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定量检测CCL20的竞争性内参照RT-PCR的建立及其初步应用
被引量：
3
1
作者
叶巍
邵先安
+3 位作者
郑秀娟
陈习武
储以微
熊思东
《复旦学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第3期359-364,共6页
目的 建立检测趋化因子CC亚家族配体2 0 (CCL2 0 )表达水平的内参照定量逆转录聚合酶链反应(RT PCR)方法。方法 将人CCL2 0编码基因克隆到pBs ΔANK质粒中(PAL 2 ) ,将一4 2bp的外源核苷酸片断插入到上述重组质粒的CCL2 0中间,构建内...
目的 建立检测趋化因子CC亚家族配体2 0 (CCL2 0 )表达水平的内参照定量逆转录聚合酶链反应(RT PCR)方法。方法 将人CCL2 0编码基因克隆到pBs ΔANK质粒中(PAL 2 ) ,将一4 2bp的外源核苷酸片断插入到上述重组质粒的CCL2 0中间,构建内参照质粒PAL- 2 - IS。在该定量系统中以PAL- 2 -IS和PAL- 2为模板,用CCL2 0的特异性引物扩增,根据扩增出的两个不同大小的条带的光密度扫描值对CCL2 0进行相对定量。结果 将PAL -2与已知不同系列浓度的PAL- 2 - IS以内参照竞争定量RT- PCR共扩增定量PAL- 2浓度,PAL- 2计算浓度与实际浓度无差异(P >0 .0 5 )。在同一细胞数量水平(10 5数量级) ,内参照竞争定量RT- PCR检测表明:CCL2 0在L0 2、HepG2、Hepal、Hepa3中表达水平高于Hepa2 ,而在HepG2 .2 .15中最低。结论 建立了检测CCL2 0表达水平的内参照定量RT -PCR方法,该方法可用于细胞中CCL2 0不同表达水平的检测。
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关键词
趋化因子CC亚家族配体20
内参照
定量
竞争
逆转录聚合酶链反应
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职称材料
题名
定量检测CCL20的竞争性内参照RT-PCR的建立及其初步应用
被引量：
3
1
作者
叶巍
邵先安
郑秀娟
陈习武
储以微
熊思东
机构
复旦大学上海医学院免疫学系教育部分子医学重点实验室上海基因免疫与疫苗研究中心
出处
《复旦学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第3期359-364,共6页
基金
国家自然科学基金 (3 9870 0 0 9)
国家杰出青年科学基金 (3 992 5 0 3 1)
国家教育部科学技术重点项目 (0 3 0 63 )资助
文摘
目的 建立检测趋化因子CC亚家族配体2 0 (CCL2 0 )表达水平的内参照定量逆转录聚合酶链反应(RT PCR)方法。方法 将人CCL2 0编码基因克隆到pBs ΔANK质粒中(PAL 2 ) ,将一4 2bp的外源核苷酸片断插入到上述重组质粒的CCL2 0中间,构建内参照质粒PAL- 2 - IS。在该定量系统中以PAL- 2 -IS和PAL- 2为模板,用CCL2 0的特异性引物扩增,根据扩增出的两个不同大小的条带的光密度扫描值对CCL2 0进行相对定量。结果 将PAL -2与已知不同系列浓度的PAL- 2 - IS以内参照竞争定量RT- PCR共扩增定量PAL- 2浓度,PAL- 2计算浓度与实际浓度无差异(P >0 .0 5 )。在同一细胞数量水平(10 5数量级) ,内参照竞争定量RT- PCR检测表明:CCL2 0在L0 2、HepG2、Hepal、Hepa3中表达水平高于Hepa2 ,而在HepG2 .2 .15中最低。结论 建立了检测CCL2 0表达水平的内参照定量RT -PCR方法,该方法可用于细胞中CCL2 0不同表达水平的检测。
关键词
趋化因子CC亚家族配体20
内参照
定量
竞争
逆转录聚合酶链反应
Keywords
chemikine CC subtype ligand 20
inte
r
nal s tanda
r
d
quantitative
competitive
revevse transcription-polymerase chain r eaction
分类号
R392.1 [医药卫生—免疫学]
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作者
出处
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1
定量检测CCL20的竞争性内参照RT-PCR的建立及其初步应用
叶巍
邵先安
郑秀娟
陈习武
储以微
熊思东
《复旦学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2005
3
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