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多酶催化合成3’-磷酸腺苷-5’-磷酰硫酸反应体系的构建及优化
被引量：
1
1
作者
李晓燕
蔡谨
+2 位作者
杭宝建
黄磊
徐志南
《高校化学工程学报》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2017年第1期119-125,共7页
3’-磷酸腺苷-5’-磷酰硫酸(PAPS)是目前发现的唯一的"活性"硫酸基团供体,在生物肝素酶法硫磺化反应中起到重要作用,但化学合成的成本高。如何大量低成本制备PAPS是实现酶法合成肝素工业化的关键因素。本文克隆表达了酶法合成...
3’-磷酸腺苷-5’-磷酰硫酸(PAPS)是目前发现的唯一的"活性"硫酸基团供体,在生物肝素酶法硫磺化反应中起到重要作用,但化学合成的成本高。如何大量低成本制备PAPS是实现酶法合成肝素工业化的关键因素。本文克隆表达了酶法合成PAPS的两个酶:三磷酸腺苷(ATP)硫化酶和5’-腺苷磷酰硫酸(APS)激酶。构建了一条体外合成PAPS的途径。首先利用ATP硫化酶将ATP转化生成APS,同时产生副产物无机焦磷酸(PPi),APS再在APS激酶作用下转化生成PAPS。研究了Mg2+浓度、缓冲体系和p H、温度以及无机焦磷酸水解酶(PPase)的添加对该酶反应的影响。通过添加无机焦磷酸水解酶(PPase),极大提高了PAPS的转化率。在最优条件下考察不同ATP浓度下PAPS随时间的积累量变化,发现反应过程中存在底物抑制作用;ATP浓度为50 mmol?L?1时,反应25 h,PAPS的积累量为18.87 mmol?L?1。反应过程中分批补料ATP,能极大提高催化效率。反应11.5 h,PAPS积累量可达20.36 mmol?L?1(10.32 g·L?1),转化率为81.4%。
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关键词
3’-磷酸腺苷-5’-磷酰硫酸
atp
硫化酶
aps
激酶
分批补料
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职称材料
拟南芥miR395d基因的克隆和过表达载体构建及其在油菜中的转化
被引量：
5
2
作者
张芸
李会
+3 位作者
车丽玲
黄思齐
邱承祥
杨志敏
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第2期25-29,共5页
MicroRNAs(miRNAs)是一类内源性长度约为21～24个核苷酸,在基因表达、生长发育、细胞周期及环境胁迫等方面起着重要作用的单链非编码小分子RNA。研究表明:植物miRNAs通过转录后以切割的方式对其靶基因的表达起着负调控作用。miR395的靶...
MicroRNAs(miRNAs)是一类内源性长度约为21～24个核苷酸,在基因表达、生长发育、细胞周期及环境胁迫等方面起着重要作用的单链非编码小分子RNA。研究表明:植物miRNAs通过转录后以切割的方式对其靶基因的表达起着负调控作用。miR395的靶基因分别为ATP硫酸化酶和硫转运体SULTR2;1,两者在硫同化及转运中起着重要的作用。为了进一步探究miR395的功能,本研究利用PCR法从拟南芥中克隆了miR395d前体基因,并与pCAMBIA1304载体连接,构建了miR395d前体基因的过量表达载体,通过根癌农杆菌介导法将其转化到甘蓝型油菜特选4号中,目前已获得了转基因植株。
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关键词
miR395d前体
atp
硫酸化酶
硫转运体SULTR2
1
过表达载体
转基因
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职称材料
题名
多酶催化合成3’-磷酸腺苷-5’-磷酰硫酸反应体系的构建及优化
被引量：
1
1
作者
李晓燕
蔡谨
杭宝建
黄磊
徐志南
机构
浙江大学化学工程与生物工程学院
出处
《高校化学工程学报》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2017年第1期119-125,共7页
基金
国家自然科学基金资助(21276226)
文摘
3’-磷酸腺苷-5’-磷酰硫酸(PAPS)是目前发现的唯一的"活性"硫酸基团供体,在生物肝素酶法硫磺化反应中起到重要作用,但化学合成的成本高。如何大量低成本制备PAPS是实现酶法合成肝素工业化的关键因素。本文克隆表达了酶法合成PAPS的两个酶:三磷酸腺苷(ATP)硫化酶和5’-腺苷磷酰硫酸(APS)激酶。构建了一条体外合成PAPS的途径。首先利用ATP硫化酶将ATP转化生成APS,同时产生副产物无机焦磷酸(PPi),APS再在APS激酶作用下转化生成PAPS。研究了Mg2+浓度、缓冲体系和p H、温度以及无机焦磷酸水解酶(PPase)的添加对该酶反应的影响。通过添加无机焦磷酸水解酶(PPase),极大提高了PAPS的转化率。在最优条件下考察不同ATP浓度下PAPS随时间的积累量变化,发现反应过程中存在底物抑制作用;ATP浓度为50 mmol?L?1时,反应25 h,PAPS的积累量为18.87 mmol?L?1。反应过程中分批补料ATP,能极大提高催化效率。反应11.5 h,PAPS积累量可达20.36 mmol?L?1(10.32 g·L?1),转化率为81.4%。
关键词
3’-磷酸腺苷-5’-磷酰硫酸
atp
硫化酶
aps
激酶
分批补料
Keywords
3’-phosphoadenosine-5’-phosphosulfate
atp
sulfurylase
aps
kinase
fed-batch
分类号
Q813.11 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
拟南芥miR395d基因的克隆和过表达载体构建及其在油菜中的转化
被引量：
5
2
作者
张芸
李会
车丽玲
黄思齐
邱承祥
杨志敏
机构
南京农业大学生命科学学院
出处
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第2期25-29,共5页
基金
国家自然科学基金项目(30671249)
江苏省自然科学基金项目(BK2006137)
文摘
MicroRNAs(miRNAs)是一类内源性长度约为21～24个核苷酸,在基因表达、生长发育、细胞周期及环境胁迫等方面起着重要作用的单链非编码小分子RNA。研究表明:植物miRNAs通过转录后以切割的方式对其靶基因的表达起着负调控作用。miR395的靶基因分别为ATP硫酸化酶和硫转运体SULTR2;1,两者在硫同化及转运中起着重要的作用。为了进一步探究miR395的功能,本研究利用PCR法从拟南芥中克隆了miR395d前体基因,并与pCAMBIA1304载体连接,构建了miR395d前体基因的过量表达载体,通过根癌农杆菌介导法将其转化到甘蓝型油菜特选4号中,目前已获得了转基因植株。
关键词
miR395d前体
atp
硫酸化酶
硫转运体SULTR2
1
过表达载体
转基因
Keywords
pre-miR395d
atp sulphurylase（aps）
sulphate transporter 2
1（SULTR2
1）
over-expression vector
transgenic
分类号
S565.4 [农业科学—作物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
多酶催化合成3’-磷酸腺苷-5’-磷酰硫酸反应体系的构建及优化
李晓燕
蔡谨
杭宝建
黄磊
徐志南
《高校化学工程学报》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2017
1
在线阅读
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职称材料
2
拟南芥miR395d基因的克隆和过表达载体构建及其在油菜中的转化
张芸
李会
车丽玲
黄思齐
邱承祥
杨志敏
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
5
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