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基于LAMP技术的番茄灰霉病早期快速检测
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作者 赵芊 李文 +3 位作者 李西柳 贾振华 封晓娟 宋水山 《河南农业科学》 北大核心 2025年第6期84-91,共8页
由灰葡萄孢菌引起的番茄灰霉病是番茄主要病害之一,对番茄的产量和品质造成严重影响。为了对番茄灰霉病进行早期快速检测,以灰葡萄孢菌的ACTIN基因为靶基因,基于环介导等温扩增技术(Loop‑mediated isothermal amplification,LAMP),设计... 由灰葡萄孢菌引起的番茄灰霉病是番茄主要病害之一,对番茄的产量和品质造成严重影响。为了对番茄灰霉病进行早期快速检测,以灰葡萄孢菌的ACTIN基因为靶基因,基于环介导等温扩增技术(Loop‑mediated isothermal amplification,LAMP),设计并筛选出一组LAMP特异性引物,优化其反应体系和反应条件,实现对灰葡萄孢菌的快速等温扩增。通过琼脂糖凝胶电泳和SYBR GreenⅠ可视化分析,确定BstⅡDNA聚合酶、dNTPs的最佳用量和内外引物最佳比例分别为0.6 U/μL、1.25 mmol/L、2∶1,在61℃反应40 min即可特异性检测出灰葡萄孢菌,其灵敏度可达100 ag/μL,是普通PCR检测灵敏度的106倍。将该方法应用于番茄病害检测时,其对灰葡萄孢菌的孢子检出限达到20个/mL,且可在番茄被侵染4 d、尚无明显灰霉病感病表型的番茄叶片中检测出来,可用于番茄灰霉病的早期快速、灵敏、可视化检测。 展开更多
关键词 番茄 灰葡萄孢菌 灰霉病 环介导等温扩增 ACTIN基因
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EZH2靶向FAK/F⁃actin/ROS信号通路影响结直肠癌进展的机制研究
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作者 刁庆飞 张昊 +4 位作者 杨春白雪 樊建春 武雪亮 韩磊 路永刚 《南京医科大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第8期1110-1122,共13页
目的:探讨Zeste同源物增强子2(enhancer of Zeste homolog 2,EZH2)对黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)/丝状肌动蛋白(filamentous actin,F⁃actin)/活性氧(reactive oxygen species,ROS)通路的调节作用,分析其对结直肠癌(colorecta... 目的:探讨Zeste同源物增强子2(enhancer of Zeste homolog 2,EZH2)对黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)/丝状肌动蛋白(filamentous actin,F⁃actin)/活性氧(reactive oxygen species,ROS)通路的调节作用,分析其对结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞增殖、侵袭和转移的影响。方法:选取河北北方学院附属第一医院行CRC手术切除的患者50例,收集癌组织和癌旁正常组织标本,应用免疫组化法检测EZH2的表达水平,结合临床资料,分析EZH2的表达与临床病理参数及预后生存之间的关系;建立皮下移植瘤CRC裸鼠模型,分为阴性对照(EZH2 NC)组、EZH2过表达(EZH2 mimic)组、EZH2 NC+细胞松弛素D组和EZH2 mimic+细胞松弛素D组,培育14 d后观察肿瘤生长情况。体外培养人CRC细胞系SW480、SW620细胞,采用脂质体转染的方法,将SW480/SW620细胞分为4组:EZH2 NC组、EZH2 mimic组、EZH2 NC+细胞松弛素D组和EZH2 mimic+细胞松弛素D组。通过Western blot实验检测各组细胞中FAK/F⁃actin/ROS通路相关蛋白的表达情况,应用免疫荧光染色观察F⁃actin表达和分布,采用划痕、Transwell、CCK⁃8实验检测细胞迁移、侵袭及细胞活力。ChIP⁃qPCR实验检测局部FAK、NADPH氧化酶2(NADPH oxidase 2,NOX2)、NADPH氧化酶4(NADPH oxidaes 4,NOX4)在EZH2上的富集情况。结果:免疫组化检测结果显示,患者CRC组织较癌旁正常组织高表达EZH2(P<0.05);EZH2的表达水平与肿瘤的淋巴结转移及远处转移事件密切相关(P均<0.05);生存分析结果显示,低表达EZH2 CRC患者的5年总生存率显著高于EZH2高表达患者(P<0.05)。皮下移植瘤CRC裸鼠模型建立成功,EZH2 mimic组肿瘤体积明显大于EZH2 NC组(P<0.05),细胞松弛素D干预后,EZH2 NC+细胞松弛素D组和EZH2 mimic+细胞松弛素D组肿瘤体积分别较EZH2 NC组、EZH2 mimic组明显减小(P均<0.05),但两组间差异无统计学意义(P>0.05)。EZH2 mimic组EZH2、p⁃FAK、p⁃Paxillin、NOX2、NOX4和c⁃Jun氨基末端激酶(c⁃Jun N⁃terminal kinase,JNK)蛋白表达水平明显高于EZH2 NC组(P<0.05),而RUNX家族转录因子3(RUNX family transcription factor 3,RUNX3)蛋白表达水平稍低于EZH2 NC组(P<0.05),且F⁃actin分布数量、迁移能力和细胞活力增加(P<0.05)。EZH2、p⁃FAK和p⁃Paxillin蛋白表达水平较未干预组差异无统计学意义(P>0.05),NOX2、NOX4和p⁃JNK蛋白表达水平较未干预组则明显降低(P<0.05),RUNX3蛋白表达水平较未干预组明显增加(P<0.05),而干预的两组间差异无统计学意义(P>0.05);此外,细胞松弛素D干预后F⁃actin分布数量、迁移能力和细胞活力均显著降低,而干预的两组间差异无统计学意义(P>0.05)。ChIP⁃qPCR实验结果显示,使用EZH2抗体后,FAK、NOX2、NOX4所富集的启动子含量均显著升高(P<0.05)。结论:EZH2可通过上调FAK/F⁃actin/ROS通路活性进而促进CRC细胞的增殖、侵袭和转移。 展开更多
关键词 EZH2 FAK F⁃actin ROS 结直肠癌 增殖 侵袭 迁移
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舞花姜实时荧光定量PCR内参基因筛选
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作者 黄李珊 陈佩洵 +6 位作者 谭健俊 陈佳杨 钟敬桦 周熠玮 徐晔春 盛爱武 叶远俊 《广东农业科学》 2025年第9期29-40,共12页
【目的】筛选适用于不同品种舞花姜苞片及舞花姜‘白龙’不同部位研究试验的稳定内参基因,为后续舞花姜目的基因表达分析研究提供理论依据。【方法】从前期获得的不同品种舞花姜苞片转录组序列,根据相对表达量稳定性挑选苹果酸脱氢酶(M... 【目的】筛选适用于不同品种舞花姜苞片及舞花姜‘白龙’不同部位研究试验的稳定内参基因,为后续舞花姜目的基因表达分析研究提供理论依据。【方法】从前期获得的不同品种舞花姜苞片转录组序列,根据相对表达量稳定性挑选苹果酸脱氢酶(MDH)、肌动蛋白(Actin12)、转录延伸因子(EF1α2)、转录辅助蛋白(TAP46)、微管蛋白β(TUB7)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)的编码基因和18S核糖体RNA(18S rRNA)基因作为候选内参基因。利用9个不同颜色舞花姜品种的苞片和舞花姜‘白龙’的根、叶片、侧芽、苞片和小花5个部位样品作为材料,分别对7个候选内参基因进行实时荧光定量PCR(qRT-PCR),通过BestKeeper、NormFinder和geNorm软件分析评估其作为不同品种舞花姜苞片组织和舞花姜‘白龙’不同部位组织内参基因的表达稳定性。【结果】7个候选内参基因的PCR产物经凝胶电泳检测显示条带单一清晰,与理论预测片段大小相符,熔解曲线为单一主峰,扩增效率介于92.91%~102.33%,线性相关系数r>0.990,表明引物特异性良好,适用于qRT-PCR试验。在不同品种舞花姜苞片中,Actin12在BestKeeper、NormFinder和geNorm软件程序评估中均排名第一。在舞花姜‘白龙’不同部位中,TAP46在BestKeeper和NormFinder软件的稳定性评估中排名第一,而在geNorm软件程序评估排名第四。【结论】综合3种软件分析结果表明,Actin12为不同品种舞花姜苞片qRT-PCR试验中最稳定的内参基因,TAP46为舞花姜‘白龙’不同部位qRT-PCR试验中最稳定的内参基因。 展开更多
关键词 实时荧光定量PCR 舞花姜 内参基因 Actin12 TAP46 苞片 基因表达量
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拟南芥、水稻和杨树ACTIN家族全基因组分析 被引量:19
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作者 郭景康 陈青云 +2 位作者 戢茜 张亮生 王健 《上海大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期426-431,共6页
鉴定了覆盖拟南芥、水稻和杨树3种模式植物全基因组的20个拟南芥、18个水稻、22个杨树ACTIN蛋白基因,对其染色体定位、基因结构、基因复制等进行了综合分析.并在系统进化分析基础上,将ACTIN基因家族分为12个亚家族,有助于揭示植物ACTIN... 鉴定了覆盖拟南芥、水稻和杨树3种模式植物全基因组的20个拟南芥、18个水稻、22个杨树ACTIN蛋白基因,对其染色体定位、基因结构、基因复制等进行了综合分析.并在系统进化分析基础上,将ACTIN基因家族分为12个亚家族,有助于揭示植物ACTIN基因家族的进化历史,为后续ACTIN基因家族的功能提供线索,对研究植物ACTIN基因家族功能和进化上的多样性提供理论基础. 展开更多
关键词 拟南芥 水稻 杨树 ACTIN基因家族
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香蕉果实SMART cDNA文库的构建及利用PCR方法筛选香蕉Actin2基因 被引量:16
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作者 徐碧玉 苏伟 +2 位作者 张建斌 刘菊华 金志强 《热带亚热带植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期375-380,共6页
利用SMART(switching mechanismat5’end of RNA transcript)技术,提取果实少量总RNA,经15-25轮LD-PCR扩增获得全长ds-cDNA,构建了海南主栽的食用香蕉巴西蕉(Musa AAA Group Cavendish)果实的cDNA文库。所构建的文库容量为5×106Pfu... 利用SMART(switching mechanismat5’end of RNA transcript)技术,提取果实少量总RNA,经15-25轮LD-PCR扩增获得全长ds-cDNA,构建了海南主栽的食用香蕉巴西蕉(Musa AAA Group Cavendish)果实的cDNA文库。所构建的文库容量为5×106Pfuml-1,重组率93%。利用此cDNA文库,采用96孔板PCR法筛选香蕉Actin2基因,测序结果显示,序列全长1723bp,编码区长1134bp,编码378个氨基酸,与蝴蝶兰Actin2基因序列同源率达83%,已递交GenBank,接受号692696。 展开更多
关键词 香蕉 果实 SMART CDNA文库 96孔板PCR Actin2基因
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多浆旱生植物霸王Actin基因片段的克隆及序列分析 被引量:30
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作者 伍国强 席杰军 +1 位作者 包爱科 王锁民 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第2期101-104,共4页
根据其他植物Actin基因的保守序列设计一对简并性引物,以霸王叶片总RNA为模板,采用RT-PCR的方法扩增出Actin基因片段并克隆到PUCm-T载体。阳性克隆经PCR鉴定后进行测序,序列分析结果表明:该片段长598bp,编码198个氨基酸;所得序列与GenB... 根据其他植物Actin基因的保守序列设计一对简并性引物,以霸王叶片总RNA为模板,采用RT-PCR的方法扩增出Actin基因片段并克隆到PUCm-T载体。阳性克隆经PCR鉴定后进行测序,序列分析结果表明:该片段长598bp,编码198个氨基酸;所得序列与GenBank中注册的Actin基因序列的同源性均在82%以上,与其他肌动蛋白的氨基酸序列的同源性达91%以上。 展开更多
关键词 霸王 ACTIN基因 克隆 序列分析
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蒙古冰草肌动蛋白基因片段的克隆与组织表达分析 被引量:15
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作者 云锦凤 赵彦 +1 位作者 石凤敏 王俊杰 《草业学报》 CSCD 北大核心 2011年第2期170-176,共7页
本研究利用同源序列法分离蒙古冰草Actin基因同源片段,并分析蒙古冰草Actin基因在根、茎、叶中的表达特征。根据禾本科植物小麦Actin基因的保守序列设计1对引物A1,经RT-PCR扩增,从蒙古冰草cDNA中克隆到1个长度为541 bp的Actin基因片段,... 本研究利用同源序列法分离蒙古冰草Actin基因同源片段,并分析蒙古冰草Actin基因在根、茎、叶中的表达特征。根据禾本科植物小麦Actin基因的保守序列设计1对引物A1,经RT-PCR扩增,从蒙古冰草cDNA中克隆到1个长度为541 bp的Actin基因片段,使用DNAman和DNAUSER等分子生物学软件进行序列分析,结果表明,该序列编码179个氨基酸,并推测该片段具有Actin超基因家族的保守结构域,含有1个ATP结合位点,抑制蛋白结合位点和胶溶蛋白结合位点;该基因片段的氨基酸序列与小麦Actin基因的同源性为99%,与玉米同源性为96%,与水稻同源性为93%。组织器官特异性表达分析结果表明,该基因在根、茎、叶中的表达量恒定。将该基因片段命名为MwACT1,并在GengBank中登记注册,登录号为FJ490410。 展开更多
关键词 蒙古冰草 ACTIN基因 克隆 表达分析
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香樟Actin基因的克隆及表达分析 被引量:9
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作者 李勇鹏 张力维 +2 位作者 姚瑶 黄蕊 杜丽 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期120-127,共8页
Actin作为一个看家基因,经常在实时定量PCR中被用作内参对不同样品中的m RNA进行定量,因此在基因表达分析中扮演重要的角色。利用同源克隆的方法,根据Gen Bank中已经公布的其他植物的Actin基因的保守序列设计简并引物,采用RT-PCR(Revers... Actin作为一个看家基因,经常在实时定量PCR中被用作内参对不同样品中的m RNA进行定量,因此在基因表达分析中扮演重要的角色。利用同源克隆的方法,根据Gen Bank中已经公布的其他植物的Actin基因的保守序列设计简并引物,采用RT-PCR(Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction)技术从香樟中获得了4个c DNA片段。分子生物学分析软件分析结果显示,4个片段大小为均为998 bp,编码332个氨基酸;同源性分析表明,所获得的片段属于Actin亚家族,分别命名为Cc ACTa、Cc ACTb、Cc ACTc和Cc ACTd并提交Gen Bank(登录号:KM086736、KM086737、KM086738和KM086739)。实时定量PCR结果显示,Cc ACTc在根、茎、叶及低温处理的叶片中表达量相对稳定,可以作为候选内参基因。 展开更多
关键词 香樟 ACTIN 基因克隆 表达分析 实时定量PCR
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海州香薷Actin基因片段克隆及表达分析 被引量:6
9
作者 蔡深文 熊治廷 +2 位作者 刘晨 徐仲瑞 邓松强 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期111-115,共5页
通过克隆海州香薷Actin基因片段并分析其组织表达,为研究海州香薷重金属抗性相关基因的表达调控奠定基础。根据Gen Bank中其他植物Actin基因保守序列设计兼并引物,以海州香薷根总RNA为模板,利用RT-PCR技术分离得到Actin基因片段。序列... 通过克隆海州香薷Actin基因片段并分析其组织表达,为研究海州香薷重金属抗性相关基因的表达调控奠定基础。根据Gen Bank中其他植物Actin基因保守序列设计兼并引物,以海州香薷根总RNA为模板,利用RT-PCR技术分离得到Actin基因片段。序列分析结果表明,海州香薷Actin基因片段长576 bp,编码192个氨基酸,与其他植物同源基因的氨基酸序列相似性为84%-97%,所克隆的序列为Actin基因的同源片段,将其命名为Eh ACT,在Gen Bank中提交序列,获得登录号AGT37260。半定量RT-PCR分析结果表明,Eh ACT在海州香薷的根、茎和叶中表达相对稳定,初步表明其可作为研究海州香薷基因表达的内参基因。 展开更多
关键词 海州香薷 ACTIN基因 克隆 表达
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浙贝母肌动蛋白基因的克隆及生物信息学分析 被引量:10
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作者 冯亚斌 施鑫磊 +3 位作者 俞信光 沈晓霞 江建铭 王忠华 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期126-130,共5页
目的克隆浙贝母Fritillaria thunbergii Miq.肌动蛋白(Actin)基因,并进行生物信息学分析。方法提取浙贝母根、茎、叶、花、鳞茎总RNA,设计合成简并引物。以叶片总RNA为模板,通过RT-PCR和Ta克隆技术克隆Actin基因保守区序列片段。以该基... 目的克隆浙贝母Fritillaria thunbergii Miq.肌动蛋白(Actin)基因,并进行生物信息学分析。方法提取浙贝母根、茎、叶、花、鳞茎总RNA,设计合成简并引物。以叶片总RNA为模板,通过RT-PCR和Ta克隆技术克隆Actin基因保守区序列片段。以该基因为内参基因,对3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGR)基因进行组织特异性表达分析。结果经RT-PCR扩增和Ta克隆,得到1段基因序列(463 bp)。浙贝母Actin基因与岷江百合、郁金香、虎眼万年青、铁皮石斛、柿子、光皮桦、玉米相似度较高(84%~98%),其氨基酸序列与阿帝露茅膏菜、甘蓝型油菜、香草兰、岷江百合、麻疯树、枸杞、红海榄的同源性均在89%以上,并且其Actin蛋白与百脉根、岷江百合、郁金香亲缘关系较近。HMGR基因在该植物各部位表达有显著差异,依次为鳞茎>花>叶>茎>根。结论首次从浙贝母中克隆出Actin基因(命名为Ft Actin),可为其有效利用奠定基础。 展开更多
关键词 浙贝母 肌动蛋白(Actin)基因 克隆 生物信息学分析
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13种植物actin基因的密码子使用特性分析 被引量:8
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作者 赵洋 杨培迪 +2 位作者 刘振 成杨 杨阳 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期519-523,共5页
【目的】分析13种植物actin基因的密码子组成、密码子偏性及聚类关系,了解其密码子使用模式及影响密码子使用的因素,为深入研究分子进化及物种进化提供参考。【方法】运用Codon W 1.4.4软件分析13种植物的肌动蛋白基因(actin)密码子... 【目的】分析13种植物actin基因的密码子组成、密码子偏性及聚类关系,了解其密码子使用模式及影响密码子使用的因素,为深入研究分子进化及物种进化提供参考。【方法】运用Codon W 1.4.4软件分析13种植物的肌动蛋白基因(actin)密码子组成及使用参数,并对影响密码子偏性的因素进行研究。应用MEGA 4.1对13条基因的CDS序列进行聚类分析,采用SPSS 20.0进行密码子偏性的聚类分析。【结果】双子叶植物中actin基因的GC含量为45.0%~51.2%、GC3s含量为36.3%~53.8%,单子叶植物中GC含量为53.0%~58.3%、GC3s含量为60.9%~75.8%;actin基因在单子叶植物中偏爱G/C结尾的密码子,双子叶植物中偏爱A/T结尾的密码子。GC和GC3s与有效密码子数(ENC)呈极显著负相关(P〈0.01),相关系数均为-0.906。ENC绘图分析结果表明,actin基因密码子偏性同时受突变和选择压力影响,单子叶植物受选择压力影响的程度大于双子叶植物。基于actin基因密码子偏性的聚类将单子叶植物高粱、玉米聚为一类,水稻、大麦、竹聚为一类,8种双子叶植物聚为一类。【结论】actin基因密码子偏性与碱基组成密切相关,其密码子偏性在单、双子叶植物间存在差异,依据密码子偏性的聚类能在一定程度上反映物种间的亲缘关系。 展开更多
关键词 ACTIN基因 密码子用法 密码子偏性
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葡萄Actin基因家族的鉴定及进化和表达分析 被引量:8
12
作者 崔力文 郑婷 +3 位作者 张克坤 张川 上官凌飞 房经贵 《植物资源与环境学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期1-10,共10页
采用生物信息学方法从葡萄(Vitis vinifera Linn.)全基因组中鉴定Actin基因家族,并对各基因的染色体定位和结构特征,编码蛋白质的理化性质、亚细胞定位、二级结构、三级结构和系统进化,以及不同组织的基因表达进行研究。结果表明:葡萄Ac... 采用生物信息学方法从葡萄(Vitis vinifera Linn.)全基因组中鉴定Actin基因家族,并对各基因的染色体定位和结构特征,编码蛋白质的理化性质、亚细胞定位、二级结构、三级结构和系统进化,以及不同组织的基因表达进行研究。结果表明:葡萄Actin基因家族16个基因分布在12条染色体上。16个基因的结构特征及其编码蛋白质的理化性质差异较大。16个基因的长度及其内含子总长度的变化范围较大,编码序列(CDS)和外显子总长度的变化范围较小。除登录号GSVIVG01008254001和GSVIVG01014035001的基因外,其他14个基因的GC含量均低于其CDS的GC含量。除登录号GSVIVG01008254001的基因外,其他15个基因编码的蛋白质的理论相对分子质量为12 534.54~82 612.33,理论等电点为p I 4.92~p I 9.13。16个基因编码蛋白质的消光系数为14 105~73 645,脂肪族氨基酸指数为65.54~92.06,其中9个为稳定蛋白,7个为不稳定蛋白。除登录号GSVIVG01014035001的基因外,其他15个基因编码的蛋白质均为亲水性蛋白。登录号GSVIVG01016517001的基因编码的蛋白质定位于细胞质和细胞核,其他15个基因编码的蛋白质定位于细胞质。二级结构和三级结构显示:葡萄Actin基因家族16个基因编码的蛋白质均由α螺旋、无规则卷曲和延伸链构成,且总体以无规则卷曲为主。系统进化分析和不同组织的基因表达分析结果显示:与拟南芥[Arabidopsis thaliana(Linn.)Heynh.]相似,葡萄Actin基因家族16个基因编码的蛋白质分为3个亚家族,ClassⅡ亚家族(营养型)包括登录号GSVIVG01003099001和GSVIVG01026580001的基因编码的蛋白质,这2个基因在所有组织中的表达均较高;ClassⅢ亚家族(生殖型)包括登录号GSVIVG01033494001、GSVIVG01024980001和GSVIVG01016550001的基因编码的蛋白质,这3个基因在花粉、雄蕊和花中的表达均较高;ClassⅠ亚家族包括其他11个基因编码的蛋白质,这11个基因在各组织中的表达总体上较低。研究结果显示:葡萄Actin基因家族的表达具有组织特异性。 展开更多
关键词 葡萄 Actin基因家族 系统进化 基因表达
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山药Actin基因片段的克隆及表达分析 被引量:6
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作者 龚明霞 周芸伊 +2 位作者 王爱勤 罗海玲 何龙飞 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期73-80,共8页
通过山药Actin基因的克隆和表达分析,为研究山药生长发育中肌动蛋白的作用及其他基因的表达和调控奠定基础。根据Gen Bank中已经公布的其他植物肌动蛋白基因(Actin)的保守序列设计一对简并引物,采用RT-PCR技术从山药块茎中分离出1个Acti... 通过山药Actin基因的克隆和表达分析,为研究山药生长发育中肌动蛋白的作用及其他基因的表达和调控奠定基础。根据Gen Bank中已经公布的其他植物肌动蛋白基因(Actin)的保守序列设计一对简并引物,采用RT-PCR技术从山药块茎中分离出1个Actin基因cDNA片段,命名为DoActin。片段长度为1 091 bp,编码357个氨基酸,并提交Gen Bank(登录号:KU669295)。与NCBI核酸和蛋白质数据库序列比对,该序列与其他植物Actin基因核苷酸序列的同源性均在83%以上,氨基酸序列的同源性均在97%以上。进化分析结果显示,DoActin与海枣Actin-2、木本棉Actin-7的亲缘关系最近。实时定量PCR结果显示,DoActin在山药叶片、地上茎和地下块茎以及不同发育期的块茎和叶片中表达量相对稳定,表明其适宜作为山药的内参基因。 展开更多
关键词 山药 ACTIN基因 克隆 表达分析 序列分析
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西红花酸对AGEs诱导血管内皮细胞通透性增加的抑制作用 被引量:7
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作者 向敏 王建梅 +2 位作者 周成华 张雅琴 吴萍萍 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期1254-1259,共6页
目的研究西红花酸对晚期糖基化终产物(advancedglycation end products,AGEs)诱导血管内皮细胞通透性增加的抑制作用并探讨其机制。方法用不同剂量西红花酸(0.01、0.1、1μmol.L-1)预孵牛主动脉血管内皮细胞(bo-vine vascular endotheli... 目的研究西红花酸对晚期糖基化终产物(advancedglycation end products,AGEs)诱导血管内皮细胞通透性增加的抑制作用并探讨其机制。方法用不同剂量西红花酸(0.01、0.1、1μmol.L-1)预孵牛主动脉血管内皮细胞(bo-vine vascular endothelial cells,BECs)12 h后,AGEs(100μg.L-1)刺激内皮细胞,以HRP作示踪剂检测内皮细胞单层通透性变化,ELISA法测定细胞上清MCP-1和TNF-α水平,罗丹明-鬼笔环肽荧光染色检测细胞骨架蛋白F-actin变化,Cell-based ELISA法和液闪法分别测定磷酸化p38 MAPK蛋白表达量和活性变化。同时设定正常对照组(control)、AGEs(100 mg.L-1)模型组和葛根素(1 g.L-1)阳性对照组。结果与AGEs模型照组相比,西红花酸(0.1、1μmol.L-1)预孵细胞后,F-actin骨架蛋白破环程度有所减轻,细胞单层通透性减小(P<0.01或0.05),TNF-α和MCP-1分泌降低,磷酸化p38MAPK的数量下降且活性被抑制(P<0.01或0.05)。结论西红花酸对AGEs诱导内皮细胞通透性增加有抑制作用,该作用可能与其抑制p38MAPK通路有关,这可能是其抗糖尿病血管病变的机制之一。 展开更多
关键词 西红花酸 内皮细胞 晚期糖基化终产物 通透性 F—actin骨架蛋白 p38MAPK
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火龙果Actin及UBQ内参基因片段的克隆及序列分析 被引量:6
15
作者 颜凤霞 文晓鹏 +1 位作者 高国丽 陶金 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2013年第9期1-4,共4页
为给火龙果的功能基因表达和调控研究提供内参基因,根据Actin基因和UBQ基因的保守区设计引物,采用RT-PCR方法克隆火龙果Actin基因和UBQ基因片段。结果表明:克隆的Actin基因和UBQ基因片段大小分别为302bp、192bp,分别编码100个氨基酸和6... 为给火龙果的功能基因表达和调控研究提供内参基因,根据Actin基因和UBQ基因的保守区设计引物,采用RT-PCR方法克隆火龙果Actin基因和UBQ基因片段。结果表明:克隆的Actin基因和UBQ基因片段大小分别为302bp、192bp,分别编码100个氨基酸和63个氨基酸。Actin基因片段与其他植物Actin基因核苷酸序列的同源性均在78%以上,与氨基酸序列的同源性达88%以上;UBQ基因片段与其他植物UBQ基因核苷酸序列的同源性均在88%以上,与氨基酸序列的同源性达95%以上。 展开更多
关键词 火龙果 ACTIN基因 UBQ基因 克隆 序列分析
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模式植物狗尾草响应不同干旱及盐胁迫表达的内参基因actin及其应用 被引量:5
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作者 张丽丽 赵辉 +6 位作者 郭静远 夏启玉 贺萍萍 霍姗姗 屈静 符冬妹 郭安平 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2019年第12期2418-2425,共8页
为了研究应用于狗尾草响应不同干旱及盐胁迫基因表达的内参基因,本研究从网站https://phytozome.jgi.doe.gov/pz/portal.html上获得狗尾草A10品系8个actin基因的cDNA序列,设计荧光定量PCR引物,以不同程度的干旱及不同浓度盐胁迫处理的... 为了研究应用于狗尾草响应不同干旱及盐胁迫基因表达的内参基因,本研究从网站https://phytozome.jgi.doe.gov/pz/portal.html上获得狗尾草A10品系8个actin基因的cDNA序列,设计荧光定量PCR引物,以不同程度的干旱及不同浓度盐胁迫处理的狗尾草幼苗cDNA做模板,进行荧光定量PCR试验,通过实时荧光定量PCR扩增片段电泳分析,扩增曲线及溶解曲线综合分析,结果表明登录号Sevir.9G114100对应的actin基因是8个actin基因中最合适的内标基因。并对所选内标的实用性进行了验证,验证的结果与转录组数据的结果保持一致,证明所选内标基因可用于后续狗尾草响应不同干旱及盐胁迫狗尾草转录组基因表达的验证工作,为深入研究狗尾草功能基因奠定分子基础。 展开更多
关键词 狗尾草 ACTIN基因 干旱胁迫 盐胁迫 荧光定量PCR
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微孔草Actin基因核心片段的克隆及序列分析 被引量:7
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作者 吴淑娟 张一弓 +1 位作者 张丽静 傅华 《草业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期97-101,共5页
提取微孔草Microula sikkimensis叶片的总RNA,并以其为模板,运用RT-PCR方法扩增出Actin基因的核心序列。通过连接、转化后对阳性克隆进行PCR鉴定并测序,序列分析结果表明:微孔草Actin基因核心片段长599 bp,编码199个氨基酸。将该序列与G... 提取微孔草Microula sikkimensis叶片的总RNA,并以其为模板,运用RT-PCR方法扩增出Actin基因的核心序列。通过连接、转化后对阳性克隆进行PCR鉴定并测序,序列分析结果表明:微孔草Actin基因核心片段长599 bp,编码199个氨基酸。将该序列与GenBank中已注册的植物Actin基因序列进行同源性比较,发现它们之间的同源性在84%以上,氨基酸序列同源性在95%以上,具有高度的保守性。 展开更多
关键词 微孔草 ACTIN基因 序列分析
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蒙古冰草Actin基因片段的克隆及序列分析 被引量:5
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作者 赵彦 云锦凤 +1 位作者 石凤敏 刘亚玲 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期86-89,共4页
旨在利用同源序列法分离蒙古冰草(Agropyron mongolicumKeng)Actin基因同源片段,为研究其他基因在蒙古冰草中的表达和调控提供内标参照。根据禾本科植物小麦Actin基因(AB181991)的保守序列设计2对引物A4和A5,采用RT-PCR扩增蒙古冰草的Ac... 旨在利用同源序列法分离蒙古冰草(Agropyron mongolicumKeng)Actin基因同源片段,为研究其他基因在蒙古冰草中的表达和调控提供内标参照。根据禾本科植物小麦Actin基因(AB181991)的保守序列设计2对引物A4和A5,采用RT-PCR扩增蒙古冰草的Actin基因片段,分别得到656 bp和848 bp的片段,使用DNAman和DNAuser等分子生物学软件进行序列分析,将2个片段的重复序列合并后获得一段长度为962 bp的基因片段,编码237个氨基酸,将克隆的Actin基因片段命名为MwACT。该序列与其它植物Actin基因核苷酸序列的同源性均在80%以上,其中与小麦、大麦的同源性达到94%;与氨基酸序列的同源性均在90%以上。 展开更多
关键词 蒙古冰草 ACTIN基因 克隆 序列分析
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木薯Actin基因片段的克隆及序列分析 被引量:18
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作者 许娟 罗兴录 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期65-70,共6页
克隆木薯Actin基因片段,为研究其他基因在木薯中的表达和调控提供内参基因。通过比较拟南芥、蓖麻和麻风树Actin基因cDNA同源区域,根据基因的保守序列设计一对简并性引物,采用RT-PCR的方法扩增Actin基因片段,使用分子生物学软件进行分... 克隆木薯Actin基因片段,为研究其他基因在木薯中的表达和调控提供内参基因。通过比较拟南芥、蓖麻和麻风树Actin基因cDNA同源区域,根据基因的保守序列设计一对简并性引物,采用RT-PCR的方法扩增Actin基因片段,使用分子生物学软件进行分析。结果显示,获得一段大小为698 bp的基因片段,编码233个氨基酸;该基因序列与其他Actin基因核苷酸序列的同源性均在85%以上,氨基酸序列的同源性达94%以上;系统进化分析表明,木薯Actin基因与大戟科植物橡胶、麻风树及蓖麻的亲缘关系最近,与毛果杨、陆地棉及木瓜等植物Actin基因具有较高的保守性。克隆的基因片段为木薯Actin基因片段,并命名为msACT。 展开更多
关键词 木薯 ACTIN 基因 克隆 序列分析
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箭筈豌豆两个肌动蛋白基因片段的克隆及序列分析 被引量:4
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作者 张磊 刘志鹏 +2 位作者 张吉宇 张妙青 王彦荣 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期70-75,共6页
通过同源克隆获得了箭筈豌豆两个不同的Actin基因片段,为研究该箭筈豌豆其它基因的表达状况提供了内标参照。根据近缘物种Actin基因序列设计一对引物,通过RT-PCR技术分别从叶片和果实材料中克隆获得了两条不同的Actin基因片段。生物信... 通过同源克隆获得了箭筈豌豆两个不同的Actin基因片段,为研究该箭筈豌豆其它基因的表达状况提供了内标参照。根据近缘物种Actin基因序列设计一对引物,通过RT-PCR技术分别从叶片和果实材料中克隆获得了两条不同的Actin基因片段。生物信息学分析表明,叶片中克隆的片段长度604 bp,编码201个氨基酸;果实中克隆的片段长度677 bp,编码225个氨基酸。两条序列与其它物种Actin基因的碱基序列相似度高于80%,氨基酸序列相似度高于93%。将来自叶片和果实的两条序列分别命名为VsACT7和VsACT11,并在GenBank注册,登录号分别为HM004434和GU946218。 展开更多
关键词 箭筈豌豆 ACTIN基因 RT-PCR 同源克隆
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