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利用5′-RACE技术进行人肝再生增强因子相互作用肽cDNA5′末端快速扩增及序列分析 被引量:2
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作者 邓建川 刘杞 +3 位作者 陈曜 孙航 唐琳 王娜 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2006年第4期463-465,共3页
目的:利用5′-RACE技术进行人肝再生增强因子(hALR)相互作用肽cDNA5′末端快速扩增并进行序列分析。方法:按照5′-RACE试剂盒(Takara)操作流程进行hALR相互作用肽cDNA5′末端快速扩增,用BLAST技术对扩增序列进行生物信息学分析。结果:... 目的:利用5′-RACE技术进行人肝再生增强因子(hALR)相互作用肽cDNA5′末端快速扩增并进行序列分析。方法:按照5′-RACE试剂盒(Takara)操作流程进行hALR相互作用肽cDNA5′末端快速扩增,用BLAST技术对扩增序列进行生物信息学分析。结果:成功获取487bp的5′-RACE反应产物,其中5′端延伸了275bp,同源序列分析表明与人Citron激酶mRNA高度同源。结论:5′-RACE技术可以用于快速有效扩增已知部分cDNA序列的5′末端,Citron激酶可能是与hALR具有相互作用的蛋白。 展开更多
关键词 5′-race 人肝再生增强因子 相互作用肽 CDNA
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RLM-RACE法扩增獐茅液泡膜Na^+/H^+逆向转运蛋白基因5′-cDNA末端序列 被引量:3
2
作者 王景艳 张高华 +2 位作者 苏乔 安利佳 刘兆普 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期903-907,共5页
根据已获得的盐生植物獐茅(Aeluropus littoralisvar.sinensisDebeaux)液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白(Na+/H+antiporter)基因部分cDNA片段,设计2条特异引物(GSP1、GSP2),采用RLM-RACE(RNA ligase-medi-ated rapid amplification of 5′and 3... 根据已获得的盐生植物獐茅(Aeluropus littoralisvar.sinensisDebeaux)液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白(Na+/H+antiporter)基因部分cDNA片段,设计2条特异引物(GSP1、GSP2),采用RLM-RACE(RNA ligase-medi-ated rapid amplification of 5′and 3′cDNA ends)法获得了其5-′cDNA末端序列,并找出了转录起始位点。该片段长816 bp,与芦苇液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白基因序列同源性最高达91%,与拟南芥、盐角草、水稻、大麦、小麦的同源性分别为81%、82%、86%、87%和81%,为该基因全长的克隆及启动子的研究奠定了基础。与其它测定基因转录起始位点的方法相比,RLM-RACE方法更快捷、简便、准确。 展开更多
关键词 獐茅 NA^+/H^+逆向转运蛋白 RLM-race 5-′cDNA末端 转录起始位点
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利用RACE技术扩增大豆抗病基因同源cDNA 5′末端序列 被引量:4
3
作者 王邦俊 王强 +2 位作者 张志刚 张劲松 李学刚 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期425-427,共3页
利用抗病基因保守序列筛选大豆cDNA文库,获得一抗病基因同源cDNA片段,命名为KR3-1。根据KR3-1设计两个基因特异引物(GSP和NGSP),分别与通用引物(UPM)和巢式通用引物(NUP)共同扩增,成功地克隆到了该基因的5’末端序列。该扩增片段长447bp... 利用抗病基因保守序列筛选大豆cDNA文库,获得一抗病基因同源cDNA片段,命名为KR3-1。根据KR3-1设计两个基因特异引物(GSP和NGSP),分别与通用引物(UPM)和巢式通用引物(NUP)共同扩增,成功地克隆到了该基因的5’末端序列。该扩增片段长447bp,与已知序列重叠部分为129bp。 展开更多
关键词 RACE技术 扩增 大豆 抗病基因 末端序列
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葡萄microRNA156b和microRNA172c及其靶基因在冬芽二次成花过程中的表达特性研究 被引量:4
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作者 王晨 张演义 +3 位作者 房经贵 宋长年 刘洪 王西成 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期59-64,共6页
利用半定量RT-PCR与实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)技术检测‘藤稔’葡萄microRNA156b(Vv-miR156b)和microRNA172c(Vv-miR172c)及其靶基因(Vv-SPL9和Vv-AP2)在摘心处理(5月14日、5月20日、5月28日)后不同发育时期冬芽中的表达情况,并利用R... 利用半定量RT-PCR与实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)技术检测‘藤稔’葡萄microRNA156b(Vv-miR156b)和microRNA172c(Vv-miR172c)及其靶基因(Vv-SPL9和Vv-AP2)在摘心处理(5月14日、5月20日、5月28日)后不同发育时期冬芽中的表达情况,并利用RLM-5'-RACE验证了miRNAs作用其靶基因的方式。结果表明:仅5月28日摘心处理的冬芽能够进行花芽分化并形成花序,而其他处理及对照未能花芽分化。2种RT-PCR检测结果基本一致,5月28日摘心处理的2条miRNAs表达水平明显下降,且花序中有最低表达。相应的靶基因在冬芽二次成花过程中的表达水平呈现出与其miRNAs相反的变化趋势。RLM-5'-RACE结果显示,2条miRNAs介导靶基因裂解,裂解位点均在miRNAs 5'端的第10和11位碱基之间。表明microRNA156b和microRNA172c通过介导相应靶基因的裂解调控其靶基因的表达,从而影响葡萄冬芽的二次成花。 展开更多
关键词 葡萄 microRNAs 靶基因 冬芽 实时荧光定量RT-PCR RLM-5'-race
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香蕉ACC合成酶cDNA5’末端的快速扩增 被引量:3
5
作者 金志强 徐碧玉 +2 位作者 邵寒霜 彭世清 郑学勤 《热带作物学报》 CSCD 2001年第3期24-28,共5页
采用cDNA末端快速扩增(RapidamplificationofcDNAends,RACE)的方法对香蕉ACC合成酶的cDNA5’末端进行了扩增,获得677bp的产物,序列测定的结果表明,其中一个连续编码区编码149个氨基酸,其序列含有ACC合成酶的第一和第二保守区和一段长23... 采用cDNA末端快速扩增(RapidamplificationofcDNAends,RACE)的方法对香蕉ACC合成酶的cDNA5’末端进行了扩增,获得677bp的产物,序列测定的结果表明,其中一个连续编码区编码149个氨基酸,其序列含有ACC合成酶的第一和第二保守区和一段长230bp的非翻译区。 展开更多
关键词 香蕉 ACC合成酶 cDNA5' 末端扩增
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石榴果肉PgF3′5′H基因克隆及不同温度处理下的表达分析 被引量:4
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作者 关晓弯 陈磊 +1 位作者 涂佳丽 张水明 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期435-443,共9页
为探讨不同温度处理对采后石榴果肉花青苷含量的影响及花青苷合成相关基因(F3′5′H)在石榴果肉花青苷生物合成途径中的作用,该研究以"玉石籽"石榴为试材,于不同温度(0℃、5℃、10℃、15℃)处理下测定石榴果肉花青苷含量,同时利用... 为探讨不同温度处理对采后石榴果肉花青苷含量的影响及花青苷合成相关基因(F3′5′H)在石榴果肉花青苷生物合成途径中的作用,该研究以"玉石籽"石榴为试材,于不同温度(0℃、5℃、10℃、15℃)处理下测定石榴果肉花青苷含量,同时利用RACE技术克隆了石榴果肉花青苷合成相关基因,命名为PgF3′5′H,GenBank登录号为KU058892;并利用RT-PCR技术分析PgF3′5′H基因在不同贮期温度下石榴果肉中的表达特性。结果表明:(1)不同温度处理下,石榴果肉花青苷含量随着贮藏时间(0~56d)的增长呈上升趋势;在整个贮藏过程中,15℃条件下,花青苷含量最高,10℃次之,5℃和0℃则处于较低水平;15℃时花青苷含量在14d后表现不稳定。(2)PgF3′5′H基因全长cDNA为1 199bp,开放阅读框918bp,编码305个氨基酸,在N端36~39处含有细胞色素P450家族基因的特征保守氨基酸序列(CYP基序"PPGP");生物信息学分析表明,该基因编码的氨基酸序列与巨桉的EgF3′5′H2、麻风树的JcF3′5′H2和荷花的NnF3′5′H2氨基酸序列一致性分别高达86%、82%和81%。(3)在0℃、5℃、10℃处理条件下,石榴果肉PgF3′5′H基因表达量随着贮藏时间(0~56d)的延长均呈上升趋势,15℃处理下,石榴果肉PgF3′5′H基因表达量不稳定;石榴果肉PgF3′5′H基因表达与花青苷含量呈显著正相关关系。研究结果为深入探讨采后石榴果肉花青苷的含量变化奠定了基础。 展开更多
关键词 石榴果肉 花青苷 温度 PgF3′5′H RACE RT-PCR
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基于简并引物同步克隆两个红麻PDIL同源基因cDNA 5'-末端序列 被引量:2
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作者 金刚 陈鹏 +1 位作者 唐向民 周瑞阳 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期109-113,共5页
探索利用同一套简并引物结合通用引物同步扩增两个红麻PDIL同源基因的cDNA 5'-末端序列,以期为同一转录组中两个旁系同源基因cDNA 5'RACE的同步扩增提供借鉴。通过红麻HcPDIL5-2a和HcPDIL5-2b cDNA中间片段及3'-末端已知序... 探索利用同一套简并引物结合通用引物同步扩增两个红麻PDIL同源基因的cDNA 5'-末端序列,以期为同一转录组中两个旁系同源基因cDNA 5'RACE的同步扩增提供借鉴。通过红麻HcPDIL5-2a和HcPDIL5-2b cDNA中间片段及3'-末端已知序列的比对,在其完全保守区段设计了一条引物用于两个基因5'RACE的共反转录;在其部分保守区段设计了两条简并引物,并利用其在两个基因的5'RACE扩增时退火温度的差异,结合通用引物巢式PCR同步扩增两个基因的cDNA 5'-末端未知序列。在两个基因全长cDNA拼接序列的基础上设计两对特异引物分别扩增它们的cDNA全长序列,测序结果进一步验证了序列拼接和cDNA 5'RACE同步扩增的可靠性。进化分析证实两个基因属于PDIL基因家族成员。 展开更多
关键词 红麻 简并引物 5'RACE 同步克隆
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朝鲜碱茅甜菜碱醛脱氢酶cDNA 5′末端序列的克隆及植物表达载体的构建 被引量:1
8
作者 王磊 钟鸣 +4 位作者 郭志富 张丽 张佳 赵莉 李浩戈 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2010年第2期30-34,共5页
采用改良的RT-PCR及5′RACE法,成功地克隆了朝鲜碱茅甜菜碱醛脱氢酶(BADH)基因cDNA 5′端序列,与已知序列拼接,获得了BADHcDNA全长1781bp,包含一个完整的开放阅读框(ORF),编码506个氨基酸。其含有醛脱氢酶高度保守序列VT/SLELGGKSP,及其... 采用改良的RT-PCR及5′RACE法,成功地克隆了朝鲜碱茅甜菜碱醛脱氢酶(BADH)基因cDNA 5′端序列,与已知序列拼接,获得了BADHcDNA全长1781bp,包含一个完整的开放阅读框(ORF),编码506个氨基酸。其含有醛脱氢酶高度保守序列VT/SLELGGKSP,及其后29位与酶功能有关的Cys。多序列比对和系统进化分析表明,朝鲜碱茅BADH与大麦BBD1同源性最高,并构建了PBI121-BADH植物表达载体。 展开更多
关键词 朝鲜碱茅 甜菜碱醛脱氢酶 5’RACE 高GC 表达载体
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基于PMA-qPCR检测青枯菌5号生理小种活菌的方法 被引量:8
9
作者 曹梦琪 王旭东 +2 位作者 王俊 盛晟 吴福安 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期1004-1010,共7页
青枯菌5号生理小种(Ralstonia solanacearum race 5)是引发桑青枯病的病原菌。为了改进常规PCR方法不能对活体病原菌进行准确鉴别和定量分析的不足,建立叠氮溴化丙锭(PMA)预处理结合荧光定量PCR(q PCR)检测青枯菌5号生理小种活菌的方法... 青枯菌5号生理小种(Ralstonia solanacearum race 5)是引发桑青枯病的病原菌。为了改进常规PCR方法不能对活体病原菌进行准确鉴别和定量分析的不足,建立叠氮溴化丙锭(PMA)预处理结合荧光定量PCR(q PCR)检测青枯菌5号生理小种活菌的方法。该方法首先将待检测样品的病原菌细胞用质量浓度为15 ng/μL的PMA暗孵育10 min后,在卤钨灯下曝光5min,以消除死菌细胞DNA的PCR扩增信号。用PMA-q PCR方法对含青枯菌5号生理小种活菌和死菌的混合样本的检测结果表明,死菌的存在不会对活菌细胞DNA的扩增产生影响。建立的PMA-q PCR标准曲线显示,在菌液浓度为103~107CFU/m L的范围内,qPCR循环阈值(Ct)与菌液浓度的对数值之间呈良好的线性关系,线性方程为y=-3.477x+47.489,R^2=0.997。建立的PMA-q PCR方法能更为准确地检测复杂样本中的青枯菌5号生理小种活菌数量,有助于对桑树青枯病的早期诊断和及时制定病害防控措施。 展开更多
关键词 桑树青枯病 青枯菌5号生理小种 叠氮溴化丙锭 荧光定量PCR 活细胞
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广西巴马小型猪内源性反转录B亚型病毒5′非编码区的序列扩增及分析 被引量:1
10
作者 欧阳康 吴健敏 +4 位作者 陈凤莲 马玲 刘文娟 白安斌 郭亚芬 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第1期24-28,共5页
应用SMART RACE方法快速扩增广西巴马小型猪内源性反转录病毒(PERV)5′非编码区,获得了一条长度为1 423 bp的PERV-5′UTR序列(GenBank登录号GU390231),该序列与GenBank已发表的PERV-A、B、C各亚型同源性分别为92.4%~95.2%、91.8%~99... 应用SMART RACE方法快速扩增广西巴马小型猪内源性反转录病毒(PERV)5′非编码区,获得了一条长度为1 423 bp的PERV-5′UTR序列(GenBank登录号GU390231),该序列与GenBank已发表的PERV-A、B、C各亚型同源性分别为92.4%~95.2%、91.8%~99.5%和86.5%~92.6%,遗传进化树分析,扩增序列为B亚型PERV-5′UTR。一级结构分析表明,该序列由U3、R、U5、PBS和LEADER 5个区域构成,与GenBank已发表的其他序列相比缺少344 bp。通过plantCARE数据库鉴定,GU390231序列得到28个有效的顺式作用元件,推测这些元件对PERV的转录起着或正或负的调控作用。本试验获得的PERV-B亚型5′UTR序列对进一步研究广西巴马小型猪PERV-B亚型病毒的转录调控机制奠定了基础。 展开更多
关键词 猪内源性反转录病毒 广西巴马小型猪 RACE 5′UTR
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大豆孢囊线虫5号生理小种的研究 被引量:2
11
作者 张磊 李富兴 戴瓯和 《安徽农业科学》 CAS 1990年第4期322-325,共4页
本文报道了大豆孢囊线虫5号小种的鉴定结果.以美国等目前统一应用的一套鉴别寄主的方法对蒙城县病圃里的大豆孢囊线虫进行了生理小种鉴定.该5号小种相当于美国和日本已鉴定发现的同号生理小种.
关键词 大豆 孢囊线虫 抗病 生理小种 育种
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家蚕春用品种5号、4号的育成及其5·4×24·46四元杂交种的选配 被引量:2
12
作者 奚觉民 谢世怀 +2 位作者 叶斌 顾用群 黄爱梅 《蚕业科学》 CAS CSCD 1995年第3期163-167,共5页
采用杂交、回交、系统选育和五龄期高温冲击等育种方法,经多年的选择培育,育成了中系品种5号、4号,然后经测交鉴定选配成5·4×24·46,该对四元杂交种经多年江苏省实验室鉴定,四龄万蚕收茧量22.58kg、... 采用杂交、回交、系统选育和五龄期高温冲击等育种方法,经多年的选择培育,育成了中系品种5号、4号,然后经测交鉴定选配成5·4×24·46,该对四元杂交种经多年江苏省实验室鉴定,四龄万蚕收茧量22.58kg、茧层量5.71kg,比对照种苏5×苏6提高14.27%、14.89%,江苏省农村生产鉴定,张种产茧量47.11kg、产值526.11元,比对照种苏5×苏6提高7.34%、8.29%。并获得全国桑蚕品种审定委员会鉴定通过。该品种强健好养,茧形大且匀整,茧丝质性状良好,综合经济性状优良。 展开更多
关键词 家蚕 春用蚕 品种 育种 杂交种
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微博空间与参与性受众——基于对深圳“5·26”飙车案网民评论的框架分析 被引量:11
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作者 尹连根 《上海交通大学学报(哲学社会科学版)》 CSSCI 北大核心 2014年第2期76-85,共10页
由Livingstone的"参与式受众"概念出发,依托Hall的三种受众解读模式,本文对深圳"5·26"飙车案的微博呈现进行框架分析后发现,受众分化主要体现在对抗性解读框架与优先性解读框架之争。前者集中于对警方不正义... 由Livingstone的"参与式受众"概念出发,依托Hall的三种受众解读模式,本文对深圳"5·26"飙车案的微博呈现进行框架分析后发现,受众分化主要体现在对抗性解读框架与优先性解读框架之争。前者集中于对警方不正义的诘问、对背景不寻常的质疑和对权利不平等的抨击;后者则体现为对警方的认同、对仇富仇官的大众心理的挞伐和对遇难者家属动机的质疑。本文结论认为,微博时代的受众呈现出越来越浓厚的参与性特征,这种受众参与标志着多元化新闻话语时代的逐步开启,并赋予民众巨大的民主想象空间。 展开更多
关键词 微博 受众 框架分析 5·26”飙车案 多元化新闻话语时代 民主
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斑茅20S蛋白酶体α亚基5基因的克隆与序列分析 被引量:1
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作者 余爱丽 姚伟 +2 位作者 徐景升 张木清 陈如凯 《热带作物学报》 CSCD 2004年第2期55-60,共6页
进行了甘蔗属近缘野生种——斑茅抗逆性基因克隆的研究。以斑茅为材料,用RACE技术克隆了斑茅的20S蛋白酶体α亚基5基因,其编码区为711 bp,编码237个氨基酸,并于genbank分析其核苷酸和推导的氨基酸序列的同源性,用Clustalx version 1.8... 进行了甘蔗属近缘野生种——斑茅抗逆性基因克隆的研究。以斑茅为材料,用RACE技术克隆了斑茅的20S蛋白酶体α亚基5基因,其编码区为711 bp,编码237个氨基酸,并于genbank分析其核苷酸和推导的氨基酸序列的同源性,用Clustalx version 1.8软件分析其系统进化关系。结果表明,物种间蛋白酶体进化保守,其核苷酸序列与水稻、大豆、剑叶藓属植物的相应基因同源性分别为91%、81%、80%;其氨基酸序列与水稻、大豆、剑叶藓属植物的同源性分别达97%、95%、86%,与人的同源性也高达69%。 展开更多
关键词 斑茅 20S蛋白酶体 Α亚基 5基因 克隆 序列分析
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鸡局部黏着斑激酶基因5′UTR及启动子的克隆鉴定
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作者 李淑锋 王利祥 +1 位作者 张大鹏 华子春 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期102-107,共6页
为了研究鸡局部黏着斑激酶(FAK)基因表达调控的分子机制,运用cDNA末端快速扩增技术确定了鸡胚成纤维细胞FAK基因的转录起始位点,并发现FAK基因mRNA的5′非翻译区(5′UTR)存在4种剪切形式。分析这4种剪切形式的5′端序列,发现它们都不影... 为了研究鸡局部黏着斑激酶(FAK)基因表达调控的分子机制,运用cDNA末端快速扩增技术确定了鸡胚成纤维细胞FAK基因的转录起始位点,并发现FAK基因mRNA的5′非翻译区(5′UTR)存在4种剪切形式。分析这4种剪切形式的5′端序列,发现它们都不影响蛋白的编码,但可能影响mRNA的翻译效率。另外,将启动子序列935 bp片段克隆构建到荧光素酶报告基因表达载体pGL3-Basic中,转染鸡胚成纤维细胞,测定启动子的转录活性。通过启动子序列系列缩短的克隆,将核心启动子区定位在转录起始位点上游-662至+7的669 bp片段内,该启动子的典型特征是:没有TATA盒,而富含"GC"碱基。以上结果为FAK基因的表达调控研究提供了分子基础。 展开更多
关键词 局部黏着斑激酶基因(FAK) 5′非翻译区(5′UTR) 可变剪切 CDNA末端快速扩增技术
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猪繁殖与呼吸综合征病毒TJM株5′和3′非翻译区克隆与测序
16
作者 刘莹 王凤雪 +1 位作者 温永俊 武华 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第9期1-5,共5页
为了获得猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)TJM株5′非翻译区(5′UTR)和3′非翻译区(3′UTR)的准确序列,采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术进行克隆测序。结果表明,5′和3′末端快速扩增技术(5′RACE和3′RACE)能很好地扩增猪繁殖与呼吸综合... 为了获得猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)TJM株5′非翻译区(5′UTR)和3′非翻译区(3′UTR)的准确序列,采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术进行克隆测序。结果表明,5′和3′末端快速扩增技术(5′RACE和3′RACE)能很好地扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒的末端序列,分别获得长度为493bp和750bp的片段。与NCBI中已发表的原野毒株TJ株序列(EU860248.1)及其他毒株比对分析发现,TJM株5′UTR较TJ株有4处突变,突变后与XJu-1株序列完全一致,其中,前3处突变与许多亚洲毒株相同,3′UTR序列没有改变。通过预测RNA二级结构发现,TJM株5′UTR核苷酸序列的改变能够影响RNA二级结构,而该二级结构是病毒复制和拯救的关键。TJM株5′和3′末端序列的获得,为病毒基因组功能结构分析和全长感染性克隆的构建奠定了基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 5′非翻译区 3′非翻译区 CDNA末端快速扩增
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牛Meg8基因5′末端的克隆及生物信息学分析 被引量:2
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作者 侯晓慧 苏红 李世杰 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期81-86,共6页
利用RACE方法从奶牛中克隆得到了Meg8基因的5′端cDNA序列(GenBank登录号:HQ407410~HQ407413),序列比对发现该基因存在4种可变剪接体。选取牛Meg8基因的5′侧翼区作为研究对象,生物信息学在线分析发现:在人、绵羊、鼠、猪、狗和马... 利用RACE方法从奶牛中克隆得到了Meg8基因的5′端cDNA序列(GenBank登录号:HQ407410~HQ407413),序列比对发现该基因存在4种可变剪接体。选取牛Meg8基因的5′侧翼区作为研究对象,生物信息学在线分析发现:在人、绵羊、鼠、猪、狗和马这几个物种中,牛Meg8基因5′侧翼区与绵羊相似性最高,为80.45%;该区域内存在2个SINEs、1个Si mple repeat,未发现CpG岛;可能存在2个启动子位点,位于牛Meg8基因的Exon1前3 402~4 118 bp和1 200~1 367 bp处,并富含Sp1、SRY、CdxA、GATA-1、MZF1等多个潜在的转录因子位点。Meg8基因5′侧翼区密集存在的转录因子可能与基因的转录起始有关。可变剪接体及侧翼区域的诸多转录因子可能是Meg8基因行使调控功能的原因,本研究结果将为阐明该基因的功能及其调控机理提供分子基础。 展开更多
关键词 Meg8基因 5′RACE 可变剪接 启动子 转录因子结合位点
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棉花单脱氢抗坏血酸还原酶基因的克隆及原核表达 被引量:6
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作者 钱雯婕 王斐 +2 位作者 石峰 葛娟 李鸿彬 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期118-122,共5页
以棉花纤维组织为材料,根据NCBI棉花EST数据库中MDAR基因序列的已知信息,利用5′-RACE获得GhMDAR基因全长。结果显示,该基因开放读码框为1 305bp,编码包含435个氨基酸的蛋白质,分子质量约为52ku。构建原核表达载体pET28a-GhMDAR并转化... 以棉花纤维组织为材料,根据NCBI棉花EST数据库中MDAR基因序列的已知信息,利用5′-RACE获得GhMDAR基因全长。结果显示,该基因开放读码框为1 305bp,编码包含435个氨基酸的蛋白质,分子质量约为52ku。构建原核表达载体pET28a-GhMDAR并转化大肠杆菌,经过测序和酶切鉴定后,成功构建重组体pET28a-GhMDAR;将重组体导入大肠杆菌BL21诱导表达,经过SDS-PAGE分析,显示成功获得分子质量为52ku左右的诱导表达蛋白GhMDAR。 展开更多
关键词 棉花纤维 单脱氢抗坏血酸还原酶基因 5′-race克隆 原核表达
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野生大豆盐胁迫响应基因GsPIP的克隆及其序列分析 被引量:3
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作者 王希 李勇 +3 位作者 柏锡 才华 纪巍 朱延明 《草业学报》 CSCD 北大核心 2011年第1期131-139,共9页
盐胁迫是影响植物生长、发育以至产量的重要因素,野生大豆是优良的非生物胁迫抗性材料,是天然的优质抗性基因库。本研究以耐盐东北野生大豆为试材,利用东北农业大学植物生物工程研究室已获得的基因芯片杂交结果,对植物生物工程研究室构... 盐胁迫是影响植物生长、发育以至产量的重要因素,野生大豆是优良的非生物胁迫抗性材料,是天然的优质抗性基因库。本研究以耐盐东北野生大豆为试材,利用东北农业大学植物生物工程研究室已获得的基因芯片杂交结果,对植物生物工程研究室构建的野生大豆盐胁迫EST数据库中各EST在胁迫下的表达情况进行了分析,从中选出了1个在高盐、低温、干旱胁迫早期均上调表达的3′-EST,序列分析表明该EST编码质膜结合蛋白(plasmamembrane intrinsic protein,PIP),属于主嵌入蛋白(major intrinsic protein,MIP)家族;通过电子克隆和改进的5′-RACE获得了基因完整的编码区;其翻译产物与含羞草质膜结合蛋白的相似性为90%,将该基因命名为GsPIP。GsPIP基因的翻译产物具有主嵌入蛋白家族特征性的跨膜结构域,无信号肽,与已发现的植物PIP蛋白一致。本研究获得的基因具有自主知识产权,通过进一步的功能分析,可为耐渗透胁迫基因工程研究提供基因资源,并为植物耐渗透胁迫机理研究提供依据。 展开更多
关键词 野生大豆 盐胁迫 主嵌入蛋白(MIP) GsPIP 5′-race
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杨树miR393对FBL基因家族成员调控作用的鉴定 被引量:3
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作者 唐芳 楚立威 +2 位作者 贺学娇 舒文波 卢孟柱 《中南林业科技大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期146-153,共8页
【目的】揭示ptc-miR393对杨树FBL基因家族不同成员的剪切调控作用。【方法】首先将杨树FBL基因家族成员与双子叶植物、单子叶植物和蕨类植物代表物种拟南芥、水稻和小立碗藓的FBL基因家族成员进行系统进化分析;再对杨树FBL家族成员的... 【目的】揭示ptc-miR393对杨树FBL基因家族不同成员的剪切调控作用。【方法】首先将杨树FBL基因家族成员与双子叶植物、单子叶植物和蕨类植物代表物种拟南芥、水稻和小立碗藓的FBL基因家族成员进行系统进化分析;再对杨树FBL家族成员的基因结构进行比较;最后通过ptc-miR393与杨树FBL基因家族成员的序列比对、ptc-miR393及FBL基因家族成员在杨树不同发育时期及不同组织中的表达模式以及5′-RACE检测等方面对杨树miR393与FBL基因家族成员的调控作用进行鉴定。【结果】杨树FBL基因家族共有8个不同成员,两两成员之间的同源性较高,通过基因结构和功能域分析,表明它们之间可能存在冗余的功能;PtFBL1-PtFBL4之间具有较高的同源性,位于一个进化分支上,而PtFBL5、PtFBL6和PtFBL7、PtFBL8分别位于不同的分支且与PtFBL1-PtFBL4的同源关系较远。杨树FBL基因的结构和结构域出现一定的变化,预示着它们之间可能出现了分化,在时空调控上的作用有所改变。ptc-miR393与PtFBL1-PtFBL4的互补配对率较高,而与PtFBL5-PtFBL8之间有5~7个碱基的差异,在杨树不同发育时期及不同组织中,PtFBL1-PtFBL4的表达与ptc-miR393呈相反的趋势,而PtFBL5-PtFBL8的表达不受ptc-miR393的影响,5′-RACE实验也检测出PtFBL1-PtFBL4受ptc-miR393的剪切,而PtFBL5-PtFBL8不受ptc-miR393的剪切。【结论】PtFBL1、PtFBL2、PtFBL3和PtFBL4是ptc-miR393的靶基因,而PtFBL5、PtFBL6、PtFBL7和PtFBL8不受ptc-miR393的剪切调控,这为进一步揭示ptc-miR393对杨树FBL基因的调控功能奠定理论基础。 展开更多
关键词 杨树 miR393 FBL基因 靶基因 5′-race 表达模式
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