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APP695-siRNA慢病毒载体构建及其对SH-SY5Y细胞中APP695基因的沉默作用
被引量：
2
1
作者
温丽君
滕军放
+3 位作者
赵莘瑜
崔月梅
巴庆华
张爱玲
《郑州大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2011年第4期520-523,共4页
目的:构建针对APP695的siRNA慢病毒载体,并检测其对人神经纤维母细胞瘤SH-SY5Y细胞株中APP695基因表达的沉默作用。方法:设计并合成针对筛选确定的APP695基因寡核苷酸序列特异性siRNA有效靶序列,同时合成1对阴性对照寡核苷酸序列,将以...
目的:构建针对APP695的siRNA慢病毒载体,并检测其对人神经纤维母细胞瘤SH-SY5Y细胞株中APP695基因表达的沉默作用。方法:设计并合成针对筛选确定的APP695基因寡核苷酸序列特异性siRNA有效靶序列,同时合成1对阴性对照寡核苷酸序列,将以上寡核苷酸序列退火后连入pFU-GW-iRNA质粒,酶切和测序鉴定后,将它们分别与包装质粒混合物共感染293T细胞,产生具有感染能力的慢病毒颗粒,并感染SH-SY5Y细胞,分未经病毒感染(CON)组、阴性对照病毒感染(NC)组和慢病毒介导阳性干扰(APP695-RNAi)组;应用实时荧光定量PCR(FQ-RT-PCR)检测各组细胞APP695mRNA的表达水平。结果:酶切和测序证实目的寡核苷酸片段已被准确克隆到pFU-GW-iRNA质粒;各质粒与包装质粒共感染293T细胞后收获慢病毒颗粒;感染SH-SY5Y细胞72h后,不同组别APP695mRNA表达水平不同(F=554.442,P<0.001),APP695-siRNA组表达水平低于CON组和NC组。结论:成功构建了APP695-siRNA慢病毒载体,该载体可有效沉默SH-SY5Y细胞中APP695mRNA的表达。
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关键词
SIRNA
慢病毒载体
app695
基因
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职称材料
题名
APP695-siRNA慢病毒载体构建及其对SH-SY5Y细胞中APP695基因的沉默作用
被引量：
2
1
作者
温丽君
滕军放
赵莘瑜
崔月梅
巴庆华
张爱玲
机构
郑州大学第一附属医院神经内科
郑州人民医院神经内科
出处
《郑州大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2011年第4期520-523,共4页
基金
河南省教育厅自然科学研究计划基金资助项目2009A320045
文摘
目的:构建针对APP695的siRNA慢病毒载体,并检测其对人神经纤维母细胞瘤SH-SY5Y细胞株中APP695基因表达的沉默作用。方法:设计并合成针对筛选确定的APP695基因寡核苷酸序列特异性siRNA有效靶序列,同时合成1对阴性对照寡核苷酸序列,将以上寡核苷酸序列退火后连入pFU-GW-iRNA质粒,酶切和测序鉴定后,将它们分别与包装质粒混合物共感染293T细胞,产生具有感染能力的慢病毒颗粒,并感染SH-SY5Y细胞,分未经病毒感染(CON)组、阴性对照病毒感染(NC)组和慢病毒介导阳性干扰(APP695-RNAi)组;应用实时荧光定量PCR(FQ-RT-PCR)检测各组细胞APP695mRNA的表达水平。结果:酶切和测序证实目的寡核苷酸片段已被准确克隆到pFU-GW-iRNA质粒;各质粒与包装质粒共感染293T细胞后收获慢病毒颗粒;感染SH-SY5Y细胞72h后,不同组别APP695mRNA表达水平不同(F=554.442,P<0.001),APP695-siRNA组表达水平低于CON组和NC组。结论:成功构建了APP695-siRNA慢病毒载体,该载体可有效沉默SH-SY5Y细胞中APP695mRNA的表达。
关键词
SIRNA
慢病毒载体
app695
基因
Keywords
siRNA
lentivirial vector
app695 gene
分类号
R373.9 [医药卫生—病原生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
APP695-siRNA慢病毒载体构建及其对SH-SY5Y细胞中APP695基因的沉默作用
温丽君
滕军放
赵莘瑜
崔月梅
巴庆华
张爱玲
《郑州大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2011
2
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