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黄瓜幼苗Rubisco与Rubisco活化酶对光强的响应 被引量：7
1
作者 姜振升 刘培培 +2 位作者 王美玲 毕焕改 艾希珍 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期95-99,共5页
以津优3号幼苗为试材,研究弱光(LL:100μmol.m-2.s-1)、亚弱光(SL:300μmol.m-2.s-1)下黄瓜幼苗光合速率(Pn)、核酮糖-1,5-二磷酸羧化/加氧酶(Rubisco)、Rubisco活化酶(RCA)活性及其基因表达量的变化。结果表明,11 d弱光处理后,黄瓜幼... 以津优3号幼苗为试材,研究弱光(LL:100μmol.m-2.s-1)、亚弱光(SL:300μmol.m-2.s-1)下黄瓜幼苗光合速率(Pn)、核酮糖-1,5-二磷酸羧化/加氧酶(Rubisco)、Rubisco活化酶(RCA)活性及其基因表达量的变化。结果表明,11 d弱光处理后,黄瓜幼苗叶片的Pn、Rubisco初始活性、总活性及RCA活性均显著降低,亚弱光处理的Pn也明显降低,但其Rubisco初始活性和总活性与CK差异不显著。弱光和亚弱光处理的rbcS相对表达量有所降低,而rbcL和CsRCA相对表达量明显增加。说明弱光下Rubisco和RCA活性降低是引起Pn降低的重要原因之一,但当光强达到300μmol.m-2.s-1时,Rubisco和RCA活性与Pn相关性不明显。较长时间的弱光处理后,Pn的降低与rbcS相对表达量减小有关,而rbcL和CsRCA的表达量增加可在一定程度上弥补Rubisco和RCA活性降低引起的光合速率下降。 展开更多
关键词 黄瓜 核酮糖-1 5-二磷酸羧化/加氧酶(rubisco) rubisco活化酶(RCA) 基因表达 弱光 亚弱光
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沉淀pH值对烟草Rubisco结晶的影响 被引量：8
2
作者 张劲松 高学云 +1 位作者 黄镇 方宇澄 《中国烟草科学》 CSCD 1997年第2期1-5,共5页
烟草Ｒｕｂｉｓｃｏ可以通过控制离子强度与ｐＨ形成六角形、十二面体结晶。晶体的形成受Ｒｕｂｉｓｃｏ沉淀过程中的ｐＨ值的影响。对Ｒｕｂｉｓｃｏ等电点ｐＨ的研究发现，ｐＨ５．０、ｐＨ５．１、ｐＨ５．２、ｐＨ５．３、ｐＨ５．... 烟草Ｒｕｂｉｓｃｏ可以通过控制离子强度与ｐＨ形成六角形、十二面体结晶。晶体的形成受Ｒｕｂｉｓｃｏ沉淀过程中的ｐＨ值的影响。对Ｒｕｂｉｓｃｏ等电点ｐＨ的研究发现，ｐＨ５．０、ｐＨ５．１、ｐＨ５．２、ｐＨ５．３、ｐＨ５．４对Ｒｕｂｉｓｃｏ结晶的影响有明显的规律性；ｐＨ低，Ｒｕｂｉｓｃｏ沉淀速率与沉淀率高，沉淀物不规则，沉淀物复溶率低，结晶速率与结晶率低，对结晶时ｐＨ与离子强度选择范围窄，不利于晶体制备；ｐＨ高，Ｒｕｂｉｓｃｏ缓慢沉淀并形成晶体，沉淀速率与沉淀率虽低，但沉淀物复溶率高，结晶速率与结晶率高，对结晶时ｐＨ与离子强度的选择范围宽，有利于晶体制备。沉淀过程中，ｐＨ５． 展开更多
关键词 烟草 核酮糖 二磷酸羧化酶 加氧酶 沉淀pH 结晶
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小麦叶片中1种降解Rubisco大亚基的蛋白酶鉴定 被引量：1
3
作者 吴蔚 陈晓 +5 位作者 张鹏 郑斯旻 吴文 郭金贺 徐朗莱 芮琪 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期63-69,共7页
[目的]探明小麦叶片衰老过程中1种降解1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶（ribulose 1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase,Rubisco）大亚基蛋白酶的生化特性。[方法]通过天然梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳后切胶回收的方法获得Rubisco全酶,... [目的]探明小麦叶片衰老过程中1种降解1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶（ribulose 1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase,Rubisco）大亚基蛋白酶的生化特性。[方法]通过天然梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳后切胶回收的方法获得Rubisco全酶,采用离子交换层析、非完全变性十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和切胶回收蛋白等方法分离目的蛋白酶,并采用含明胶的聚丙烯酰胺凝胶电泳研究其生化特性（主要是最适p H、最适温度、热稳定性、蛋白酶类型等）。[结果]切胶回收的Rubisco全酶样品中存在降解大亚基的蛋白酶。在Mono-Q离子交换层析条件下,该蛋白酶与Rubisco不易分离。利用非完全变性十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离出这种降解大亚基的蛋白酶;在聚丙烯酰胺凝胶中,该蛋白酶相对分子质量大于大亚基相对分子质量,位置在大亚基上方,其余部分没有检测到蛋白酶活性。该酶的最适温度为60℃;最适p H值为7.0,在p H 5.0~8.0均表现出较高的活性;该酶热稳定性一般,在50℃以上几乎完全丧失其活性;丝氨酸蛋白酶抑制剂AEBSF[4-（2-Aminoethyl）benzenesulfonyl fluoride hydrochloride]可以完全抑制蛋白酶活性,金属蛋白酶抑制剂1,10-phenanthroline可以部分抑制该蛋白酶的活性,酸性蛋白酶抑制剂pepstatin、半胱氨酸蛋白酶抑制剂E-64[transepoxysuccinyl-L-leucylamido（4-guanidino）butane]、金属蛋白酶抑制剂EDTA（ethylene diamine tetraacetic acid）和EGTA[ethylenebis（oxyethylenenitrilo）tetraacetic acid]以及丝氨酸蛋白酶抑制剂PMSF（phenylmethanesulfonyl fluoride）不抑制该蛋白酶的活性。[结论]在切胶回收的Rubisco全酶中发现了1种可以降解Rubisco大亚基的蛋白酶,其可能是1种需要金属离子的丝氨酸型蛋白酶。 展开更多
关键词 1 5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(rubisco) 蛋白水解酶 小麦叶片 衰老 理化特性
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桂糖11号Rubisco基因克隆、原核表达及纯化
4
作者 吴朝兴 蒋媛 +5 位作者 王露蓉 顾彩彩 牛俊奇 孙波 李杨瑞 杨丽涛 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期524-529,共6页
【目的】通过原核表达及纯化获得甘蔗1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)的大、小亚基融合蛋白,为获得符合抗体制备条件的高纯度融合蛋白提供技术支持。【方法】以甘蔗品种桂糖11号(GT11)+1叶为材料,根据NCBI公布的甘蔗Rubisco大... 【目的】通过原核表达及纯化获得甘蔗1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)的大、小亚基融合蛋白,为获得符合抗体制备条件的高纯度融合蛋白提供技术支持。【方法】以甘蔗品种桂糖11号(GT11)+1叶为材料,根据NCBI公布的甘蔗Rubisco大、小亚基基因(rbc L和rbc S)的编码域序列(CDS)设计特异性引物,PCR扩增rbc L和rbc S基因的CDS,然后连接至原核表达载体p ET-30a(+),构建重组质粒后转入原核细胞(大肠杆菌Rosetta)中诱导表达,用镍亲和层析柱对融合蛋白进行纯化,并比较分析桂糖11号与其他甘蔗品种在rbc L和rbc S基因的CDS及编码蛋白序列方面的差异。【结果】rbc L和rbc S基因的CDS长度分别为1431和510 bp,其中桂糖11号rbc L基因的CDS与Saccharum hybrid cultivar SP80-3280(Gen Bank登录号AE009947)、Saccharum hybrid cultivar Q155(Gen Bank登录号KU214867)的一致,桂糖11号rbc S基因的CDS与Saccharum hybrid cultivar GT28(Gen Bank登录号JN591757)的存在7个碱基差异,但仅有2个氨基酸发生错义突变。Rbc L和Rbc S融合蛋白以包涵体形式存在原核细胞中,用镍离子亲和层析纯化及超滤浓缩后其浓度均在1.0 mg/m L以上。【结论】从桂糖11号成功克隆Rubisco大亚基和小亚基基因的CDS,大亚基基因的CDS比小亚基的保守性更高,且均可在原核细胞中高度表达,经纯化浓缩获得的高纯度融合蛋白可用于制备Rubisco单克隆抗体。 展开更多
关键词 甘蔗 1 5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(rubisco) 克隆 原核表达 融合蛋白 纯化
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