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过表达miR-497通过靶向作用于神经调节蛋白受体降解蛋白1(Nrdp1)促进U87胶质瘤细胞的增殖 被引量:3
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作者 高永 孙来生 +1 位作者 吴自成 陈新成 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期1051-1055,1061,共6页
目的在U87人脑胶质瘤细胞中过表达miR-497,探讨miR-497对人脑胶质瘤细胞增殖的影响。方法包装阴性对照(NC)及miR-497慢病毒;构建U87-NC及U87-miR-497细胞系;荧光素酶报告基因实验检测miR-497在U87细胞中与神经调节蛋白受体降解蛋白1(Nrd... 目的在U87人脑胶质瘤细胞中过表达miR-497,探讨miR-497对人脑胶质瘤细胞增殖的影响。方法包装阴性对照(NC)及miR-497慢病毒;构建U87-NC及U87-miR-497细胞系;荧光素酶报告基因实验检测miR-497在U87细胞中与神经调节蛋白受体降解蛋白1(Nrdp1)的靶向关系;集落形成实验检测细胞增殖能力、流式细胞术检测细胞周期变化;Western blot法检测Nrdp1、AKT及磷酸化的AKT(p-AKT)蛋白表达水平。结果成功包装p GLV3/H1-NC及p GLV3/H1-miR-497慢病毒;构建稳定的U87-NC及U87-miR-497细胞系;过表达miR-497的U87-miR-497细胞较对照组U87-NC细胞集落形成能力增强;荧光素酶报告基因实验证实miR-497在U87细胞中靶向作用于Nrdp1;在稳定感染细胞中,过表达miR-497后Nrdp1蛋白水平降低,p-AKT蛋白水平增加,而AKT蛋白未见明显改变。结论过表达miR-497通过靶向作用于Nrdp1促进U87胶质瘤细胞的增殖。 展开更多
关键词 脑胶质瘤 增殖 U87细胞 miR-497 神经调节蛋白受体降解蛋白1(nrdp1) AKT P-AKT
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血管生成因子对心脏微血管内皮细胞神经调节蛋白1表达和分泌的影响 被引量:4
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作者 唐中力 李浪 +1 位作者 桂春 杨华峰 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 2015年第6期630-633,共4页
目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)、血管形成蛋白1(Ang-1)和Ang-2对人源性心脏微血管内皮细胞(HCMEC)的神经调节蛋白1(NRG-1)表达和NRG-1β分泌的影响。方法培养HCMEC至4~5代,在正常培养条件下,将其分为正常组、VEGF处理组、An... 目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)、血管形成蛋白1(Ang-1)和Ang-2对人源性心脏微血管内皮细胞(HCMEC)的神经调节蛋白1(NRG-1)表达和NRG-1β分泌的影响。方法培养HCMEC至4~5代,在正常培养条件下,将其分为正常组、VEGF处理组、Ang-1处理组和Ang-2处理组,与HCMEC共孵育24h,收集细胞和培养液,用蛋白印迹法和细胞酶联免疫吸附法分别检测NRG-1蛋白表达和NRG-1β分泌。蛋白印迹法检测酪氨酸激酶受体(ErbB2、ErbB3和ErbB4)蛋白表达。结果ErbB2、ErbB3和ErbB4均表达于HCMEC。与正常组比较,VEGF处理组和Ang-1处理组NRG-1[(1.44±0.05)、(1.18±0.04)vs(1.05±0.06)]表达和NRG-1β[(534.07±6.89)ng/L、(505.19±22.82)ng/L vs(380.71±14.96)ng/L]分泌显著增加,差异有统计学意义(P〈0.05),而Ang-2处理组NRG-1表达和NRG-1β分泌显著降低(P〈0.05)。结论VEGF和Ang-1显著增加HCMEC的NRG-1表达和NRG-1β分泌,Ang-2显著减少HCMEC的NRG-1表达和NRG-1β分泌。 展开更多
关键词 血管内皮生长因子类 内皮细胞 神经调节蛋白1 受体蛋白质酪氨酸激酶类
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神经调节素受体降解蛋白1调控巨噬细胞极化对成纤维细胞功能的影响 被引量:2
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作者 贾康 张志 +5 位作者 刘昌玲 曹雯娟 刘志河 陈宾 汤文彬 李孝建 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1003-1009,共7页
目的探讨E3连接酶神经调节素受体降解蛋白1(neuregulin receptor degradation protein 1,Nrdp1)调控巨噬细胞极化对成纤维细胞功能的影响。方法分别以内毒素(lipopolysaccharide, LPS)和γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)混合剂、白细胞介... 目的探讨E3连接酶神经调节素受体降解蛋白1(neuregulin receptor degradation protein 1,Nrdp1)调控巨噬细胞极化对成纤维细胞功能的影响。方法分别以内毒素(lipopolysaccharide, LPS)和γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)混合剂、白细胞介素13(interleukin-13,IL-13)诱导小鼠原代腹腔巨噬细胞为M1型巨噬细胞(简称M1)和M2型巨噬细胞(简称M2);流式细胞仪、Western blot分别检测M1表面标记蛋白CD11c、特异性分泌物——诱导型一氧化氮合酶(induciblenitricoxide synthase, iNOS)及M2表面标记蛋白CD206、特异性分泌物——精氨酸酶1(arginine1,Arg1)的表达。转染siRNA-Nrdp1 24 h, Western blot检测Nrdp1表达;建立巨噬细胞与成纤维细胞的Transwell共培养体系,按添加的诱导剂不同,分为LPS组(LPS及IFN-γ共同诱导)、LPS-NC组(siRNA阴性Nrdp1无关序列对照组)、LPS-siRNA-Nrdp1组(转染siRNA-Nrdp1质粒)及对应的IL-13组、IL-13-NC组、IL-13-siRNA-Nrdp1组;培养8、12、24 h, CCK-8检测成纤维细胞增殖情况,ELISA检测转化生长因子β1(transforming growth factor-beta1, TGF-β1)、Ⅰ型前胶原含量。对数据行析因设计方差分析、Bonferroni法检验。结果 LPS诱导的巨噬细胞中,M1表面标记蛋白CD11c阳性细胞比例显著高于对照组(P<0.05);IL-13诱导的巨噬细胞中,M2表面标记蛋白CD206阳性细胞比例显著高于未诱导组(P<0.05);LPS组M1特异性分泌物iNOS表达量显著高于对照组(P<0.01)及IL-13组(P<0.01);IL-13组M2型特异性分泌物Arg1显著高于对照组及LPS组(P<0.01)。siRNA-Nrdp1干扰巨噬细胞24 h后,Western blot检测结果显示,干扰组(siRNA-Nrdp1组)Nrdp1的蛋白表达量明显低于空白对照组(P<0.01)及阴性对照组(P<0.01)。共培养24 h后,CCK-8检测结果显示,IL-13-siRNA-Nrdp1组成纤维细胞增殖数量明显低于IL-13组及IL-13-NC组(P<0.01);ELISA检测结果显示,IL-13-siRNA-Nrdp1组TGF-β1含量明显低于IL-13组及IL-13-NC组(P<0.01),IL-13-siRNA-Nrdp1组Ⅰ型前胶原含量明显低于IL-13组(P<0.01)。结论通过siRNA干扰Nrdp1合成,影响巨噬细胞向M2型极化,可抑制M2型巨噬细胞与成纤维细胞共培养体系中成纤维细胞的增殖,减少共培养体系中成纤维细胞TGF-β1及Ⅰ型前胶原的分泌。 展开更多
关键词 巨噬细胞 极化 神经调节素受体降解蛋白1 转化生长因子Β1 Ⅰ型前胶原
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脑内β淀粉样蛋白水平的调节 被引量:3
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作者 王颖玉 吴晶 +2 位作者 洪浩 季晖 吴玉林 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2009年第6期711-715,共5页
β淀粉样蛋白(βamyloid protein,Aβ)是体内重要生物活性物质,主要包括Aβ40和Aβ42,它们在体内的利与害取决于其浓度高低。生理条件下脑内Aβ通过两个平衡维持在一定水平上,第一个平衡是Aβ的生成和降解,β分泌酶和γ分泌酶参与Aβ的... β淀粉样蛋白(βamyloid protein,Aβ)是体内重要生物活性物质,主要包括Aβ40和Aβ42,它们在体内的利与害取决于其浓度高低。生理条件下脑内Aβ通过两个平衡维持在一定水平上,第一个平衡是Aβ的生成和降解,β分泌酶和γ分泌酶参与Aβ的生成,而脑啡肽酶和胰岛素降解酶参与Aβ的降解;第二个平衡是Aβ跨越血脑屏障的内向转运和外向转运,高级糖基化终产物受体(RAGE)是血脑屏障上Aβ内向转运体,而低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP1)是血脑屏障上Aβ外向转运体。如果这两个平衡任何一个被破坏,将会导致脑内Aβ水平异常升高,继而Aβ聚集和沉淀,形成老年斑。本文综述生理条件下脑内Aβ水平的调节以及降低病理状态下脑内Aβ水平的策略。 展开更多
关键词 Β分泌酶 Γ分泌酶 脑啡肽酶 胰岛素降解酶 高级糖基化终产物受体(RAGE) 低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP1)
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六味地黄丸和通络救脑滴丸对2种痴呆模型小鼠脑组织Aβ降解的影响 被引量:1
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作者 贾亚泉 宋军营 +6 位作者 曾华辉 谢治深 张紫娟 袁永 原野 张振强 狄波 《世界中医药》 CAS 2023年第14期1966-1973,共8页
目的:分析六味地黄丸和通络救脑滴丸对“肾精不足”和“毒损脑络”2种不同痴呆症模型动物脑组织Aβ降解的影响。方法:通过SAMP8小鼠和在SAMR1小鼠双侧海马区注射Aβ_(1-40)分别复制痴呆动物模型,采用水迷宫测定行为功能学,免疫组织化学... 目的:分析六味地黄丸和通络救脑滴丸对“肾精不足”和“毒损脑络”2种不同痴呆症模型动物脑组织Aβ降解的影响。方法:通过SAMP8小鼠和在SAMR1小鼠双侧海马区注射Aβ_(1-40)分别复制痴呆动物模型,采用水迷宫测定行为功能学,免疫组织化学染色(IHC)法检测海马和皮层中Aβ的表达,Western Blotting法检测海马和皮层中胰岛素降解酶(IDE)、低密度脂蛋白相关蛋白1(LRP1)和晚期糖基化终末产物受体(RAGE)蛋白的表达。结果:2种痴呆模型在游速、避暗错误次数、错误区时间、脑组织海马和皮层中IDE、RAGE和海马中LRP1等蛋白的表达,差异均有统计学意义(均P<0.05);与双侧海马区注射Aβ_(1-40)模型小鼠比较,SAMP8模型小鼠的游速和避暗错误次数下降,脑组织中RAGE表达升高,IDE和LRP1表达降低;通络救脑滴丸对改善双侧海马注射Aβ_(1-40)模型小鼠的避暗潜伏期、脑组织海马区IDE和RAGE的表达水平作用明显;六味地黄丸对改善SAMP8模型小鼠水迷宫寻台成功率、避暗潜伏期、脑组织皮层和海马区IDE表达和海马Aβ的表达水平作用明显。结论:六味地黄丸可改善“肾精不足”证痴呆模型小鼠脑组织Aβ清除障碍,通络救脑滴丸可改善“毒损脑络”证痴呆模型小鼠脑组织Aβ清除障碍。 展开更多
关键词 痴呆 六味地黄丸 通络救脑滴丸 β-淀粉样蛋白 胰岛素降解酶 低密度脂蛋白相关蛋白1 晚期糖基化终末产物受体
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麻醉和手术对老年大鼠脑内淀粉样β蛋白转运相关受体及降解酶表达的影响
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作者 刘永哲 高明龙 +2 位作者 马丽 潘宁玲 马亚群 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期720-724,共5页
目的探讨老年大鼠术后脑内淀粉样β蛋白(Aβ)转运相关受体及降解酶表达的变化。方法健康SD大鼠100只,按鼠龄随机分为老年对照组(n=10)、老年手术组(n=40)、青年对照组(n=10)和青年手术组(n=40)。对照组不接受麻醉和手术。手术组在2%七... 目的探讨老年大鼠术后脑内淀粉样β蛋白(Aβ)转运相关受体及降解酶表达的变化。方法健康SD大鼠100只,按鼠龄随机分为老年对照组(n=10)、老年手术组(n=40)、青年对照组(n=10)和青年手术组(n=40)。对照组不接受麻醉和手术。手术组在2%七氟醚麻醉下接受肝叶切除术后继续麻醉2h,分别于术后1、3、7、15d处死大鼠取材,应用免疫组化技术分析海马内低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP-1)、高级糖基化终产物受体(RAGE)和大脑皮质内胰岛素降解酶(IDE)、中性内肽酶(NEP)的表达水平,应用定量RT-PCR技术测定海马内IDE mRNA和NEP mRNA的表达水平。结果与老年对照组比较,老年手术组大鼠术后各时点LRP-1、NEP和NEP mRNA表达均明显降低,RAGE表达明显升高,术后1d和15d时IDE表达明显降低,3d和7d时IDE mRNA表达明显降低,15d时IDE mRNA表达明显升高。与青年对照组比较,青年手术组大鼠术后各时点IDE mRNA表达明显降低,RAGE和NEP mRNA表达明显升高,术后3d、7d和15d时LRP-1表达明显降低,术后1d、3d时IDE表达明显降低,15d时IDE表达明显升高,术后1d时NEP表达明显升高,3d、7d和15d时NEP表达明显降低。结论麻醉和手术对老年大鼠脑内Aβ的向外转运能力和酶降解能力均有明显抑制作用,而对青年大鼠的影响相对较轻。 展开更多
关键词 淀粉样Β蛋白 血脑屏障 LDL受体相关蛋白1 糖基化终产物 高级 Aβ降解酶
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