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Pim-3对抗心肌细胞缺氧/复氧损伤的研究 被引量:9
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作者 刘丹 何明 +3 位作者 易波 阙爱玲 徐江晶 张吉翔 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期321-325,共5页
目的研究原癌基因Pim-3对心肌细胞急性缺氧/复氧(A/R)损伤的保护作用。方法采用原代培养新生大鼠的心肌细胞A/R损伤和缺氧预适应(APC)保护模型,将已经构建好的pEGFP-N2/Pim-3质粒导入原代培养的乳鼠心肌细胞中,实验结束后测定Pim-3mRNA... 目的研究原癌基因Pim-3对心肌细胞急性缺氧/复氧(A/R)损伤的保护作用。方法采用原代培养新生大鼠的心肌细胞A/R损伤和缺氧预适应(APC)保护模型,将已经构建好的pEGFP-N2/Pim-3质粒导入原代培养的乳鼠心肌细胞中,实验结束后测定Pim-3mRNA及蛋白表达水平(RT-PCR、Western blot法)的改变,同时检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、四唑盐(MTT)比色试验测定细胞存活率、TUNEL法检测细胞凋亡。结果RT-PCR和Western blot结果显示,Pim-3在正常组几乎不表达,A/R组表达明显升高,缺氧预适应(APC)+A/R组表达则进一步升高;转染pEGFP-N2/Pim-3质粒后24h,荧光倒置显微镜显示转染效率达30%;在A/R损伤后,Pim-3基因转染组较未转染组的心肌细胞LDH值明显降低,细胞存活率则明显升高,心肌细胞的凋亡指数明显下降。结论在细胞水平,Pim-3参与心肌APC保护作用,导入外源性的Pim-3基因能对抗急性A/R损伤。 展开更多
关键词 原癌基因 PIM-3 缺氧/复氧损伤 缺氧预适应 心肌保护
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TNF-α含量的改变与肾小管细胞缺氧-复氧性损伤关系的研究 被引量:8
2
作者 董文斌 杜逸亭 +3 位作者 陈跃 航永伦 陈枫 邓存良 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期690-692,共3页
目的:探讨TNF-α含量的改变与肾小管上皮细胞株(HK-2)缺氧-复氧性损伤的关系。方法:以HK-2细胞株作为研究材料,采用液体石蜡覆盖法建立缺氧损伤模型,分别在缺氧4、12、24h和复氧4、12、24h,采用放射免疫分析法(RIA)、生化法和台盼蓝拒染... 目的:探讨TNF-α含量的改变与肾小管上皮细胞株(HK-2)缺氧-复氧性损伤的关系。方法:以HK-2细胞株作为研究材料,采用液体石蜡覆盖法建立缺氧损伤模型,分别在缺氧4、12、24h和复氧4、12、24h,采用放射免疫分析法(RIA)、生化法和台盼蓝拒染法,检测培养液中TNF-α的含量、乳酸脱氢酶(LDH)的活性、细胞计数及活细胞率的改变。结果:缺氧后4h,TNF-α的含量、LDH的活性开始升高,细胞总数及活细胞计数开始下降,并于缺氧后24h达高峰。TNF-α含量的改变与LDH活性的升高呈显著的正相关(r=0.89,P<0.05),与活细胞计数的下降呈显著的负相关(r=-0.91,P<0.05)。结论:肾小管缺氧-复氧后,TNF-α的产生增多,并参与了肾小管细胞损伤的过程。 展开更多
关键词 缺氧/复氧 TNF-Α 肾小管上皮细胞
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异氟醚减少离体鼠肝缺氧-复氧损伤 被引量:5
3
作者 李泉 俞卫锋 +3 位作者 徐学武 宋金超 宋建钢 刘志强 《临床麻醉学杂志》 CAS CSCD 2005年第9期618-620,共3页
目的研究不同浓度异氟醚对离体鼠肝缺氧-复氧损伤的影响。方法将大鼠肝脏取下,置于离体鼠肝灌流仪中,以经95%O2/5%CO2饱和的改良克-林氏碳酸氢盐缓冲液恒压灌流(有氧状态用1.2kPa,缺氧状态用0.2kPa),维持生理pH值和温度,实时监测灌流液... 目的研究不同浓度异氟醚对离体鼠肝缺氧-复氧损伤的影响。方法将大鼠肝脏取下,置于离体鼠肝灌流仪中,以经95%O2/5%CO2饱和的改良克-林氏碳酸氢盐缓冲液恒压灌流(有氧状态用1.2kPa,缺氧状态用0.2kPa),维持生理pH值和温度,实时监测灌流液中乳酸脱氢酶(LDH)变化。不同浓度异氟醚随混合气带入人工肺。用细胞色素C还原法测非循环灌流中氧自由基(O2-)产量。结果(1)异氟醚对基础状态下离体肝LDH释放无明显影响,而对缺氧-复氧后离体肝LDH释放呈剂量依赖性抑制作用。(2)2 MAC异氟醚可明显抑制肝复氧后O2-产生。结论异氟醚抑制了复氧后LDH升高与抑制复氧即刻O2-产生密切相关,异氟醚可能通过减少细胞外氧应激,从而保护肝脏免受损伤。 展开更多
关键词 异氟醚 缺氧-复氧损伤 氧自由基 缺氧-复氧损伤 大鼠肝脏 异氟醚 离体鼠 细胞色素C还原法 缺氧-复氧后 不同浓度 缺氧状态 O2^-
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参麦注射液对急性缺氧-复氧心肌细胞凋亡的影响 被引量:12
4
作者 郝然 陈彦静 黄启福 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期1524-1527,共4页
目的:观察参麦注射液对急性缺氧-复氧后心肌细胞凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法:采用原代培养的大鼠心肌细胞,通过化学缺氧法使细胞缺氧5min,再恢复氧供应15min,复制心肌细胞缺氧-复氧(anoxi-a-reoxygenation,A/R)模型。Annexin V-F... 目的:观察参麦注射液对急性缺氧-复氧后心肌细胞凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法:采用原代培养的大鼠心肌细胞,通过化学缺氧法使细胞缺氧5min,再恢复氧供应15min,复制心肌细胞缺氧-复氧(anoxi-a-reoxygenation,A/R)模型。Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞仪检测细胞凋亡百分率;Fluo-3负载激光扫描共聚焦显微镜观察细胞内钙离子水平。结果:A/R组心肌细胞凋亡百分率明显高于正常组,细胞内平均钙离子荧光强度也显著强于正常组(P<0·01)。参麦注射液组细胞凋亡率显著小于A/R组,同时细胞内钙超载也明显轻于A/R组(P<0·01)。结论:参麦注射液能有效抑制缺氧-复氧心肌细胞的凋亡,这种保护作用的机制之一可能是通过减轻细胞内Ca2+超负荷实现的。 展开更多
关键词 参麦注射液 心肌细胞 缺氧-复氧 细胞凋亡 钙超载
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Caco-2细胞缺氧复氧损伤后二肽载体表达及生物学功能的改变 被引量:5
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作者 赵小辰 王广基 +1 位作者 孙炳伟 吴晓兰 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期74-77,共4页
目的 :探讨Caco 2细胞缺氧复氧 (anoxia/reoxygenation ,A/R)损伤后二肽载体表达及生物学功能的变化。方法 :采用Caco 2细胞A/R方法 ,模拟临床缺血再灌注 (ischemia/reperfusioninjury ,I/R)。Caco 2细胞正常培养和A/R后 (缺氧 90min ,... 目的 :探讨Caco 2细胞缺氧复氧 (anoxia/reoxygenation ,A/R)损伤后二肽载体表达及生物学功能的变化。方法 :采用Caco 2细胞A/R方法 ,模拟临床缺血再灌注 (ischemia/reperfusioninjury ,I/R)。Caco 2细胞正常培养和A/R后 (缺氧 90min ,复氧 3 0min)后 ,测定二肽载体对头孢氨苄的摄取功能 ;采用流式细胞术观察损伤后Caco 2细胞的凋亡情况 ;同时比较两种培养情况下二肽载体的mRNA水平。结果 :A/R后二肽载体对头孢氨苄的摄取能力下降 ;损伤后Caco 2细胞凋亡水平较正常细胞明显提高 ;Northernblotting显示损伤后二肽载体mRNA水平下调。结论 :A/R后Caco 2细胞二肽载体mRNA下降从基因水平下调了二肽载体对头孢氨苄的摄取功能。提示Caco 展开更多
关键词 CACO-2细胞 缺氧复氧损伤 二肽载体 生物学功能 头孢氨苄
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p38MAPK/14-3-3γ通路在LPS预处理对抗心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用 被引量:8
6
作者 刘丹 尹东 +3 位作者 廖章萍 孙惦 许旻 何明 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1239-1243,共5页
目的研究p38MAPK/14-3-3γ通路在LPS预处理对抗缺氧/复氧(A/R)损伤中的作用。方法采用原代培养乳鼠心肌细胞,建立A/R损伤模型及APC、LPS预处理保护模型。实验结束后测定p38MAPK磷酸化蛋白表达及14-3-3γ蛋白表达,同时检测培养液中乳酸... 目的研究p38MAPK/14-3-3γ通路在LPS预处理对抗缺氧/复氧(A/R)损伤中的作用。方法采用原代培养乳鼠心肌细胞,建立A/R损伤模型及APC、LPS预处理保护模型。实验结束后测定p38MAPK磷酸化蛋白表达及14-3-3γ蛋白表达,同时检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、四唑盐(MTT)比色试验测定细胞存活率、TUNEL法检测细胞凋亡、线粒体肿胀实验检测线粒体通透性转换孔(mPTP)开放、流式细胞仪检测线粒体膜电位。结果 LPS预处理对随后心肌A/R损伤有类似APC的保护作用,同时伴随p38MAPK的磷酸化水平升高和14-3-3γ蛋白表达升高;给予SB203850特异性阻断p38MAPK通路,则14-3-3γ蛋白表达明显下调,并且心肌细胞LDH值升高,细胞存活率下降,心肌细胞的凋亡指数升高,mPTP开放加剧,线粒体膜电位降低。结论 LPS预处理对心肌细胞A/R损伤有保护作用,其机制可能是通过激活p38 MAPK,上调14-3-3γ的表达实现。 展开更多
关键词 缺氧/复氧损伤 心肌保护 LPS 凋亡 14-3- P38MAPK通路
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miR-499对缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡的影响 被引量:16
7
作者 岳莹 吕风华 +2 位作者 陈玉磊 王卓 司澳洋 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2018年第4期503-507,共5页
目的:探讨miR-499对缺氧/复氧诱导的原代心肌细胞凋亡的影响,探讨其与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路的关系。方法:通过对原代培养新生大鼠心肌细胞行缺氧3 h/复氧4 h,模拟大鼠心肌缺血再灌注损伤;将细胞分为4组:正常对照组... 目的:探讨miR-499对缺氧/复氧诱导的原代心肌细胞凋亡的影响,探讨其与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路的关系。方法:通过对原代培养新生大鼠心肌细胞行缺氧3 h/复氧4 h,模拟大鼠心肌缺血再灌注损伤;将细胞分为4组:正常对照组、缺氧/复氧组(A/R组)、缺氧/复氧+miR-499激动剂agomir预处理组(Agomir组)、缺氧/复氧+miR-499激动剂agomir+PI3K特异性阻断剂LY294002组(Agomir+LY294002组)。采用MTT方法检测各组心肌细胞活力,分别采用荧光定量PCR方法和Western blot法检测各组心肌细胞中miR-499、PI3K mRNA及Caspase-3、p-PI3K和p-Akt蛋白表达水平的变化。结果:与正常对照组相比,A/R组心肌细胞活力下降,miR-499及PI3K mRNA表达量减少,p-PI3K及p-Akt蛋白表达量减少,Caspase-3蛋白表达量增加(P<0.05);但经Agomir处理后,心肌细胞活力增加,miR-499及PI3K mRNA表达量增加;p-PI3K及p-Akt蛋白表达量增加;与A/R组相比,Caspase-3蛋白表达量减少(P<0.05);而agomir的作用可被LY294002即PI3K阻断剂抑制。结论:miR-499可以减少缺氧/复氧所诱导的心肌细胞的凋亡,这可能与其活化PI3K/Akt信号通路有关。 展开更多
关键词 miR-499 缺氧/复氧 细胞凋亡 磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B通路
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RISK信号通路在β_2-肾上腺素受体激动剂Clenbuterol减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用 被引量:5
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作者 张秋芳 谭艳 +5 位作者 汪选斌 潘龙瑞 李洪亮 刘慧 向继洲 付琴 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1368-1374,共7页
目的研究β2-肾上腺素受体激动剂clenbuterol对原代培养的心肌细胞缺氧/复氧损伤的作用及其是否与激活再灌注损伤挽救激酶(reperfusion injury salvage kinase,RISK)信号通路有关。方法将原代培养的新生Wistar大鼠乳鼠心肌细胞分为8组,... 目的研究β2-肾上腺素受体激动剂clenbuterol对原代培养的心肌细胞缺氧/复氧损伤的作用及其是否与激活再灌注损伤挽救激酶(reperfusion injury salvage kinase,RISK)信号通路有关。方法将原代培养的新生Wistar大鼠乳鼠心肌细胞分为8组,1正常培养组;2缺氧/复氧(A/R)组;3clenbuterol(1μmol·L-1)+A/R;4ICI118,551(10μmol·L-1)+clenbuterol(1μmol·L-1)+A/R组;5美托洛尔metoprolol(10μmol·L-1)+clenbuterol(1μmol·L-1)+A/R组;6 metoprolol(10μmol·L-1)+A/R组;7 PD98059(20μmol·L-1)+clenbuterol(1μmol·L-1)+A/R组;8LY294002(10μmol·L-1)+clenbuterol(1μmol·L-1)+A/R组。采用MTT法测定各组细胞存活率;比色法检测心肌细胞培养液的乳酸脱氢酶(LDH)含量;Hoechst 33342荧光染色法检测细胞凋亡率;分子探针DCFH-DA检测细胞内活性氧的水平;Western blot检测心肌细胞缺氧/复氧后ERK及p-ERK1/2蛋白的表达水平。结果与A/R组比较,clenbuterol+A/R组明显增高细胞存活率,降低LDH含量,降低细胞凋亡率,ROS产生减少,p-ERK1/2蛋白表达水平增高,而选择性β2受体阻断剂ICI 118,551可取消clenbuterol的上述作用,β1受体阻断剂Metoprolol对clenbuterol的作用无影响,PI3K抑制剂LY294002和ERK1/2抑制剂PD98059可阻断clenbuterol对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用。结论clenbuterol能够减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤,加入选择性β2受体阻断剂ICI 118,551,PI3K抑制剂LY294002和ERK抑制剂PD98059均使clenbuterol的保护作用取消,表明clenbuterol可通过激动β2肾上腺素受体,激活RISK信号通路发挥抗心肌细胞缺氧/复氧损伤的作用。 展开更多
关键词 CLENBUTEROL 缺氧/复氧 心肌细胞 磷酸化ERK PI3K REPERFUSION injury SALVAGE kinase(RISK)
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异丙酚预处理对HK-2细胞缺氧/复氧损伤后水通道蛋白1表达的影响 被引量:5
9
作者 冯娅妮 孙大志 马虹 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期572-574,共3页
目的观察异丙酚预处理对HK-2细胞缺氧/复氧损伤后水通道蛋白(AQP-1)表达的影响。方法将培养的HK-2细胞随机分为4组:对照组(A组):细胞未经任何处理;氯化钴(CoCl2)组(B组):培养孔中加入300μmol/L的CoCl2处理4 h,然后更换正常的培养基培养... 目的观察异丙酚预处理对HK-2细胞缺氧/复氧损伤后水通道蛋白(AQP-1)表达的影响。方法将培养的HK-2细胞随机分为4组:对照组(A组):细胞未经任何处理;氯化钴(CoCl2)组(B组):培养孔中加入300μmol/L的CoCl2处理4 h,然后更换正常的培养基培养24 h,之后更换无血清的培养基培养;脂肪乳剂组(C组):培养孔中加入10%脂肪乳剂90μl预处理1 h,余同B组;异丙酚组(D组):培养孔中加入用DMEM稀释至终浓度25μmol/L的异丙酚预处理1 h,余同B组。MTT法测定细胞增殖,RT-PCR技术检测AQP-1和bcl-2 mRNA的表达。结果经过25μmol/L的异丙酚预处理1 h后,HK-2细胞的增殖明显增高(P<0.01),AQP-1 mRNA的表达明显减少(P<0.01),bcl-2 mRNA的表达明显增加(P<0.01)。结论异丙酚预处理通过调节AQP-1和bcl-2的表达从而减轻HK-2细胞缺氧/复氧后的损伤。 展开更多
关键词 异丙酚 水通道蛋白-1 bcl-2 肾缺氧 复氧
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反义寡核苷酸抑制早期生长反应基因-1表达对内皮细胞缺氧复氧损伤的影响 被引量:2
10
作者 周燕琼 张艳美 +4 位作者 高分飞 黄展勤 陈一村 郑燕珊 石刚刚 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2015年第1期14-18,共5页
目的:研究反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotides,AS-ODN)抑制早期生长反应基因1(early growth response gene-1,Egr-1)表达对内皮细胞缺氧复氧(anoxia/reoxygenation,A/R)损伤的影响。方法:采用新生大鼠进行心脏微血... 目的:研究反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotides,AS-ODN)抑制早期生长反应基因1(early growth response gene-1,Egr-1)表达对内皮细胞缺氧复氧(anoxia/reoxygenation,A/R)损伤的影响。方法:采用新生大鼠进行心脏微血管内皮细胞(cardiac microvascular endothelial cells,CMECs)原代培养,取3~4代的CMECs建立缺氧复氧模型。细胞随机分为6组:对照(Con)组、缺氧复氧组(A/R)、溶剂组(LIP)、反义寡核苷酸转染组(AS)、正义寡核苷酸转染组(S)和错配寡核苷酸转染组(Sc)。通过测定细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)及内皮细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量,观察内皮细胞损伤程度;应用ELISA法测定细胞培养上清液肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量,观察内皮细胞炎症反应水平;Western-blot法检测培养内皮细胞中Egr-1的蛋白表达水平;显微镜下观察细胞形态学改变并计算存活率。结果:A/R造成内皮细胞内MDA升高,SOD下降,上清液中LDH、TNF-α含量升高,A/R刺激下细胞Egr-1的蛋白表达水平明显升高;A/R刺激前给予AS-ODN可抑制Egr-1蛋白的表达,减轻内皮细胞的损伤及炎症反应程度,提高细胞存活率。结论:AS-ODN抑制培养内皮细胞Egr-1的表达,并降低A/R损伤,提示Egr-1与缺氧复氧所致的心脏微血管内皮细胞损伤密切相关。 展开更多
关键词 反义寡核苷酸 心脏微血管内皮细胞 氧复氧损伤 EGR-1
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缺氧及复氧对hepG2细胞STC-1和STC-2的mRNA表达影响 被引量:1
11
作者 吴子安 谭志容 +3 位作者 徐宁 李涛 李曼 尹芳芳 《实验技术与管理》 CAS 北大核心 2015年第8期58-61,共4页
目的:研究缺氧及复氧对hepG2细胞STC-1和STC-2的mRNA表达影响。方法:用化学缺氧剂氯化钴模拟缺氧环境,用RT-PCR法分别检测在hepG2细胞缺氧和复氧条件下STC-1、STC-2的mRNA表达情况。结果:在hepG2细胞中,STC-1mRNA无论在缺氧还是复氧情况... 目的:研究缺氧及复氧对hepG2细胞STC-1和STC-2的mRNA表达影响。方法:用化学缺氧剂氯化钴模拟缺氧环境,用RT-PCR法分别检测在hepG2细胞缺氧和复氧条件下STC-1、STC-2的mRNA表达情况。结果:在hepG2细胞中,STC-1mRNA无论在缺氧还是复氧情况下,几乎不表达;STC-2mRNA在缺氧条件下表达升高,并随着缺氧时间延长而升高,复氧后表达又降低,并随复氧时间延长而恢复至正常。结论:STC-2与肝癌的发生发展过程密切相关。 展开更多
关键词 HEPG2细胞 人斯钙素-1 人斯钙素-2 缺氧 复氧 STC-1 STC-2
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pFLAG-AMPKα2真核表达质粒构建及对心肌缺氧/复氧损伤的作用 被引量:1
12
作者 刘丹 钟斌 +3 位作者 万青 曾姝 吴晓牧 何明 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2012年第12期1333-1338,共6页
目的:构建大鼠pFLAG-AMPKα2真核表达质粒,分析AMPKα2过表达对心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响。方法:提取H9c2心肌样细胞的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增AMPKα2基因的cDNA全长,并将其克隆至pFLAG-CMV-4构建pFLAG-AMPKα2重组质粒。转染pFL... 目的:构建大鼠pFLAG-AMPKα2真核表达质粒,分析AMPKα2过表达对心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响。方法:提取H9c2心肌样细胞的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增AMPKα2基因的cDNA全长,并将其克隆至pFLAG-CMV-4构建pFLAG-AMPKα2重组质粒。转染pFLAG-AMPKα2至H9c2细胞,West-ern Blot测定AMPKα2的蛋白表达情况,建立缺氧/复氧(A/R)损伤模型,MTT法检测心肌细胞的存活率,生物自动分析仪检测LDH活性,流式细胞术检测各实验组心肌细胞凋亡程度、细胞内ROS的变化,试剂盒检测细胞内抗氧化酶(SOD、GSH-Px)活性。结果:AMPKα2全长基因序列克隆至真核表达载体pFLAG-CMV-4,酶切鉴定片段大小为1700bp,Western blot检测转染pFLAG-AMPKα2后,AMPKα2蛋白在H9c2细胞中高表达。H9c2细胞遭受A/R损伤,心肌细胞存活率下降,LDH活性增加,细胞凋亡加重,ROS生成增加,SOD及GSH-Px的酶活性下降,pFLAG-AMPKα2重组质粒的导入可明显逆转、改善上述各项指标,从而对抗A/R损伤。结论:构建成功的pFlAG-AMPKα2重组质粒能对抗A/R所致的心肌细胞损伤,其机制与改善心肌细胞的氧化应激作用有关。 展开更多
关键词 AMPKα2 缺氧 复氧损伤 凋亡 ROS 氧化应激
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人urotensin Ⅱ对大鼠心肌细胞缺氧-再给氧损伤的保护作用及机制 被引量:2
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作者 王荣俊 丁波 +1 位作者 文继月 陈志武 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2016年第12期1341-1346,共6页
目的:研究人urotensinⅡ(human urotensin II,h UII)对大鼠心肌细胞缺氧-再给氧损伤的作用及机制。方法:将培养的新生大鼠心肌细胞缺氧3 h后再给氧3 h造成细胞缺氧再给氧损伤(A/R)模型,用台盼蓝染色和MTT染色法分别检测细胞存活率和细... 目的:研究人urotensinⅡ(human urotensin II,h UII)对大鼠心肌细胞缺氧-再给氧损伤的作用及机制。方法:将培养的新生大鼠心肌细胞缺氧3 h后再给氧3 h造成细胞缺氧再给氧损伤(A/R)模型,用台盼蓝染色和MTT染色法分别检测细胞存活率和细胞活性,测定细胞培养上清液中肌酸激酶(CK)和一氧化氮合酶(NOS)活性及一氧化氮(NO)和心肌肌钙蛋白I(c Tn I)含量,用激光共聚焦显微镜检测细胞内游离Ca^(2+)荧光强度。结果:在1×10^(-10.5)~1×10^(-9.5)mol/L范围内,h UII明显地抑制A/R损伤引起的大鼠心肌细胞存活率和细胞活性的下降、CK活性和c Tn I含量的增高、NOS活性和NO含量的降低及心肌细胞内游离Ca^(2+)含量的增高,但1×10^(-9)、1×10^(-8.5)、1×10^(-8)mol/L h UII却无上述抑制作用。结论:h UII在低浓度时,对大鼠心肌细胞缺氧性损伤有保护作用,其机制可能与促进NO合成和降低细胞内游离Ca^(2+)有关。 展开更多
关键词 urotensinⅡ 心肌细胞 缺氧再给氧损伤 细胞内游离钙离子 一氧化氮
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地氟醚预处理对缺氧/复氧损伤ECV304细胞NF-κB活性的影响 被引量:1
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作者 李渊 张小楠 +1 位作者 朱彪 薛张纲 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期881-884,共4页
目的探讨地氟醚预处理对缺氧/复氧(A/R)损伤ECV304细胞NF-κB活性的影响。方法选用ECV304细胞株.实验分为两部分:(1)将细胞分为空白对照组及TNF-α不同持续时间刺激组共6组,用West-ernblot法分析NF-κB的抑制因子IκB蛋白的降解和磷酸化... 目的探讨地氟醚预处理对缺氧/复氧(A/R)损伤ECV304细胞NF-κB活性的影响。方法选用ECV304细胞株.实验分为两部分:(1)将细胞分为空白对照组及TNF-α不同持续时间刺激组共6组,用West-ernblot法分析NF-κB的抑制因子IκB蛋白的降解和磷酸化。(2)将细胞分为5组,即空白对照组(Ⅰ组)、A/R组(Ⅱ组)、A/R+TNF-α10ng/mL刺激组(Ⅲ组)、地氟醚1.0MAC预处理+A/R组(Ⅳ组)和地氟醚1.0MAC预处理+A/R+TNF-α10ng/mL刺激组(Ⅴ组)。用间接免疫荧光法检测各组细胞NF-κB/p65亚基的定位。结果TNF-α刺激ECV304细胞后,IκB-α蛋白降解的时间高峰为30min,而IκB-α磷酸化的时间高峰为1h。A/R损伤可激活ECV304细胞中NF-κB的活性,而经1.0MAC地氟醚预处理后,由TNF-α激活的上述变化可受到抑制。免疫荧光分析显示,TNF-α刺激可使NF-κB/p65荧光标记由胞浆区转入胞核区,而经地氟醚预处理后,NF-κB/p65入核明显减少。结论抑制NF-κB的激活可能是地氟醚预处理减少ECV304细胞缺氧/复氧损伤的机制之一。 展开更多
关键词 地氟醚 缺氧/复氧损伤 NF-ΚB TNF-α
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异氟烷改善离体鼠肝缺氧-复氧后氧供耗平衡
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作者 李泉 俞卫锋 +4 位作者 李丽 徐学武 宋建刚 周脉涛 刘志强 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期200-202,共3页
目的:研究异氟烷对离体鼠肝在缺氧-复氧状态下肝流量和肝氧耗的作用。方法:建立离体鼠肝灌流模型。将大鼠肝脏取下,置于离体鼠肝灌流仪中,以经95%O2/5%CO2饱和的改良克-林碳酸氢盐缓冲液恒压灌流(有氧状态用1.2 kPa,缺氧状态用0.2 kPa)... 目的:研究异氟烷对离体鼠肝在缺氧-复氧状态下肝流量和肝氧耗的作用。方法:建立离体鼠肝灌流模型。将大鼠肝脏取下,置于离体鼠肝灌流仪中,以经95%O2/5%CO2饱和的改良克-林碳酸氢盐缓冲液恒压灌流(有氧状态用1.2 kPa,缺氧状态用0.2 kPa),另外加入葡萄糖10 mmol/L维持营养,加入1%牛血清白蛋白维持胶体渗透压,控制在生理pH值和温度,实时监测氧分压和肝流量变化。不同浓度异氟烷随混合气带入离体鼠肝灌注的人工肺。结果:(1)异氟烷对基础状态下鼠肝流量无明显影响,但可改善缺氧后复氧状态下鼠肝流量的减少。(2)异氟烷对基础状态下鼠肝氧耗有降低作用,但在复氧状态下却改善了鼠肝氧耗的下降。结论:异氟烷能改善离体鼠肝缺氧-复氧后氧供耗平衡,保护肝脏功能。 展开更多
关键词 异氟烷 缺氧-复氧 氧供耗平衡 离体肝脏
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黄精多糖通过TLR4-MyD88-NF-κB通路抑制缺氧/复氧H9c2心肌细胞炎性因子释放 被引量:39
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作者 雷升萍 王靓 +4 位作者 龙子江 施慧 高华武 朱永恒 李丽 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期255-260,共6页
目的探讨黄精多糖(Polygonatum sibiricum polysaccharides,PSP)对缺氧/复氧(hypoxia-reoxygenation,H/R)诱导H9c2心肌细胞Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)-髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)-核因子-κ... 目的探讨黄精多糖(Polygonatum sibiricum polysaccharides,PSP)对缺氧/复氧(hypoxia-reoxygenation,H/R)诱导H9c2心肌细胞Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)-髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)-核因子-κB(nuclear factorκB,NF-κB)信号通路的调节作用。方法体外培养H9c2心肌细胞并随机分组:正常对照组(C组)、模型组(H/R组)、黄精多糖组(PSP组)、TLR4抑制剂(TAK-242组)和PSP+TAK-242组。C组细胞用正常培养液常规培养27 h;H/R组细胞进行缺氧21 h/复氧6 h处理;TAK-242组、PSP组和PSP+TAK-242组的细胞在缺氧培养21 h前分别加入含TAK-242、PSP和PSP+TAK-242的培养基培养12 h,在常规条件下复氧6 h。PSP和TAK-242的终浓度分别是1.5 g·L^(-1)和1μmol·L^(-1)。处理结束后,采用MTT法检测细胞活力,ELISA法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α和白介素(interleukin,IL)-1β含量,Western blot检测NF-κB和inhibitorκBα(IκBα)的蛋白表达,荧光定量PCR法检测H9c2心肌细胞中TLR4、MyD88的mRNA表达。结果与H/R组比较,PSP组、TAK-242组和PSP+TAK-242组均能明显提高H/R损伤后心肌细胞的存活率,减轻其炎性因子渗出,明显下调NF-κB的表达,抑制H/R诱导的IκBα蛋白的降解,降低TLR4和MyD88基因的表达。结论 PSP保护H9c2心肌细胞H/R损伤的机制可能与抑制TLR4-MyD88-NF-κB信号通路有关。 展开更多
关键词 黄精多糖 H9C2心肌细胞 缺氧/复氧 TLR4 MYD88 NF-ΚB 炎症
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Bcl-2介导的芹菜素抗心肌细胞缺氧/复氧损伤作用 被引量:4
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作者 周敏 游嘉振 +5 位作者 何欢 刘丹 廖章萍 汤蕾 尹东 何明 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期122-127,共6页
目的探讨芹菜素(apigenin,Api)在心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用,并阐明Api对心肌损伤的保护作用是否主要由Bcl-2介导。方法培养H9c2心肌样细胞;随机分为正常对照(Cont)组、缺氧/复氧(Anoxia/Reoxygenation,A/R)组、Api预处理组、Api+AB... 目的探讨芹菜素(apigenin,Api)在心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用,并阐明Api对心肌损伤的保护作用是否主要由Bcl-2介导。方法培养H9c2心肌样细胞;随机分为正常对照(Cont)组、缺氧/复氧(Anoxia/Reoxygenation,A/R)组、Api预处理组、Api+ABT-737组。MTT法检测细胞存活率;Western blot法检测Bcl-2表达;比色法检测培养液LDH活性、细胞SOD及GSH-Px活性、MDA含量;流式细胞仪检测心肌细胞ROS含量、线粒体膜电位及细胞凋亡。结果 Api预处理25 h后,心肌细胞Bcl-2表达呈剂量依赖性上调(P<0.01);细胞存活率升高,培养液LDH活性降低,细胞SOD、GSH-Px活性升高,MDA含量与ROS生成减少,线粒体膜电位更为稳定,细胞凋亡减少(P<0.01);Bcl-2抑制剂ABT-737则可取消Api的上述心肌保护作用。结论Api抗心肌A/R损伤作用涉及Bcl-2信号通路,至少部分依赖于其对Bcl-2表达水平的上调。 展开更多
关键词 芹菜素 BCL-2 缺氧/复氧损伤 心肌细胞保护 细胞凋亡 线粒体
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血必净注射液对缺氧-复氧大鼠心肌炎性反应中TNF-α水平的影响 被引量:6
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作者 陈玲珑 繆初蕾 +6 位作者 项冰倩 罗梓垠 宋冬 戴雍月 刘亚坤 陈亮 王万铁 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2016年第9期978-983,共6页
目的:探讨血必净(XBJI)注射液对缺氧-复氧大鼠心肌炎性反应中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平的影响。方法:雄性SD大鼠随机分为正常对照组(C组)、平衡灌注组(N组)、模型组(H/R组)、低剂量XBJI组(L组,2 m L/100 m L)、中剂量XBJI组(M组,4 m ... 目的:探讨血必净(XBJI)注射液对缺氧-复氧大鼠心肌炎性反应中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平的影响。方法:雄性SD大鼠随机分为正常对照组(C组)、平衡灌注组(N组)、模型组(H/R组)、低剂量XBJI组(L组,2 m L/100 m L)、中剂量XBJI组(M组,4 m L/100 m L)、高剂量XBJI组(H组,8 m L/100 m L)。大鼠进行灌注/停灌/再复灌方式制备心肌缺氧/复氧模型。对照组在平衡灌注20 min时纪录心率(HR)、左室发展压(LVDP)、左心室发展压最大上升/下降速率(±dp/dt_(max))、左心室内压(LVP)的值,其余各组再灌注结束后记录HR、LVDP、±dp/dt_(max)、LVP的变化。ELISA检测心肌组织TNF-α的浓度,Western blot检测TNF-α蛋白,RT-PCR检测心肌组织TNF-αmRNA的表达。光镜下观察心肌组织结构的改变。结果:与对照组及平衡灌注组相比,其余各组LVDP、±dp/dt_(max)、LVP、HR值均降低(P<0.01),TNF-α浓度、TNF-α蛋白水平和TNF-αmRNA的表达均显著上升(P<0.01);与模型组相比,各剂量血必净组LVDP、±dp/dt_(max)、LVP、HR的值均明显升高(P<0.01)。TNF-α浓度、TNF-α蛋白和TNF-αmRNA的表达均有降低(P<0.01或P<0.05);并以中剂量XBJI组差异最显著(P<0.01);各剂量XBJI组之间差异明显(P<0.05)。光镜下各剂量XBJI组的心肌组织结构异常变化比模型组明显减轻,以中剂量XBJI组减轻最为显著。结论:不同剂量血必净注射液可通过降低TNF-α表达减轻缺氧/复氧大鼠心肌的炎性反应,并以中剂量XBJI(4 m L/100 m L)疗效为最佳。 展开更多
关键词 血必净注射液 缺氧/复氧 心肌 肿瘤坏死因子-α
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碘化N-正丁基氟哌啶醇对大鼠心脏微血管内皮细胞缺氧复氧损伤保护机制的研究 被引量:4
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作者 周燕琼 张艳美 +4 位作者 高分飞 黄展勤 陈一村 郑燕珊 石刚刚 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期207-211,共5页
目的观察碘化Ⅳ.正丁基氟哌啶醇(N-n-butylhalo-peridol iodide,F2)对培养的内皮细胞缺氧/复氧(anoxia/reoxygenation,A/R)损伤及早期生长反应基因-1(early growth response gene1,Egr-1)蛋白表达的影响。方法应用新生SD大... 目的观察碘化Ⅳ.正丁基氟哌啶醇(N-n-butylhalo-peridol iodide,F2)对培养的内皮细胞缺氧/复氧(anoxia/reoxygenation,A/R)损伤及早期生长反应基因-1(early growth response gene1,Egr-1)蛋白表达的影响。方法应用新生SD大鼠进行心脏微血管内皮细胞(cardiacmicrovas.eularendothelialcells,CMECs)原代培养,取3-4代的CMECs建立A/R模型。通过测定细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)及CMECs中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量,观察CMECs损伤程度;应用ELISA法测定细胞培养上清液肿瘤坏死因子-d(TNF-α)的含量,观察CMECs炎症反应水平;Westernblot法检测培养CMECs中Egr一1的蛋白表达水平。结果A/R造成CMECs内MDA升高,SOD下降,上清液中LDH、TNF—α含量升高,A/R刺激下细胞Egr-1的蛋白表达水平明显升高;A/R刺激前给予F2:可减轻CMECs的损伤及炎症反应程度,抑制Egr-1蛋白的表达。结论F:对心脏微血管内皮细胞A/R损伤具有保护作用,该作用可能与其抑制Egr-1的表达有关。 展开更多
关键词 碘化N-正丁基氟哌啶醇 大鼠 心脏微血管内皮细胞 缺氧复氧 损伤 EGR-1
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黄芪多糖对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用 被引量:35
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作者 闵清 白育庭 +3 位作者 余薇 蔡飞 任平 吴基良 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1661-1664,共4页
目的探讨黄芪多糖(APS)对乳大鼠培养心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及其机制。方法取体外培养的乳大鼠心肌细胞建立缺氧/复氧心肌细胞损伤模型,实验分为5组:空白对照组;模型组(A/R组);3个APS给药组,于缺氧及复氧开始时分别加入终浓度... 目的探讨黄芪多糖(APS)对乳大鼠培养心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及其机制。方法取体外培养的乳大鼠心肌细胞建立缺氧/复氧心肌细胞损伤模型,实验分为5组:空白对照组;模型组(A/R组);3个APS给药组,于缺氧及复氧开始时分别加入终浓度为10、30、100mg·mL-1的APS,观察APS对细胞上清液中缺氧/复氧后LDH、CK、AST漏出量、MDA含量、SOD活性。用MTT法检测APS对缺氧/复氧损伤心肌细胞存活率的影响。用流式细胞仪测定APS对缺氧/复氧损伤心肌细胞凋亡的影响。结果 APS可明显减少缺氧/复氧后LDH、CK、AST漏出量(P<0.05或P<0.01);降低MDA含量,提高SOD活性(P<0.05或P<0.01);明显提高缺氧/复氧损伤心肌细胞的存活率,并能明显抑制缺氧/复氧损伤心肌细胞凋亡。结论 APS对培养心肌细胞的缺氧/复氧损伤具有保护作用,作用机制与其增强细胞抗氧化作用,减少自由基及脂质过氧化物导致的细胞膜损伤和抑制细胞凋亡有关。 展开更多
关键词 黄芪多糖 缺氧/复氧 心肌 细胞培养 抗氧化 细胞凋亡
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