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转抗虫基因优良籼型恢复系的获得及其外源基因的遗传稳定性研究 被引量:22
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作者 马炳田 李平 +1 位作者 朱祯 周开达 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期211-215,共5页
用基因枪法将雪花莲外源凝集素基因 (gna )转移到优良籼型杂交稻恢复系蜀恢 5 2 7中 ,通过 PCR、PCR- South-ern blotting和 Southern blotting等分子方法检测证明 ,外源基因已稳定遗传到转基因第三代 (T2 )。转基因第一代植株 (T0 )在... 用基因枪法将雪花莲外源凝集素基因 (gna )转移到优良籼型杂交稻恢复系蜀恢 5 2 7中 ,通过 PCR、PCR- South-ern blotting和 Southern blotting等分子方法检测证明 ,外源基因已稳定遗传到转基因第三代 (T2 )。转基因第一代植株 (T0 )在株高和结实率上与相应的组培、种子实生苗植株相比 ,发生明显的不可遗传的变异。随着繁殖代数的增加 ,转基因植株恢复到与对照植株一致。还讨论了 DNA微量提取法在转基因后代筛选中的运用。 展开更多
关键词 转抗虫基因优良籼型恢复系 外源基因 遗传稳定性 转基因水稻 雪花莲外源凝集素基因 DNA微量提取法
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GNA和α-PAP双抗表达载体的构建及对烟草的遗传转化 被引量:10
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作者 柴红梅 张绍松 +2 位作者 万萌 赵永昌 黄兴奇 《西南农业学报》 CSCD 2002年第4期35-37,共3页
将带有启动子GaMV35S、终止子Nos ter的雪花莲凝集素基因GNA插入到已构建好的植物表达载体pBI121/α PAP上,构建成双抗表达载体pBI121/GNA+α PAP,并采用农杆菌介导法将其转化进入烟草红花大金元,获得了卡那霉素筛选的抗性植株,通过PCR... 将带有启动子GaMV35S、终止子Nos ter的雪花莲凝集素基因GNA插入到已构建好的植物表达载体pBI121/α PAP上,构建成双抗表达载体pBI121/GNA+α PAP,并采用农杆菌介导法将其转化进入烟草红花大金元,获得了卡那霉素筛选的抗性植株,通过PCR扩增验证,烟草基因组中含有这两个抗性基因。 展开更多
关键词 GNA α-PAP 双抗表达载体 烟草 遗传转化 雪花莲凝集素 商陆抗病毒蛋白 表达载体构建
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转抗蚜GNA基因苜蓿的研究 被引量:6
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作者 卢广 张青文 田颖川 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期23-26,共4页
将雪花莲凝集素基因GNA插入双元载体pBI121中的GUS基因的上游,得到植物表达载体pLG66m。GNA与GUS基因构成融合基因,共用一个CaMV35S启动子。将该表达载体导入农杆菌LBA4404,得到LBA4404/pLG66m菌株。利用LBA4404/pLG66m菌株培养液直... 将雪花莲凝集素基因GNA插入双元载体pBI121中的GUS基因的上游,得到植物表达载体pLG66m。GNA与GUS基因构成融合基因,共用一个CaMV35S启动子。将该表达载体导入农杆菌LBA4404,得到LBA4404/pLG66m菌株。利用LBA4404/pLG66m菌株培养液直接浸泡萌动的苜蓿种子,组织学检测表明GUS在种苗上3 d的瞬时表达效率超过90%。待苜蓿长出第3片真叶后检测,GUS表达效率明显下降。GNA基因在种苗期间的短期表达也积累GNA毒蛋白在苜蓿体内的含量,为苜蓿在苗期抗蚜起到一定作用。 展开更多
关键词 苜蓿种子 GNA基因 GUS基因 苗期 种苗 毒蛋白 菌株培养 组织学检测 体内 融合基因
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雪花莲凝集素基因(GNA)植物表达载体的构建及其对烟草的遗传转化 被引量:3
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作者 柴红梅 姚春馨 +1 位作者 张绍松 黄兴奇 《西南农业学报》 CSCD 2004年第B05期66-68,共3页
将雪花莲凝集素基因(GNA)取代GUS基因正向插入到Ti质粒载体pBI121的35S启动子之下,构建成植物表达载体pBI121/GNA,并将其导入农杆菌LBA4404中。通过该农杆菌介导转化烟草红花大金元,得到卡那霉素抗性植株159株,PCR检测表明其中102株为... 将雪花莲凝集素基因(GNA)取代GUS基因正向插入到Ti质粒载体pBI121的35S启动子之下,构建成植物表达载体pBI121/GNA,并将其导入农杆菌LBA4404中。通过该农杆菌介导转化烟草红花大金元,得到卡那霉素抗性植株159株,PCR检测表明其中102株为阳性。对8株PCR阳性植株进行了抗蚜虫生物活性检测,抑制蚜虫密度为25%-90%。 展开更多
关键词 雪花莲凝集素 基因 GNA 植物 表达载体 蚜虫 生物活性 烟草
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雪花莲外源凝集素基因在水稻保持系上的转化 被引量:4
5
作者 牛芝霞 朱祯 +5 位作者 李艳萍 吴茜 邹美智 牛景 孙海波 周维 《天津农业科学》 CAS 2003年第2期1-4,共4页
通过把雪花莲外源凝集素基因(GNA)与潮霉素抗性基因(Hyg)构建到同一表达载体上,利用基因枪转化方法,把雪花莲外源凝集素基因导入粳稻保持系中,通过PCR方法和潮霉素抗性筛选,检测该基因的导入情况,发现部分克隆植株只具有单一潮霉素抗性... 通过把雪花莲外源凝集素基因(GNA)与潮霉素抗性基因(Hyg)构建到同一表达载体上,利用基因枪转化方法,把雪花莲外源凝集素基因导入粳稻保持系中,通过PCR方法和潮霉素抗性筛选,检测该基因的导入情况,发现部分克隆植株只具有单一潮霉素抗性,需要结合抗虫性测定来确定GNA基因的导入及表达。 展开更多
关键词 雪花莲外源凝集素基因 水稻 保持系 遗传转化 潮霉素抗性基因 基因枪 PCR方法 基因表达
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将GNA基因导入宁夏枸杞及其表达的研究 被引量:2
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作者 曲玲 曹有龙 +3 位作者 侯玉霞 吴家和 罗青 田颖川 《西北林学院学报》 CSCD 北大核心 2007年第3期88-91,共4页
为了解决枸杞蚜虫侵害的难题,以宁夏枸杞主栽品种“宁杞1号”叶片为外植体,通过农杆菌介导的转化方法,将改造后的雪花莲凝集素GNA基因转入枸杞,以抗性愈伤组织诱导率作为转化效率的指标,对影响转化效率的因素进行了研究,初步建立了转化... 为了解决枸杞蚜虫侵害的难题,以宁夏枸杞主栽品种“宁杞1号”叶片为外植体,通过农杆菌介导的转化方法,将改造后的雪花莲凝集素GNA基因转入枸杞,以抗性愈伤组织诱导率作为转化效率的指标,对影响转化效率的因素进行了研究,初步建立了转化频率较高的转化系统。对获得的70个转基因株系进行PCR检测,阳性率为60%。运用Western blot杂交检测了2个转化子叶片和果实中GNA的表达,结果表明,其中一个转化株系在维管组织成分较高的叶片、青果中得到了GNA的表达,而在维管束成分极少的红果中未检测到GNA蛋白的表达。 展开更多
关键词 宁夏枸杞 雪花莲凝集素 CoYMV启动子 农杆菌介导遗传转化 Westernblot杂交
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粳稻抗虫转基因保持系的研究
7
作者 李艳萍 牛芝霞 +5 位作者 邹美智 孙海波 周维 牛景 朱祯 徐鸿林 《天津农业科学》 CAS 2004年第3期7-11,共5页
利用基因枪转化法,以优质粳稻保持系早花二B为受体,获得了含有GNA和Hyg基因的转基因植株。对T2产生的6个纯合株系进行多代潮霉素筛选、PCR分子检测及稻飞虱接种鉴定,表明标记基因在受体中稳定遗传,并高效表达,且一经纯合不再分离;而目... 利用基因枪转化法,以优质粳稻保持系早花二B为受体,获得了含有GNA和Hyg基因的转基因植株。对T2产生的6个纯合株系进行多代潮霉素筛选、PCR分子检测及稻飞虱接种鉴定,表明标记基因在受体中稳定遗传,并高效表达,且一经纯合不再分离;而目的基因表达效果不一样,只有T-10(克隆号A5-32)表达效果最好,其抗虫性达到中抗(MR)以上水平,比受体抗性(S)明显提高。将转基因保持系与不育系早花二A回交,获得的转基因不育系高抗潮霉素,且抗性也完全纯合,表明转基因保持系的抗性基因已转化到不育系中,并得到高效表达。 展开更多
关键词 粳稻 转基因保持系 雪花莲外源凝集素基因 潮霉素抗性基因 抗虫性
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国槐转雪花莲凝集素基因及抗蚜性 被引量:7
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作者 张晓英 甘敬 +2 位作者 尹伟伦 朱祯 王华芳 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第2期51-55,F0003,共6页
通过农杆菌介导法将雪花莲外源凝集素基因(gna)导入国槐叶片,获得转基因再生植株,经卡那霉素抗性筛选,PCR和Southern blot检测证实,gna基因已经整合进入国槐基因组中。凝血活性检测表明,大部分转基因植株表现出一定的凝血活性,对照未转... 通过农杆菌介导法将雪花莲外源凝集素基因(gna)导入国槐叶片,获得转基因再生植株,经卡那霉素抗性筛选,PCR和Southern blot检测证实,gna基因已经整合进入国槐基因组中。凝血活性检测表明,大部分转基因植株表现出一定的凝血活性,对照未转化植株的凝血活性很低。室内离体叶片虫试试验进一步证明,转基因植株较非转基因植株有一定的抗蚜虫能力。 展开更多
关键词 国槐 雪花莲凝集素 槐蚜 根癌土壤农杆菌 基因转化 虫口密度
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