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题名黄瓜基因组DNA提取及AFLP体系优化研究
被引量：5
- 1
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作者
宋晓飞
李晓丽
冯志红
闫立英
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机构
河北科技师范学院
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出处
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2009年第29期14035-14037,共3页
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基金
河北省自然基金项目(C2007000725)
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文摘
[目的]提取黄瓜基因组DNA,并对AFLP体系进行优化。[方法]以黄瓜嫩叶为材料,利用改进的CTAB法提取高质量的黄瓜叶片总DNA,通过优化酶切连接、预扩增、选择性扩增等试验条件建立适合黄瓜的AFLP银染体系,得到清晰的黄瓜AFLP指纹图谱。[结果]DNA模板的质量影响酶切以及后续的连接扩增反应,改良的CTAB提取法可用于黄瓜AFLP分析,形成清晰的AFLP指纹。优化的酶切连接体系为:以37℃酶切连接12 h为宜,酶切连接的基因组DNA用量为200ng,预扩增时Taq酶用量为0.5U/20μl体系,预扩增产物稀释40倍作为选择性扩增的模板。在此优化的体系下引物E41M47扩增出清晰的条带。[结论]为黄瓜品种的分子标记和黄瓜品种间亲缘关系等研究奠定了基础。
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关键词
黄瓜
DNA提取
aflp反应体系
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Keywords
Cucumber（ Cucnmis sativus L. ）
Extraction of DNA
aflp reaction system
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分类号
S642.2
[农业科学—蔬菜学]
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题名大菱鲆AFLP分析体系的建立
被引量：12
- 2
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作者
季士治
王伟继
雷霁霖
孔杰
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机构
中国海洋大学生命科学与技术学部
农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所
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出处
《海洋水产研究》
CSCD
北大核心
2007年第1期6-12,共7页
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基金
国家高技术研究发展863计划"海水养殖种子工程北方基地"课题资助
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文摘
本研究构建了大菱鲆扩增片段长度多态性(AFLP)分析体系,对DNA提取、双酶切反应、连接反应、预扩增反应、选择性扩增反应和银染等步骤进行了分析。结果表明,用EcoRI/MseI双酶切、核心序列加3个选择性碱基的选择性扩增引物、1∶6(w∶w)的EcoRI端与MseI端选择性扩增引物比和20μl选择性扩增体积,可得到十分稳定的结果。所得产物经电泳和银染后可获得条带清晰、背景干扰小的图像。该体系的构建为AFLP技术在大菱鲆相关研究中的应用奠定了基础。
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关键词
aflp
大菱鲆
反应体系
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Keywords
aflp Scophthalmus maximus reaction system
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分类号
Q7
[生物学—分子生物学]
Q959.486
[生物学—动物学]
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题名4种扇贝AFLP分析体系的建立
被引量：2
- 3
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作者
周贺
秦艳杰
周伯文
李霞
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机构
大连水产学院生命科学与技术学院
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出处
《大连海洋大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第S1期56-58,共3页
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文摘
构建了4种扇贝扩增片段长度多态性(AFLP)的分析体系,对DNA提取、双酶切反应、连接反应、预扩增反应、选择性扩增反应和银染等条件进行了优化。结果表明:用EcoRⅠ/MseⅠ双酶切,核心序列加3个选择性碱基的选择性扩增引物,E32-M49和E32-M62两个引物组合,以及20μL选择性扩增体积,可得到十分稳定的结果。所得产物经电泳和银染后可获得条带清晰、背景干扰小的图像。该体系的构建为AFLP技术在扇贝相关研究中的应用提供了依据。
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关键词
扇贝
aflp
反应体系
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Keywords
aflp
scallop
reaction system
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分类号
S917.4
[农业科学—水产科学]
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题名黑斑原鮡AFLP分析体系的建立
- 4
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作者
郭宝英
谢从新
祁鹏志
吴常文
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机构
浙江海洋学院海洋科学学院浙江省海洋养殖装备与工程技术重点实验室
华中农业大学水产学院
浙江省大海洋科技有限公司
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出处
《水生态学杂志》
北大核心
2011年第3期127-131,共5页
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基金
国家海洋公益性行业科研专项(201005013)
海洋渔业科学与技术浙江省重中之重学科开放课题(20100105)
浙江海洋学院人才引进启动项目(21135011509)
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文摘
建立黑斑原鮡(Glyptosternum maculatum)AFLP反应体系,对DNA提取、双酶切、连接、预扩增、选择性扩增和银染效果进行了探索。结果表明,40μLTaqI酶切体系中65℃先酶切2h,EcoRI酶切和连接同时进行,EcoRI酶和T4DNA连接酶的用量均以2U为宜,温度与时间分别为37℃和3h,连接产物稀释10倍作为预扩增的模板。利用这种优化的反应体系,5对选择性扩增引物组合表现出较高的稳定性、清晰度和多态性,它们分别是:E-AAC/T-AAT、E-AAC/T-AAG、E-AAG/T-ACA、E-AAG/T-AAT和E-AAT/T-AGA。5对引物组合对96个样本扩增,共得到332条清晰可辨、可重复的条带,平均每对引物组合扩增出66.4条带,其中51条带是多态的。将AFLP技术用于黑斑原鮡的研究,通过优化体系的建立,为其种质资源的研究奠定基础。
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关键词
aflp
黑斑原鮡
反应体系
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Keywords
aflp
Glyptosternum maculatum
reaction system
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分类号
Q503
[生物学—生物化学]
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题名华北落叶松AFLP反应体系的建立和优化
被引量：2
- 5
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作者
李晓楠
狄晓艳
王孟本
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机构
山西大学黄土高原研究所
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出处
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2011年第2期697-700,共4页
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基金
山西省自然科学基金项目(2010011041-1)
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文摘
[目的]建立和优化华北落叶松(Larixprincipis-rupprechtii Mayr.)的AFLP反应体系。[方法]以华北落叶松为材料,对其AFLP分析过程中的5个主要影响因素(酶切时间、内切酶用量、DNA模板用量、连接产物和预扩增产物稀释倍数)进行了研究。[结果]确立了适于华北落叶松AFLP分析的最佳反应体系,即在反应体积均为20.0μl的前提下,酶切时间为7 h(37℃3.5 h;65℃3.5 h),EcoRⅠ和MseⅠ内切酶用量均为1 U,DNA模板用量为3.0μl(50 ng/μl),连接产物稀释10倍取5.0μl用于预扩增,预扩增产物稀释70倍取4.0μl用于选择性扩增。[结论]采用该体系得到的电泳条带清晰可辨、多态性好、重复性强,可用于对华北落叶松遗传多样性和分子进化特征的深入研究。
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关键词
华北落叶松
aflp反应体系
建立
优化
-
Keywords
Larix principis-rupprechtii
aflp reaction system
Establishment
Optimization
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分类号
S791.22
[农业科学—林木遗传育种]
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题名小麦条锈菌AFLP体系的优化
被引量：2
- 6
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作者
张妍
康晓慧
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机构
西南科技大学生命科学与工程学院
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出处
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2008年第6期2227-2228,共2页
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文摘
[目的]优化小麦条锈菌AFLP体系。[方法]以小麦条锈菌大田混合菌系为材料,采用改良CTAB法提取DNA,探索酶切、PCR过程,优化小麦条锈菌AFLP体系,并从64对引物中筛选出稳定、高效的引物组合。[结果]改良CTAB法有较好的破壁效果,所提DNA纯度高,条带清楚,无污染,适合AFLP操作。酶切3.0、3.5 h的效果相同,扩出的片断在100～2 000 bp,可进行预扩。TaqDNA聚合酶为0.5 U时,电泳图中出现了较亮的条带,片断大小在100～2 000 bp。16对引物组合可以扩增出较稳定的条带。[结论]优化的小麦条锈菌AFLP体系为：25.0μl酶切体系,37℃酶切3.0 h,10.0μl连接体系在22℃条件下连接过夜,连接产物、预扩产物分别按1∶10、1∶30的比例用ddH2O稀释后用于预扩和选择性扩增。
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关键词
小麦条锈菌
aflp
反应体系
引物
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Keywords
Wheat strip rust
aflp
reaction system
Primer
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分类号
S435.121.41
[农业科学—农业昆虫与害虫防治]
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题名天麻扩增酶切片段长度多态性反应体系的优化
- 7
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作者
程纪伦
范爱辉
陈琦
典灵辉
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机构
广东医学院
贵州省人民医院
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出处
《广东农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第8期190-192,共3页
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基金
国家科技攻关项目(2004BA721A33)
贵州省中药专项(黔科合中药专字[2003]51号)
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文摘
以新鲜天麻为材料,优化天麻扩增长度多态性(AFLP)反应体系中的几个关键参数。结果表明,用100～200ng/μL的天麻DNA2.5μL,反应体系25μL,37℃酶切连接过夜,酶切连接效果最佳;预扩产物稀释20倍,TaqDNA聚合酶为1 U,Mg2+(20 mM)1.5μL、dNTP(2 mM)2μL时选扩条带最清晰。体系优化后,扩增产物稳定,条带十分清晰,无背景干扰,这为构建天麻的AFLP指纹图谱和分子标记辅助育种提供了有力支撑。
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关键词
天麻
aflp
反应体系
分子标记辅助育种
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Keywords
Gastrodia elata Blume
aflp
reaction system
molecular marker-assisted breeding
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分类号
Q81
[生物学—生物工程]
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