菌粘附作用。方法建立UPEC的Vero细胞感染模型,制备PapG重组蛋白和谷胱甘肽S-转移酶(GST)担体蛋白免疫血清,检测这两种抗血清在血凝和细胞粘附抑制试验中的作用。结果重组蛋白免疫血清可抑制UPEC野生株所产生的甘露糖抗性血凝;可明显降低细菌对Vero细胞的粘附率,减轻或延缓细菌对细胞的毒性作用。而担体蛋白免疫血清则无上述作用。结论由PapG粘附素与GST构成的重组融合蛋白(GST-PapG)诱导产生的免疫血清在体外具有抵抗UPEC粘附的能力,而且这种抗粘附作用主要针对P菌毛的PapG粘附素。 展开更多

关键词 大肠杆菌 细菌粘附 免疫血清

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传染性造血组织坏死病毒糖蛋白基因的原核表达及抗原性分析

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作者 赵永欣 赵丽丽 +5 位作者 刘巍巍 王健楠 李一经 乔薪瑗 葛俊伟 刘敏 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期81-85,共5页

应用RT-PCR方法扩增了传染性造血组织坏死病毒IHNV-ZYX株编码的糖蛋白(G)基因,将G基因克隆至原核表达载体pET30b,并在大肠杆菌Rosetta(DE3)中得到了表达。SDS-PAGE分析表明,重组菌诱导后得到了预期大小的G蛋白。提取G蛋白的包涵体,并制... 应用RT-PCR方法扩增了传染性造血组织坏死病毒IHNV-ZYX株编码的糖蛋白(G)基因,将G基因克隆至原核表达载体pET30b,并在大肠杆菌Rosetta(DE3)中得到了表达。SDS-PAGE分析表明,重组菌诱导后得到了预期大小的G蛋白。提取G蛋白的包涵体,并制备抗血清。间接ELISA和Western-blotting结果显示,重组表达的G蛋白与天然的IHNV G蛋白一样具有抗原性。试验为进一步研究IHNV G基因的免疫保护作用,为灵敏高效的检测传染性造血组织坏死病的方法的建立和基因工程疫苗的研制奠定了基础。 展开更多

关键词 传染性造血组织坏死病毒 G基因 克隆表达 抗血清

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