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水芹4CL基因家族鉴定及高温干旱胁迫下的表达分析 被引量：1
1
作者 徐文娟 花立群 +4 位作者 付丹萍 章亮 薛静晗 白龙飞 甘德芳 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第7期143-156,共14页
【目的】了解水芹Oja4CLs基因家族成员的特性以及在高温、干旱胁迫下的表达情况,为水芹Oja4CLs基因家族成员的功能研究提供理论依据。【方法】以拟南芥4CL保守序列搜索溧阳白芹基因组数据库,并对水芹4CL家族成员编码蛋白的理化性质及家... 【目的】了解水芹Oja4CLs基因家族成员的特性以及在高温、干旱胁迫下的表达情况,为水芹Oja4CLs基因家族成员的功能研究提供理论依据。【方法】以拟南芥4CL保守序列搜索溧阳白芹基因组数据库,并对水芹4CL家族成员编码蛋白的理化性质及家族成员结构域和保守基序进行分析;同时研究高温、干旱胁迫对水芹Oja4CLs基因表达的影响。【结果】在溧阳白芹基因组数据库中共鉴定得到77个水芹4CL家族成员,命名为Oja4CL01~Oja4CL77,其氨基酸残基数在249~2318,分子质量为27.61~257.47 kD;等电点在5.17~8.82,二级结构α-螺旋占比26.54%~46.78%,β转角占比4.40%~10.61%,延伸链占比15.16%~25.33%,无规则卷曲占比29.53%~46.72%。亚细胞定位结果显示,25个Oja4CLs蛋白定位于细胞质,19个Oja4CLs蛋白定位于叶绿体,15个Oja4CLs蛋白定位于细胞质膜,12个Oja4CLs蛋白定位于原生质体,3个Oja4CLs蛋白定位于胞外,2个Oja4CLs蛋白定位于内质网,1个Oja4CLs蛋白定位于细胞核。水芹Oja4CLs基因对高温、干旱呈现不同的响应,定植后7 d(幼苗期),Oja4CL01、Oja4CL15、Oja4CL39、Oja4CL59在高温、干旱胁迫下大量表达;定植后28 d(成株期),Oja4CL59和Oja4CL70在高温、干旱胁迫下大量表达;定植后56 d(开花期),Oja4CL15和Oja4CL59在高温、干旱胁迫下大量表达。【结论】77个水芹4CL基因家族成员分为6个亚家族,大部分Oja4CLs都呈现较高表达,幼苗期水芹对高温、干旱比较敏感,高表达4CL基因以响应高温干旱。 展开更多
关键词 水芹(Oenanthe javanica) 4cl基因家族 生物信息学分析 高温干旱胁迫
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菠萝Ac4CL5基因的克隆及表达分析
2
作者 宋康华 洪克前 +2 位作者 侯晓婉 谷会 姚全胜 《中国南方果树》 北大核心 2025年第2期91-98,共8页
了解Ac4CL5基因在菠萝果肉酚类物质合成中的作用及调控机制,为利用该基因遗传改良菠萝果实品质和抗逆性奠定基础。以“巴厘”菠萝果肉为材料,克隆菠萝4-香豆酸辅酶A连接酶(4-coumaric acid:coenzyme A ligase,4CL)Ac4CL5基因,并进行生... 了解Ac4CL5基因在菠萝果肉酚类物质合成中的作用及调控机制,为利用该基因遗传改良菠萝果实品质和抗逆性奠定基础。以“巴厘”菠萝果肉为材料,克隆菠萝4-香豆酸辅酶A连接酶(4-coumaric acid:coenzyme A ligase,4CL)Ac4CL5基因,并进行生物信息学分析,同时对Ac4CL5基因进行进化分析、原核表达分析和上游调控因子筛选。结果表明,Ac4CL5编码区全长1659 bp,比基因组获得序列少92 bp,推测由于品种差异导致;Ac4CL5具有4CL基因家族典型的保守结构域,亚细胞定位预测Ac4CL5定位于过氧化物酶体;菠萝Ac4CL5属于Class I家族Type I类,推测Ac4CL5参与菠萝果实木质素生物合成;利用原核表达系统成功诱导出可溶性Ac4CL5目的蛋白,对纯化蛋白的酶活性和最适催化底物分析表明,Ac4CL5的最适催化底物为香豆酸,咖啡酸次之。利用Ac4CL5基因启动子进行酵母单杂交筛库发现,溴结合域蛋白GTE9和C2H2型锌指蛋白可能是调控Ac4CL5表达的上游调控因子。Ac4CL5蛋白主要以香豆酸和咖啡酸为底物,其超量表达与菠萝黑心病发生中该类酚类物质的大量积累密切相关。Ac4CL5可能受到溴结合域蛋白GTE9和C2H2型锌指蛋白转录因子调控。 展开更多
关键词 菠萝 4-香豆酸辅酶A连接酶(4cl) 序列 原核表达 转录调控
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葡萄Vv4CL基因家族鉴定及组织特异性表达分析
3
作者 王超霞 胡玉龙 +4 位作者 马欣荣 田淑芬 王荣 马闯 姜建福 《中外葡萄与葡萄酒》 北大核心 2025年第4期6-13,共8页
4-香豆酸辅酶A连接酶(4-Coumarate:CoA Ligase,4CL)是植物苯丙烷代谢途径的核心酶,是类黄酮和木质素生物合成的关键酶,对葡萄果实品质和抗逆境胁迫形成有重要作用。通过生物信息学分析,从葡萄中共鉴定出15个4CL基因家族成员(Vv4CL01-Vv4... 4-香豆酸辅酶A连接酶(4-Coumarate:CoA Ligase,4CL)是植物苯丙烷代谢途径的核心酶,是类黄酮和木质素生物合成的关键酶,对葡萄果实品质和抗逆境胁迫形成有重要作用。通过生物信息学分析,从葡萄中共鉴定出15个4CL基因家族成员(Vv4CL01-Vv4CL15),主要分布于Chr13和Chr18等7条染色体,系统发育分析将其分成4个亚族(Ⅰ-Ⅳ)。顺式作用元件分析发现4CL基因启动子区富集与生长发育、激素和胁迫响应相关的作用元件。共线性分析表明片段复制是家族扩张的主要驱动力。qRT-PCR结果发现Vv4CL02和Vv4CL06在‘巨峰’葡萄的穗轴中高水平表达;Vv4CL03在‘阳光玫瑰’葡萄的幼嫩果粒和茎中表达水平最高。该研究为进一步探究葡萄4CL基因家族参与响应多种逆境胁迫的作用机制提供参考。 展开更多
关键词 葡萄 Vv4cl基因家族 组织特异性 表达分析
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杜仲4CL、C4H和PAL基因家族的基本特征及表达模式分析
4
作者 刘欢龙 陈书明 辛峰 《种业导刊》 2025年第5期6-15,共10页
绿原酸是杜仲主要的活性成分之一,4CL、C4H和PAL是合成绿原酸的关键基因。为研究杜仲4CL、C4H和PAL基因家族的基本特征和表达模式,通过生物信息学方法对杜仲Eu4CL、EuC4H和EuPAL基因家族成员进行鉴定,并分析其理化性质、染色体位置、系... 绿原酸是杜仲主要的活性成分之一,4CL、C4H和PAL是合成绿原酸的关键基因。为研究杜仲4CL、C4H和PAL基因家族的基本特征和表达模式,通过生物信息学方法对杜仲Eu4CL、EuC4H和EuPAL基因家族成员进行鉴定,并分析其理化性质、染色体位置、系统进化树、基因结构、保守基序、启动子区域顺式作用元件以及Eu4CL、EuC4H和EuPAL基因在杜仲不同组织和绿原酸不同含量杜仲品系叶片的表达模式。结果表明,杜仲基因组中共鉴定出7个4CL基因家族成员、2个C4H基因家族成员和5个PAL基因家族成员。从理化性质看,Eu4CL、EuC4H和EuPAL蛋白的氨基酸长度、分子质量、等电点和蛋白亲水平均值均有不同程度的差异。从染色体位置看,Eu4CL、EuC4H和EuPAL基因家族分布在杜仲的9条染色体。从系统进化树看,Eu4CL、EuC4H和EuPAL基因家族与毛果杨和拟南芥均具有较高的同源性。从基因结构看,Eu4CL基因家族有4~6个内含子,EuC4H基因家族有1~2个内含子,EuPAL基因家族仅有1个内含子。从保守基序看,Eu4CL、EuC4H和EuPAL基因家族均包含Motif1~Motif9,具有高度保守性。从启动子区域顺式作用元件看,Eu4CL、EuC4H和EuPAL基因家族启动子区域存在大量参与环境胁迫应答、植物激素响应的顺式作用元件及WRKY、MYB、bHLH转录因子结合位点。从表达模式看,Eu4CL、EuC4H和EuPAL基因在杜仲不同组织中的表达量不同,具有明显的组织特异性,其中,Eu4CL3、EuC4H1、EuPAL3和EuPAL5在叶片中具有较高的表达量,Eu4CL7、EuC4H1、EuPAL3和EuPAL4在木质部中具有较高的表达量。另外,Eu4CL3、EuPAL1和EuPAL5在绿原酸高含量杜仲品系叶片的表达量高于绿原酸低含量杜仲品系。了解杜仲4CL、C4H和PAL基因家族的基本特征和表达模式,为高含量绿原酸杜仲品系育种提供参考。 展开更多
关键词 杜仲 4cl基因家族 C4H基因家族 PAL基因家族 基本特征 表达模式
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花生4CL基因家族鉴定及对干旱与盐胁迫响应分析
5
作者 张泽 杨秀丽 宁东贤 《生物技术通报》 北大核心 2025年第7期117-127,共11页
【目的】分析花生4-香豆酸:CoA连接酶(4-coumarate:CoA ligase,4CL)基因家族成员基本特性及其对干旱和盐胁迫的响应,为培育花生耐旱抗盐品种提供重要的目标基因。【方法】通过HMM文件及NCBI CDD和Pfam数据库在全基因组水平鉴定花生4CL... 【目的】分析花生4-香豆酸:CoA连接酶(4-coumarate:CoA ligase,4CL)基因家族成员基本特性及其对干旱和盐胁迫的响应,为培育花生耐旱抗盐品种提供重要的目标基因。【方法】通过HMM文件及NCBI CDD和Pfam数据库在全基因组水平鉴定花生4CL基因家族成员;利用ExPASy-ProtParam工具进行蛋白理化性质分析;通过MEGA7及itol工具进行系统进化分析;通过MEME及NCBI中的CD-search工具进行蛋白保守基序和保守结构域分析;通过PlantCARE及TBtools进行启动子元件分析及可视化;通过RNA-seq数据及RT-qPCR分析花生4CLs转录水平变化。【结果】借助花生Tifrunner基因组参考数据,鉴定到56个花生4CL基因,氨基酸长度介于239-1208之间,pI介于5.5-9.22之间,蛋白脂肪系数介于80.2-103.13之间,不稳定性指数在25.51-48.79之间,GRAVY值在-0.367-0.139之间;花生A与B基因组的20条染色体上,Ah4CLs基因不均匀地分布,5和15号染色体Ah4CLs基因密度最高;同一个聚类分支,Ah4CLs具有相似的保守基序组成及相似的内含子-外显子分布结构,外显子数量在1-18之间;Ah4CLs启动子区域富含光、非生物胁迫、激素及生长发育响应元件;Ah4CLs表达具有组织特异性,在根、花及种子中表达量较高;在ABA、盐与干旱胁迫处理下,部分Ah4CLs转录水平显著增加,特别是Ah4CL28在ABA、干旱及盐处理下均明显转录上调,这些基因在花生应对非生物胁迫中可能发挥着重要作用。【结论】鉴定到的56个花生4CL基因家族成员有不同结构与特性,在部分基序及结构域上具有保守型,Ah4CLs在影响花生生长发育的同时,还参与非生物胁迫响应。 展开更多
关键词 花生 4cl基因 基因家族 进化分析 共线性分析 启动子分析 干旱胁迫 盐胁迫
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茶树4-香豆酸辅酶A连接酶基因Cs4CL1的克隆与蛋白表达分析 被引量：3
6
作者 高荣广 李昊 +1 位作者 向勤锃 李敏 《山东农业科学》 2020年第3期8-12,共5页
4-香豆酸辅酶A连接酶(4CL)是木质素合成过程中的关键酶。本试验以‘福鼎大白’茶树为材料,克隆得到Cs4CL1基因,该基因长度为1715 bp,开放阅读框长度1623 bp,编码540个氨基酸。氨基酸同源性分析显示,Cs4CL1蛋白具有植物4CL酶的典型特征,... 4-香豆酸辅酶A连接酶(4CL)是木质素合成过程中的关键酶。本试验以‘福鼎大白’茶树为材料,克隆得到Cs4CL1基因,该基因长度为1715 bp,开放阅读框长度1623 bp,编码540个氨基酸。氨基酸同源性分析显示,Cs4CL1蛋白具有植物4CL酶的典型特征,即AMP结合功能域和GEICIRG保守区。系统进化分析显示,Cs4CL1蛋白与蓝果树、烟草、番茄等植物的4CL1蛋白聚为一类,属于4CL亚家族A。利用原核表达系统可诱导出具有活性的Cs4CL1重组蛋白,该蛋白大小为78 kD。本研究为深入解析Cs4CL1在茶树木质素合成途径中的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 茶树 木质素 Cs4cl1基因 Cs4cl1蛋白 同源性分析 原核表达分析
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慈竹4CL基因的克隆及其生物信息学分析 被引量：22
7
作者 胡尚连 曹颖 +3 位作者 黄胜雄 孙霞 卢学琴 蒋瑶 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2009年第8期204-210,共7页
【目的】克隆慈竹木质素生物合成酶4CL基因,研究其序列特征,为今后利用该基因调控慈竹木质素的生物合成研究奠定基础。【方法】参照其他物种4CL基因保守区,设计简并引物,以慈竹幼笋cDNA为模板,克隆到1条750 bp的4CL基因保守区片段。以... 【目的】克隆慈竹木质素生物合成酶4CL基因,研究其序列特征,为今后利用该基因调控慈竹木质素的生物合成研究奠定基础。【方法】参照其他物种4CL基因保守区,设计简并引物,以慈竹幼笋cDNA为模板,克隆到1条750 bp的4CL基因保守区片段。以这条保守区片段为模板,结合5′RACE和3′RACE克隆4CL基因全长序列,并对其进行了生物信息学分析。【结果】成功克隆了慈竹4CL基因全序列,该序列CDS区全长为1 674 bp,编码558个氨基酸;氨基酸序列中存在两大4CL氨基酸保守域(SSGTTGMPKGV和GEICIRG),其中前一个氨基酸保守域的第7个氨基酸位点变为M,与常见的L不同,表明慈竹的4CL基因发生了一定变异。系统进化分析表明,该基因(Na4CL)与水稻的Os4CL4和黑麦草的Lp4CL2具有很高的同源性。【结论】克隆了慈竹木质素合成酶4CL基因全长序列,在GenBank上注册为EU327341,可能与慈竹木质素生物合成有关。 展开更多
关键词 慈竹 4cl基因 克隆 生物信息学分析
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亚麻4CL基因克隆及RNAi遗传转化 被引量：9
8
作者 龙松华 李翔 +6 位作者 陈信波 乔瑞清 邓欣 邱财生 郭媛 郝冬梅 王玉富 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期2405-2411,共7页
该实验以前期克隆的亚麻4CL基因片段为靶序列,利用RACE方法克隆其全长cDNA序列(1 957bp),GenBank登录号为KC832864,该序列含有1 650bp完整的开放阅读框。系统进化树分析表明,亚麻4CL基因与盐芥4CL基因亲缘关系较近,而与禾本科的水稻(Ory... 该实验以前期克隆的亚麻4CL基因片段为靶序列,利用RACE方法克隆其全长cDNA序列(1 957bp),GenBank登录号为KC832864,该序列含有1 650bp完整的开放阅读框。系统进化树分析表明,亚麻4CL基因与盐芥4CL基因亲缘关系较近,而与禾本科的水稻(Oryza sativa)等亲缘关系最远。其编码蛋白预测分析结果显示,亚麻4CL基因由549个氨基酸组成,相对分子量为60kD,等电点为5.3,蛋白质二级结构以无规则卷曲比例最多,其次是α-螺旋。以亚麻4CL基因编码区413bp靶标序列作为干扰区段,扩增其正反向基因片段,构建植物干扰表达载体p1301M-4CL。通过农杆菌介导转入亚麻,DNA及RNA水平上分子检测发现,RNAi结构已经转入亚麻中,并显著降低了其4CL基因的表达量。 展开更多
关键词 亚麻 木质素 4cl基因 序列分析 RNAI载体 遗传转化
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木质素生物合成酶4CL基因的遗传进化分析 被引量：15
9
作者 黄胜雄 胡尚连 +3 位作者 孙霞 曹颖 卢学琴 蒋瑶 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2008年第10期199-206,共8页
【目的】4CL是木质素生物合成途径中的关键合成酶,通过对4CL基因的遗传进化分析,为其研究和利用提供理论依据。【方法】利用生物信息学手段,对4CL基因完整cDNA和编码氨基酸序列进行数据挖掘,利用Mega软件、ExPASy的Prosite数据库、NCBI... 【目的】4CL是木质素生物合成途径中的关键合成酶,通过对4CL基因的遗传进化分析,为其研究和利用提供理论依据。【方法】利用生物信息学手段,对4CL基因完整cDNA和编码氨基酸序列进行数据挖掘,利用Mega软件、ExPASy的Prosite数据库、NCBI的Conserved Domains数据库,进行4CL基因核酸和蛋白质水平上的遗传进化分析。【结果】构建了4CL基因的系统发生树,揭示出植物中的4CL基因聚类与植物分类大体一致,主要以基因家族的形式存在,但基因家族中部分基因存在着结构和功能的分化,4CL基因中存在着GC含量偏高和偏低两大类基因。4CL基因编码的氨基酸序列保守区高度相似,但是在单、双子叶两大类植物之间,其氨基酸平均含量存在着较大差异。【结论】在植物的进化过程中,虽然4CL基因较保守,但部分4CL基因发生了分化,体现在基因的结构和功能方面,在4CL基因的研究中必须充分考虑到这种分化。 展开更多
关键词 木质素 4cl基因 遗传进化分析
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GRP1.8融合反义4CL1基因调控烟草木质素生物合成 被引量：25
10
作者 赵艳玲 陆海 +2 位作者 陶霞娟 陈雪梅 蒋湘宁 《北京林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期16-20,共5页
该研究成功地将从刺槐 (Robiniapseudoacacia)中克隆得到的定位于形成层表达的GRP1 8启动子 ,分别与GUS报告基因及从毛白杨 (Populustomentosa)中克隆的香豆酸连接酶 (4CL1)基因连接构建成GRP1 8 GUS和GRP1 8 anti 4CL1融合基因 ,转... 该研究成功地将从刺槐 (Robiniapseudoacacia)中克隆得到的定位于形成层表达的GRP1 8启动子 ,分别与GUS报告基因及从毛白杨 (Populustomentosa)中克隆的香豆酸连接酶 (4CL1)基因连接构建成GRP1 8 GUS和GRP1 8 anti 4CL1融合基因 ,转基因于烟草植物 .经组织化学检测分析 ,GUS基因成功地由GRP1 8启动子驱动定位于形成层表达 ;融合基因GRP1 8 anti 4CL1的表达明显地改变了转基因烟草植株的木质素和纤维素的含量和比例 .转基因烟草的木质素含量较对照平均降低了 13 7% ,而转基因植株的纤维素含量较对照升高了 15 6 % . 展开更多
关键词 形成层定位表达启动子GRP1.8 反义4cl1基因 转基因烟草 木质素 纤维素
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加氢处理系统NH_4Cl结晶沉积预测及优化防控 被引量：26
11
作者 金浩哲 偶国富 +2 位作者 王宽心 张文彪 程福星 《石油学报（石油加工）》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第4期662-667,共6页
通过热力学计算获得NH4Cl结晶反应的平衡曲线,分析冷换设备中NH4Cl结晶沉积机理;针对某石油化工厂典型加氢反应流出物冷却分离工艺,运用Aspen仿真软件建立多相平衡体系,计算获得气相中Kp即pHCl×pNH3随温度的变化曲线;结合二者建立... 通过热力学计算获得NH4Cl结晶反应的平衡曲线,分析冷换设备中NH4Cl结晶沉积机理;针对某石油化工厂典型加氢反应流出物冷却分离工艺,运用Aspen仿真软件建立多相平衡体系,计算获得气相中Kp即pHCl×pNH3随温度的变化曲线;结合二者建立加氢反应流出物冷却分离系统NH4Cl结晶预测模型,计算获得含不同N、Cl质量分数进料的NH4Cl结晶温度,并提出基于NH4Cl结晶沉积预测的冷却分离系统注水优化方案。结果表明,冷换设备中NH4Cl结晶沉积存在自加速过程,典型工况下NH4Cl结晶温度在155~205℃范围,主要发生在热高压分离高压换热器和空冷器内;根据进料N、Cl的质量分数预测NH4Cl结晶温度,并及时移动注水位置和调节注水量,可有效防止NH4Cl结晶沉积及垢下腐蚀。 展开更多
关键词 加氢系统 NH4cl结晶 沉积 热力学计算 Aspen模拟
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RNAi沉默Fa4CL基因对草莓果实花色苷代谢的影响 被引量：8
12
作者 张蕾 林晓 +3 位作者 罗赟 汪佳易 徐川 王红清 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期434-439,522,共7页
【目的】探讨Fa4CL与花色苷代谢之间的关系,构建RNA干扰载体转染草莓果实,研究Fa4CL基因在草莓花色苷代谢中的功能。【方法】用RT-PCR方法从‘阿尔比’草莓(Fragaria×ananassa‘Albion’)果实中克隆Fa4CL基因。构建不含内含子的发... 【目的】探讨Fa4CL与花色苷代谢之间的关系,构建RNA干扰载体转染草莓果实,研究Fa4CL基因在草莓花色苷代谢中的功能。【方法】用RT-PCR方法从‘阿尔比’草莓(Fragaria×ananassa‘Albion’)果实中克隆Fa4CL基因。构建不含内含子的发夹结构干扰载体p BI-4CLi,将其转入农杆菌GV3101,采用无菌注射器注入到授粉后14 d的‘阿尔比’草莓果实中转染,与对照果比较表型变化、物质变化,半定量RT-PCR检测Fa4CL基因的表达量的变化。【结果】克隆的Fa4CL的CDS,长1638 bp,编码545个氨基酸。与森林草莓Fv4CL2基因序列的同源性较高,为98.4%。p BI-4CLi转染果与对照果相比,转染果的果皮红色变浅。进一步利用RT-PCR分析发现,p BI-4CLi转染果Fa4CL基因表达量明显低于对照果。分析果实花色苷含量发现,p BI-4CLi转染果的花青素糖苷和花葵素糖苷分别比对照果降低了93.5%和97.0%,差异均达到显著水平。【结论】RNA干扰载体转染草莓果实的结果证明Fa4CL成功沉默,Fa4CL基因与花色苷的合成关系密切。 展开更多
关键词 草莓 4-香豆酰-Co A连接酶(4cl) RNA干扰 花色苷
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芒果4CL基因的克隆及其表达分析 被引量：11
13
作者 罗睿雄 赵志常 +2 位作者 高爱平 黄建峰 刘宽亮 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2016年第S1期57-62,共6页
4-香豆酸:辅酶A连接酶(4CL)是植物类黄酮类化合物和木质素等生物合成途径的一种关键酶,为了研究其在芒果果实中的作用机理,采用RACE方法,从芒果果实克隆得到了一个类黄酮合成相关的4CL基因。该基因全长c DNA序列为1 740 bp,开放阅读框为... 4-香豆酸:辅酶A连接酶(4CL)是植物类黄酮类化合物和木质素等生物合成途径的一种关键酶,为了研究其在芒果果实中的作用机理,采用RACE方法,从芒果果实克隆得到了一个类黄酮合成相关的4CL基因。该基因全长c DNA序列为1 740 bp,开放阅读框为1 653 bp,编码550个氨基酸,分子量为60.47 k Da,等电点为9.51。对基因组扩增得到了2 318 bp长度的片段分析发现,该基因含有5个内含子,分别在1 013~1 139 bp,1 330~1 415 bp,1 564~1 653 bp,1 722~1 802 bp,1 905~2 000 bp。通过在线软件对其二级结构和三级结构进行了预测,系统发育分析发现该基因编码的蛋白与水曲柳、菘蓝等植物具有较近的亲缘关系。对3种不同着色的芒果品种中的4CL基因的RTPCR进行分析发现:红色的贵妃品种中表达量较高,而绿色的桂七品种中表达量较低。研究表明4CL基因表达芒果果实着色具有密切的相关性。 展开更多
关键词 芒果 4cl 基因克隆
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象草4CL基因片段的克隆及RNAi表达载体构建 被引量：10
14
作者 霍松 陈慧 +1 位作者 朱琼华 解新明 《草业学报》 CSCD 北大核心 2012年第1期296-301,共6页
象草是热带和亚热带地区广泛栽培的多年生资源植物。为探讨华南象草4-香豆酸:CoA连接酶(4CL)基因下调表达对木质素合成的影响,本研究设计1对特异引物,PCR扩增获得一段长为374bp的干扰片段。通过TO-PO克隆,将该片段克隆到载体pCR/GW/T... 象草是热带和亚热带地区广泛栽培的多年生资源植物。为探讨华南象草4-香豆酸:CoA连接酶(4CL)基因下调表达对木质素合成的影响,本研究设计1对特异引物,PCR扩增获得一段长为374bp的干扰片段。通过TO-PO克隆,将该片段克隆到载体pCR/GW/TOPO,构建了入门克隆载体pENTR-4CL;再经过LR反应使pE-NTR-4CL上的干扰片段进入目的载体pCB2004B上,形成表达载体pCB2004B-4CL,最后通过冻融法将其转入到根癌农杆菌EHA105中。菌液PCR结果表明RNAi质粒已成功转入农杆菌,为进一步利用RNAi技术研究4CL基因的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 象草 GATEWAY技术 4cl基因 RNAI 载体构建
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华南象草Pp4CL基因的克隆及其转基因烟草木质素含量分析 被引量：7
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作者 钟天秀 李有涵 +4 位作者 李菲 彭小群 柯善文 陈曙 解新明 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期2355-2364,共10页
为探究华南象草(Pennisetum purpureumcv.Huanan)木质素合成关键酶基因的调控机制,通过同源克隆得到华南象草4-香豆酸:CoA连接酶基因(Pp4CL)的cDNA序列,长度为1 943bp,其中编码区序列1 662bp。Pp4CL蛋白由553个氨基酸组成,分子量为59.57... 为探究华南象草(Pennisetum purpureumcv.Huanan)木质素合成关键酶基因的调控机制,通过同源克隆得到华南象草4-香豆酸:CoA连接酶基因(Pp4CL)的cDNA序列,长度为1 943bp,其中编码区序列1 662bp。Pp4CL蛋白由553个氨基酸组成,分子量为59.57kD,等电点为5.2,属于疏水性蛋白。该蛋白含有AMP结合结构域,属于AFD ClassⅠ超家族。在系统进化分析中,Pp4CL与At4CL1、Os4CL1遗传距离最近,聚为一支。Pp4CL氨基酸序列具有SSGTGLPKGV和GEICIRG等2个保守基序,是典型的植物4CL。构建原核表达载体pGEX-4CL,得到约88kD的Pp4CL-GST融合蛋白,为Pp4CL酶活性测定及Western免疫印迹分析奠定了基础。同时构建植物表达载体pBA-4CL,并通过叶盘法对烟草进行了遗传转化,得到3个转基因阳性株系(OX-9、OX-7、OX-4),它们中叶柄木质素总含量分别比非转基因植株(对照)提高了10.0%、16.2%和94.6%,茎秆基部节木质素总含量分别比对照提高了0.9%、4.0%和13.5%。研究结果表明,Pp4CL蛋白与木质素合成有关,过表达Pp4CL基因能够显著提高植株木质素含量。该研究结果为华南象草木质素改良工作打下了基础,同时也为深入开展牧草分子育种提供了依据。 展开更多
关键词 华南象草 木质素 4cl基因 转基因烟草
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灰毡毛忍冬Lm4CL基因克隆及表达分析 被引量：10
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作者 乔中全 王晓明 +5 位作者 曾慧杰 刘思思 蔡能 彭继庆 黄益智 李永欣 《中南林业科技大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期122-132,共11页
【目的】克隆灰毡毛忍冬4CL基因,分析其在不同组织间的表达水平及与绿原酸含量的相关性。【方法】以灰毡毛忍冬转录组4CL候选基因为参考,采用RACE技术克隆4CL基因全长,并对其理化性质、保守结构域等进行生物信息学分析;用荧光定量PCR方... 【目的】克隆灰毡毛忍冬4CL基因,分析其在不同组织间的表达水平及与绿原酸含量的相关性。【方法】以灰毡毛忍冬转录组4CL候选基因为参考,采用RACE技术克隆4CL基因全长,并对其理化性质、保守结构域等进行生物信息学分析;用荧光定量PCR方法分析其在不同组织、不同发育阶段的表达特性;采用HPLC法测定灰毡毛忍冬叶、茎和花中绿原酸含量;构建表达载体pCold-Lm4CL,转化大肠杆菌BL 21(DE3),IPTG诱导表达后SDS-PAGE检测。【结果】从灰毡毛忍冬中分离出两个4CL基因,分别命名为Lm4CL1和Lm4CL2,分别编码538和560个氨基酸;氨基酸序列分析表明,Lm4CLs包含4-香豆酸:辅酶A连接酶中的Box I和Box II保守结构域及大多数保守的活性位点,而Lm4CL2中的Box I和Box II有4个氨基酸发生改变;Lm4CL1是没有跨膜结构域的不稳定蛋白,Lm4CL2是有两个跨膜结构域的稳定蛋白。系统发育分析表明,这两个同源基因处于不同的类别,Lm4CL1属于Ⅰ类,Lm4CL2属于Ⅱ类。通过建立三维结构模型分析了Lm4CL蛋白的结构特征,为了解Lm4CL的结构特征提供了基础信息。表达模式分析结果表明,Lm4CL1基因在不同组织、不同发育阶段的表达水平与Lm4CL2基因明显不同。基因表达量与绿原酸含量相关性分析显示,Lm4CL1基因的表达量与绿原酸含量呈负相关(r=-0.63),Lm4CL2基因的表达量与绿原酸含量呈正相关(r=0.94)。SDSPAGE结果显示,Lm4CL1蛋白的大小与预测的蛋白相对分子质量基本一致。【结论】推测Lm4CL1基因与灰毡毛忍冬木质素的合成有关,Lm4CL2基因与灰毡毛忍冬的绿原酸合成有关。 展开更多
关键词 灰毡毛忍冬 Lm4cl 绿原酸 表达分析 RACE
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白光LED用Ca_8Mg(SiO_4)_4Cl_2:Eu^(2+),Dy^(3+)发光粉的发光性能 被引量：15
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作者 沈超 邵起越 +2 位作者 韩学林 董岩 蒋建清 《发光学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第1期44-48,共5页
采用高温固相法合成了白光LED用Ca8Mg(SiO4)4Cl2:Eu和Ca8Mg(SiO4)4Cl2:Eu,Dy绿色发光粉。研究发现:共掺Dy可以明显地提高Ca8Mg(SiO4)4Cl2:Eu发光粉的发光性能,表明Dy3+和Eu2+之间存在着能量传递过程。当Dy3+的最佳掺杂摩尔分数为0.02时... 采用高温固相法合成了白光LED用Ca8Mg(SiO4)4Cl2:Eu和Ca8Mg(SiO4)4Cl2:Eu,Dy绿色发光粉。研究发现:共掺Dy可以明显地提高Ca8Mg(SiO4)4Cl2:Eu发光粉的发光性能,表明Dy3+和Eu2+之间存在着能量传递过程。当Dy3+的最佳掺杂摩尔分数为0.02时,发光粉505nm处绿光发射的强度约提高12%。通过对Dy3+和Eu2+光谱特性的分析,Dy3+和Eu2+之间的能量传递机制可归因于无辐射交叉弛豫。 展开更多
关键词 白光LED Ca8Mg(SiO4)4cl2:Eu2+ Dy3+ 发光性能 能量传递
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反义4CL1基因转化烟草调控木质素生物合成 被引量：12
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作者 杨雪萍 陆海 +1 位作者 陈雪梅 蒋湘宁 《北京林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期1-5,共5页
将控制木质素生物合成的关键限速酶 (香豆酸CoA连接酶 ,4CL)基因 4CL1反向插入植物表达载体pBI12 1构建表达载体 ,通过农杆菌叶盘法介导转化烟草 ,获得一批转基因抗性植株 .经PCR检测 ,证明 4CL1基因已成功反义转入到烟草植株中 .通过... 将控制木质素生物合成的关键限速酶 (香豆酸CoA连接酶 ,4CL)基因 4CL1反向插入植物表达载体pBI12 1构建表达载体 ,通过农杆菌叶盘法介导转化烟草 ,获得一批转基因抗性植株 .经PCR检测 ,证明 4CL1基因已成功反义转入到烟草植株中 .通过对转基因植株和对照植株的纤维素和木质素含量的对比分析 ,发现反义 4CL1基因转化植株的纤维素含量比对照提高了 11 4 % ,而木质素含量比对照降低了 19 1% . 展开更多
关键词 反义4cl基因 转基因烟草 木质素 纤维素
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NH_4Cl和NaNO_2化学生热体系对储层损害的研究 被引量：10
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作者 娄毅 杨胜来 +1 位作者 王玉霞 李武广 《油田化学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期292-295,共4页
储层损害研究是对正在实施化学驱的稠油油藏进行科学降黏、提高采收率的一项重要工作。室内进行NH4Cl和NaNO2化学生热体系分段储层损害评价和单组分反应剂储层损害研究,得到一次水驱和化学降黏后二次水驱的岩心渗透率变化值,计算岩心渗... 储层损害研究是对正在实施化学驱的稠油油藏进行科学降黏、提高采收率的一项重要工作。室内进行NH4Cl和NaNO2化学生热体系分段储层损害评价和单组分反应剂储层损害研究,得到一次水驱和化学降黏后二次水驱的岩心渗透率变化值,计算岩心渗透率损害率,考察化学生热体系对储层的损害程度及影响因素。结果表明,化学生热段的渗透率损害率最大,为50.96%;而反应后期段与反应残液段的相近,约17%。单组分反应剂损害实验中,NH4Cl溶液具有改善储层渗透率的作用,而NaNO2溶液对储层有害。该研究可为稠油油藏化学驱降黏技术的高效开发提供一定的理论指导,对深入了解稠油化学驱油田的开发动态和采收率具有一定的意义。 展开更多
关键词 NH4cl NaNO2 化学生热体系 渗透率损害率 储层损害
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葡萄木质素相关基因PAL、4CL和CAD特征鉴定及其应答赤霉素在果实发育过程中的作用 被引量：6
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作者 汤崴 白云赫 +4 位作者 胡雨晴 王晨 崔梦杰 张文颖 房经贵 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期430-439,共10页
[目的]本文旨在研究苯丙氨酸解氨酶基因(PAL)、4-香豆酸-辅酶连接酶基因(4CL)和肉桂醇脱氧酶基因(CAD)在葡萄(Vitis vinifera L.)‘白罗莎’核木质素合成过程中的作用,进而探究其在应答赤霉素(GA)调控果实发育尤其在种子发育过程中的潜... [目的]本文旨在研究苯丙氨酸解氨酶基因(PAL)、4-香豆酸-辅酶连接酶基因(4CL)和肉桂醇脱氧酶基因(CAD)在葡萄(Vitis vinifera L.)‘白罗莎’核木质素合成过程中的作用,进而探究其在应答赤霉素(GA)调控果实发育尤其在种子发育过程中的潜在作用,分析其在诱导果实无核过程中的作用。[方法]采用生物信息学分析、基因芯片和RT-qPCR等方法,对葡萄VvPAL、Vv4CL和VvCAD基因定位、结构和启动子作用元件分析,对其编码蛋白相似性、结构域以及互作蛋白进行分析,并鉴定其应答GA在果实不同组织不同时期的表达模式。[结果]葡萄VvPAL、Vv4CL和VvCAD与其他物种同源分析比对发现,其内含子与外显子数量及其分布相似。基因启动子分析表明,3个基因均含有胚乳发育相关组织特异性元件,且Vv4CL基因含有GA响应元件。3个基因所编码蛋白进化保守性较强,与其他物种比对后发现它们含有相同的蛋白功能结构域并且作用元件相似。亚细胞定位预测显示其主要集中在细胞质和细胞膜中表达,其互作蛋白主要是肉桂酸-4-羟化酶(C4H)、咖啡酸氧甲基转移酶(OMT)等木质素合成过程中的关键酶。葡萄芯片电子表达谱发现,VvPAL和Vv4CL基因在根、茎等木质化程度相对较高的组织中高表达,而VvCAD基因则只在种子中相对高表达。RT-qPCR结果显示,GA在种子某些特定时期极显著下调VvPAL、Vv4CL、VvCAD基因的表达。[结论]VvPAL、Vv4CL和VvCAD基因参与葡萄果实发育过程的调控,且GA可能通过下调这3个基因的表达从而抑制葡萄核发育。 展开更多
关键词 葡萄 VvPAL Vv4cl VvCAD 木质素 果实发育
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