保定地区猫泛白细胞减少症病毒VP2基因的遗传进化分析

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作者 邹畅 胡月 +1 位作者 李海花 乔家运 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第2期823-831,共9页

[目的]了解保定地区猫泛白细胞减少症病毒(Feline panleukopenia virus,FPV)的流行情况以及其VP2基因遗传变异情况。[方法]从保定市多家宠物医院随机采集20例疑似患猫泛白细胞减少症(feline panleukopenia,FP)的猫粪便和鼻腔分泌物样本... [目的]了解保定地区猫泛白细胞减少症病毒(Feline panleukopenia virus,FPV)的流行情况以及其VP2基因遗传变异情况。[方法]从保定市多家宠物医院随机采集20例疑似患猫泛白细胞减少症(feline panleukopenia,FP)的猫粪便和鼻腔分泌物样本,利用PCR扩增、测序获得FPV VP2全基因序列并对其进行分析,利用Mega 7.0软件构建系统进化树,采用MegAlign软件对其核苷酸序列相似性及关键氨基变异位点进行分析。[结果]20例患猫粪便样品中扩增出16条长度为1755 bp的FPV VP2特异性条带,序列分析表明,FPV VP2基因全长为1755 bp,分离获得的FPV均属于G1分型,与日本分离株V211(登录号:AB054227)亲缘关系较近,与FPV标准株CU-4(登录号:M38246)亲缘关系较远,16条FPV VP2基因之间核苷酸序列相似性为99.1%~100%。16条VP2蛋白序列的13个关键氨基酸位点均相同,与FPV标准株CU-4相比,在第101位氨基酸处出现I-T突变;与5个参考毒株CPV VP2的关键氨基酸位点进行比对,仅第101位氨基酸位点相同,其他位点均存在不同程度变异。[结论]保定区主要流行G1型FPV,且其VP2基因遗传稳定性较强。研究结果丰富了FPV的流行病学资料,为保定地区FPV预防提供了理论依据。 展开更多

关键词 猫泛白细胞减少症病毒(FPV) vp2基因 遗传进化 氨基酸位点

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辽宁沈阳株猫泛白细胞减少症病毒VP2基因扩增及生物信息学分析

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作者 刘琪 刘正伟 +4 位作者 梁琳 张利 郝春晖 李玥 赵福庆 《中国畜牧兽医》 CSCD 北大核心 2024年第1期23-32,共10页

【目的】通过生物信息学方法分析1株2022年辽宁沈阳地区猫泛白细胞减少症病毒(Feline panleukopenia virus, FPV)LN3株VP2蛋白的分子特征。【方法】利用FPV胶体金试纸条对临床上表现呕吐、腹泻等症状的患病猫粪便进行检测,提取该病猫粪... 【目的】通过生物信息学方法分析1株2022年辽宁沈阳地区猫泛白细胞减少症病毒(Feline panleukopenia virus, FPV)LN3株VP2蛋白的分子特征。【方法】利用FPV胶体金试纸条对临床上表现呕吐、腹泻等症状的患病猫粪便进行检测,提取该病猫粪便的病毒DNA进行FPV VP2基因PCR扩增及测序,使用Seqman软件对序列进行拼接。将所获序列与NCBI数据库中FPV和犬细小病毒(Canine parvovirus, CPV)的VP2基因进行相似性比对及遗传进化分析。使用生物信息学软件对该毒株VP2蛋白进行预测,包括理化性质、亲/疏水性、跨膜区、糖基化位点、亚细胞定位、二级结构、三级结构等。【结果】FPV LN3株VP2基因全长1 755 bp,编码584个氨基酸;与GenBank上登录的15株FPV同属一个大分支,相似性为98.9%~99.7%;与CPV处于不同分支上。生物信息学软件预测显示,FPV LN3株VP2蛋白为亲水性蛋白,无跨膜结构;含有7个潜在N-糖基化位点、86个O-糖基化位点和50个磷酸化位点;VP2蛋白在细胞质、细胞核、线粒体中的可能性分别为43.5%、34.8%和21.7%;VP2蛋白二级结构中无规则卷曲、α-螺旋、延伸链、β-转角分别占61.82%、8.90%、24.32%及4.97%,三级结构预测结果与其一致;VP2蛋白共有20个抗原表位。【结论】VP2是FPV遗传变异的关键基因,FPV LN3株VP2蛋白属于亲水性、非跨膜稳定蛋白,共存在20个抗原表位。试验结果为进一步研究FPV VP2蛋白功能及研发新型疫苗提供理论依据。 展开更多

关键词 猫泛白细胞减少症病毒 vp2基因 生物信息学 蛋白结构

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犬细小病毒VP2蛋白的原核表达与纯化 被引量：8

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作者 龙丹丹 嵇辛勤 +5 位作者 段志强 阮涌 陈强 雷云 万彪 胡焱 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第3期643-649,共7页

为了研究犬细小病毒(canine parovirus,CPV)VP2蛋白的结构和功能,本试验对CPV VP2蛋白进行表达和纯化。采用大肠杆菌表达外源蛋白的方法,将CPVVP2基因插入原核表达载体pET-32a(+)中构建重组原核表达载体pET-VP2,转化至大肠杆菌BL21(DE3... 为了研究犬细小病毒(canine parovirus,CPV)VP2蛋白的结构和功能,本试验对CPV VP2蛋白进行表达和纯化。采用大肠杆菌表达外源蛋白的方法,将CPVVP2基因插入原核表达载体pET-32a(+)中构建重组原核表达载体pET-VP2,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,在不同IPTG浓度、诱导温度和诱导时间条件下进行原核表达,确定最佳诱导条件。最佳条件下的诱导产物经超声破碎离心后,利用镍柱对重组蛋白进行纯化并用SDS-PAGE和Western blotting进行双重鉴定。结果显示,重组质粒pET-VP2经双酶切鉴定分别获得大小为5 900bp左右的载体条带和1 755bp左右的目的基因条带,成功构建了pET-VP2重组质粒;重组VP2蛋白的分子质量约为64ku,与预期大小一致,且在37℃、1.0mmol/L IPTG、诱导5h条件下表达量最高,条带最亮;蛋白超声破碎后经SDS-PAGE发现,只在沉淀中出现了目的条带,而上清中并未出现相应条带,说明重组蛋白均以包涵体的形式存在;纯化后获得的重组蛋白,经SDS-PAGE和Western blotting双重鉴定,均在64ku处出现条带,说明纯化后的蛋白为重组蛋白pET-VP2。本试验通过对CPV VP2蛋白的原核表达及纯化成功获得了大量纯度较高的CPV VP2蛋白,为今后制备CPV VP2蛋白多克隆抗体及进一步研究该蛋白在对治疗犬细小病毒病中的临床应用价值提供了基础理论依据。 展开更多

关键词 犬细小病毒(CPV) vp2基因 原核表达 纯化

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水貂肠炎细小病毒结构蛋白VP2基因的克隆和序列分析 被引量：5

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作者 闫喜军 张海玲 +5 位作者 柴秀丽 吴威 易立 王凤雪 邵西群 罗国良 《特产研究》 2007年第4期1-3,6,共4页

对水貂肠炎细小病毒SMPV-11株结构蛋白VP2基因进行扩增,获得了基因序列全长为1755bp的SMPV-11株VP2基因,其编码584个氨基酸;应用DNAStar分析软件对该序列进行同源性分析发现,SMPV-11株VP2基因与其他6株水貂肠炎细小病毒株核苷酸和氨基... 对水貂肠炎细小病毒SMPV-11株结构蛋白VP2基因进行扩增,获得了基因序列全长为1755bp的SMPV-11株VP2基因,其编码584个氨基酸;应用DNAStar分析软件对该序列进行同源性分析发现,SMPV-11株VP2基因与其他6株水貂肠炎细小病毒株核苷酸和氨基酸均有较高的同源性,分别为99.2%～99.4%和98.6%～99.1%,与猫泛白细胞减少症病毒标准株CU-4株同源性为99.3%和99.1%,系统发生树分析表明它们属于同一个分支。本研究为水貂肠炎细小病毒分子流行病学调查和新型疫苗的研究奠定基础。 展开更多

关键词 水貂肠炎细小病毒 vp2基因 序列分析

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IBDV细胞适应株的驯化及其VP2基因的分子特征分析 被引量：1

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作者 王洁琼 赵玉杰 +4 位作者 周薇帆 周云飞 陈田田 刘建勋 李新生 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2018年第8期1-8,共8页

【目的】对从河南某地区发病鸡群中分离出的1株IBDV进行驯化使适应永生细胞DF-1,并对其VP2基因进行克隆和生物信息学分析,对IBDV分离株及其细胞适应株的VP2高变区及七肽区进行比较。【方法】测定IBDV分离株X1对10日龄SPF鸡胚的半数致死... 【目的】对从河南某地区发病鸡群中分离出的1株IBDV进行驯化使适应永生细胞DF-1,并对其VP2基因进行克隆和生物信息学分析,对IBDV分离株及其细胞适应株的VP2高变区及七肽区进行比较。【方法】测定IBDV分离株X1对10日龄SPF鸡胚的半数致死量(ELD50);通过SPF鸡胚-CEF-DF-1途径对X1进行驯化,使其适应永生细胞DF-1;根据IBDVVP2基因序列设计1对特异性引物,应用RT-PCR技术克隆IBDV分离株和细胞适应株的VP2基因并测序,将其与参考毒株进行同源性和进化树分析,同时对二者在VP2高变区及七肽区的推导氨基酸序列进行对比分析。【结果】IBDV分离株X1对10日龄SPF鸡胚的ELD_(50)为10-8 mL^(-1),经驯化获得了细胞适应株C1。对2株病毒的VP2基因进行克隆并鉴定,测序分析得IBDV X1株在第222,256,294和299位上具有A、I、I、S4个特征性氨基酸,与IBDV超强毒株(vvIBDV)HK46 VP2基因氨基酸序列的同源性高达99.3%,确定X1株为IBDV超强毒株。同源性及进化树分析结果显示,C1株与IBDV减毒株CEF94亲缘关系较近,同源性较高,为99.6%,确定C1株为IBDV减毒株。在VP2高变区及七肽区推导氨基酸比对中显示,C1株第330位精氨酸R取代了X1株在330位的丝氨酸S;第222位氨基酸由A变成P;决定病毒毒力的位点第256和284位分别由I、A变为V和T。【结论】成功驯化了1株vvIBDV使其适应细胞,初步揭示vvIBDV在适应细胞、从超强毒力向弱毒力转化的过程中,VP2高变区及七肽区氨基酸序列有明显变化。 展开更多

关键词 传染性法氏囊病毒 vp2基因 基因克隆 序列分析

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鸡传染性法氏囊病病毒BJ-10株VP2基因的克隆及原核表达 被引量：1

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作者 王俊全 王韦华 刘桂梅 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2013年第9期38-42,共5页

【目的】克隆鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)BJ-10株VP2基因,构建其原核表达载体,并在大肠埃希菌中进行高效表达。【方法】根据IBDVVP2基因序列设计1对特异性引物,应用RT-PCR技术克隆IBDV BJ-10株VP2基因;将目的基因插入pMD18-T连接载体,... 【目的】克隆鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)BJ-10株VP2基因,构建其原核表达载体,并在大肠埃希菌中进行高效表达。【方法】根据IBDVVP2基因序列设计1对特异性引物,应用RT-PCR技术克隆IBDV BJ-10株VP2基因;将目的基因插入pMD18-T连接载体,筛选出阳性重组质粒;将该质粒克隆至原核表达载体pET-32α中,转化入JM109,经IPTG诱导表达,对产物进行SDS-PAGE电泳分析,确定IPTG的最佳诱导表达时间和浓度。【结果】克隆到了全长1 356bp的IBDV BJ-10株VP2基因;PCR、酶切鉴定分析表明,成功构建了重组质粒pET-32α-VP2;SDS-PAGE电泳分析表明,在宿主菌JM109中成功表达了约为60ku的VP2蛋白;IPTG诱导表达时间以4.5h为宜,诱导最佳浓度为0.8mmol/L。【结论】成功克隆了IBDV BJ-10株VP2基因,并在大肠埃希菌中表达了VP2蛋白。 展开更多

关键词 鸡传染性法氏囊病病毒 vp2基因 基因克隆 原核表达载体

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传染性法氏囊病病毒VP_2基因真核细胞表达载体的构建及免疫应用研究 被引量：3

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作者 陈创夫 乔军 +2 位作者 王金富 田晶华 张高轩 《动物科学与动物医学》 2001年第6期29-32,共4页

应用 DNA重组技术将含有 IBDV保护性抗原 VP2 质粒 ,以 Eco RI、xho I酶切 ,将酶切得到的 VP2 基因移入到载体 pc DNA3 CMV启动子下游 ,得到含有 IBDV VP2 基因的真核表达载体 pc D-VP2 基因疫苗。pc DVP2 体外转染细胞能正确表达目的... 应用 DNA重组技术将含有 IBDV保护性抗原 VP2 质粒 ,以 Eco RI、xho I酶切 ,将酶切得到的 VP2 基因移入到载体 pc DNA3 CMV启动子下游 ,得到含有 IBDV VP2 基因的真核表达载体 pc D-VP2 基因疫苗。pc DVP2 体外转染细胞能正确表达目的蛋白。免疫雏鸡后 2 0 d,在体内可检测到特异性抗体。 展开更多

关键词 vp2基因 基因疫苗 免疫 真核细胞表达载体 鸡病 传染性法氏囊病病毒

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人类博卡病毒结构蛋白基因VP2的克隆与表达 被引量：1

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作者 陈莹 张丹 +1 位作者 李京京 李毅 《化学与生物工程》 CAS 2010年第3期67-69,共3页

采用PCR方法扩增出人类博卡病毒结构蛋白基因VP2,通过双酶切、连接、转化等方法将VP2基因克隆到原核表达载体pMAL-c2x上,构建重组质粒pMAL-c2x-VP2,通过双酶切检测重组质粒构建成功;用0.8 mmol.L-1IPTG诱导融合蛋白表达,经SDS-PAGE检测... 采用PCR方法扩增出人类博卡病毒结构蛋白基因VP2,通过双酶切、连接、转化等方法将VP2基因克隆到原核表达载体pMAL-c2x上,构建重组质粒pMAL-c2x-VP2,通过双酶切检测重组质粒构建成功;用0.8 mmol.L-1IPTG诱导融合蛋白表达,经SDS-PAGE检测、Western Blot分析,证明目的蛋白得到了表达。可为目的蛋白的纯化及结构和功能的研究、相应抗体的制备打下坚实的基础。 展开更多

关键词 人类博卡病毒 结构蛋白基因vp2 克隆 表达

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猫细小病毒洛阳分离株VP2蛋白原核表达及多克隆抗体制备 被引量：4

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作者 王文婕 茹鹏辉 +5 位作者 郁川 杜付熙 陈松彪 尚珂 张春杰 程相朝 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期1511-1521,共11页

【目的】研究旨在对猫细小病毒(Feline panleukopenia virus,FPV)洛阳分离株VP2蛋白进行原核表达和鼠源多克隆抗体制备。【方法】根据已公布的FPV VP 2基因序列(GenBank登录号:EU018143.1)设计1对特异性引物,以洛阳地区7例疑似FPV感染... 【目的】研究旨在对猫细小病毒(Feline panleukopenia virus,FPV)洛阳分离株VP2蛋白进行原核表达和鼠源多克隆抗体制备。【方法】根据已公布的FPV VP 2基因序列(GenBank登录号:EU018143.1)设计1对特异性引物,以洛阳地区7例疑似FPV感染猫粪便为样本提取DNA,对VP 2基因进行PCR鉴定及测序,利用Mega 11.0软件对VP 2基因进行遗传进化分析;应用在线软件预测分离株VP2蛋白结构特征并找出优势抗原表位,克隆VP2优势抗原(sVP2)并连接pET-32a(+)载体,构建pET-32a-sVP2重组质粒,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞后进行诱导表达,对重组蛋白表达条件进行优化,并使用SDS-PAGE与Western blotting方法进行鉴定;将pET-32a-sVP2用镍柱亲和层析蛋白纯化后免疫BABL/c小鼠,制备多克隆抗体,采用ELISA法检测抗体效价。【结果】分离得到1株FPV,命名为LY-1。遗传进化分析发现,该毒株属于FPV-G2亚群,与北京株(GenBank登录号:MT270581)亲缘关系最近。生物信息学分析显示,VP2属于稳定膜内蛋白,无信号肽与跨膜区,在N-端具有丰富的B细胞抗原表位(1―800 bp,sVP2)。试验成功构建pET-32a-sVP2重组质粒并表达,SDS-PAGE显示重组蛋白分子质量约50 ku,主要以包涵体形式存在,在30℃、1 mmol/L IPTG诱导6 h蛋白表达量最佳;Western blotting结果表明,重组蛋白能与鼠抗His单克隆抗体发生特异性反应;ELISA结果表明,该重组蛋白抗体效价为1∶128000,能够较好地识别免疫原sVP2和原核表达VP2蛋白并发生特异性反应。【结论】本试验克隆获得FPV sVP2片段,并制备多克隆抗体,为进一步研究VP2在FPV复制和致病过程中的作用及建立诊断FPV方法提供参考。 展开更多

关键词 猫细小病毒(FPV) 洛阳分离株 vp 2基因 原核表达 多克隆抗体

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广州地区犬细小病毒VP2基因的序列分析 被引量：4

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作者 许冬蕾 任常宝 +5 位作者 张晓战 陈叶 余文兰 葛曾旭 陈瑞爱 唐兆新 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第12期38-42,共5页

犬细小病毒病是一种高度接触性传染病,临床上以急性出血性肠炎和心肌炎为特征。为研究广州地区犬细小病毒病的流行亚型,本试验采集2011—2012年间疑似病犬粪便,进行犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)分离鉴定,提取病毒基因组进行VP2基... 犬细小病毒病是一种高度接触性传染病,临床上以急性出血性肠炎和心肌炎为特征。为研究广州地区犬细小病毒病的流行亚型,本试验采集2011—2012年间疑似病犬粪便,进行犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)分离鉴定,提取病毒基因组进行VP2基因扩增和序列分析,与GenBank中登录的参考毒株进行比对,结果发现,分离的8株CPV中SCAU-5为CPV-2b亚型,其余为CPV-2a亚型。结果表明,2011—2012年间广州地区的流行毒株以CPV-2a亚型为主。 展开更多

关键词 犬细小病毒 vp2基因 序列分析 广州

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共表达鸡传染性法氏囊病病毒LX株VP2基因及鸡新城疫病毒PX02/3株F基因的重组火鸡疱疹病毒的构建 被引量：5

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作者 王子书 王萍 +3 位作者 许健 杨大为 李永清 江波 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2020年第11期26-30,I0004,I0005,共7页

为构建表达传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP 2基因和鸡新城疫病毒(NDV)F基因的重组火鸡疱疹病毒(HVT)。本研究利用基因重组技术,在HVT基因组的非必需区UL45-46插入CMV启动子调控下的IBDV LX株的VP 2基因表达盒,然后在HVT基因组的非必需区US1... 为构建表达传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP 2基因和鸡新城疫病毒(NDV)F基因的重组火鸡疱疹病毒(HVT)。本研究利用基因重组技术,在HVT基因组的非必需区UL45-46插入CMV启动子调控下的IBDV LX株的VP 2基因表达盒,然后在HVT基因组的非必需区US1-10插入pec启动子调控下的NDV PX02/3株的F基因表达盒,成功构建并拯救出同时表达IBDV和NDV保护性抗原基因的重组HVT病毒(rHVT-VP2-F)。经PCR、Western Blot、IFA鉴定,重组病毒能稳定表达具有生物学活性的VP2蛋白和F蛋白。本研究为研制rHVT-VP2-F活载体疫苗提供了科学依据。 展开更多

关键词 新城疫病毒 传染性法氏囊病病毒 重组火鸡疱疹病毒 F基因 vp 2基因

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14株北京地区犬细小病毒分离毒株的VP2、NS1基因序列分析 被引量：8

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作者 李少晗 由欣月 +4 位作者 范君文 徐一 郝雲峰 崔尚金 秦彤 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期262-267,共6页

从北京地区疑似细小病毒感染的犬粪拭子中成功分离鉴定出14株犬细小病毒(CPV)毒株,并对其完整的VP2和NS1基因进行了序列分析。结果表明,鉴定到的14株CPV毒株中,7株为New CPV-2a型,7株为CPV-2c型。此外,NS1的19、33、293、588、624和656... 从北京地区疑似细小病毒感染的犬粪拭子中成功分离鉴定出14株犬细小病毒(CPV)毒株,并对其完整的VP2和NS1基因进行了序列分析。结果表明,鉴定到的14株CPV毒株中,7株为New CPV-2a型,7株为CPV-2c型。此外,NS1的19、33、293、588、624和656位氨基酸以及VP2的13、574位氨基酸为新鉴定的氨基酸突变位点。基于VP2、NS1基因的系统进化分析表明,大部分的New CPV-2a型和CPV-2c型毒株与广西南宁和吉林长春地区的分离毒株亲缘关系密切,说明本次分离毒株与广西或吉林地区分离毒株具有相同的起源。本研究为更好地开展犬细小病毒流行病学调查提供了有益借鉴,也为深入研究犬细小病毒变异和传播的分子机制奠定了基础。 展开更多

关键词 犬细小病毒 分离鉴定 vp2基因 NS1基因 进化分析

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传染性法氏囊病病毒VP2基因在昆虫细胞中的表达 被引量：1

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作者 杨凤 黎先伟 +4 位作者 孙敏华 严福强 韦庆兰 向斌 任涛 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第9期65-69,共5页

本研究将鸡传染性法氏囊病病毒超强毒（very virulent infectious bursal disease virus,vvIBDV）JM-1/10株VP2基因克隆至pcDNA-3.1（＋）启动子CMV之后,随后将CMV-VP2基因序列一同克隆入杆状病毒表达系统的质粒 pFastBacTM Daul中构建... 本研究将鸡传染性法氏囊病病毒超强毒（very virulent infectious bursal disease virus,vvIBDV）JM-1/10株VP2基因克隆至pcDNA-3.1（＋）启动子CMV之后,随后将CMV-VP2基因序列一同克隆入杆状病毒表达系统的质粒 pFastBacTM Daul中构建了pFast-CMV-VP2。将pFast-CMV-VP2转化Escherichia coli DH10Bac感受态细胞,筛选出重组质粒Bacmid-CMV-VP2。用 Bacmid-CMV-VP2转染Sf9昆虫细胞,获得了重组杆状病毒vBac-CMV-VP2。将该重组杆状病毒转导BHK-21细胞,48~72 h后经间接免疫荧光试验（IFA）检测到VP2蛋白具有特异性荧光;样品经Western blotting分析,结果显示目的蛋白得到表达。结果表明,本试验制备的重组 vBac-CMV-VP2 既能在昆虫细胞中表达,也可在哺乳动物细胞中表达。 展开更多

关键词 传染性法氏囊病病毒 vp2基因 昆虫表达载体

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鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白与幽门螺杆菌铁蛋白基因融合PCR扩增及其真核表达载体的构建 被引量：2

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作者 朱艳平 何勇 +9 位作者 刘佳 邢瑞林 常乐凯 李润芷 岳锋 吴玉苹 李鹏 孙国鹏 张艳芳 王选年 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第10期2860-2866,共7页

为获得高活性的鸡传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)VP2蛋白的重组蛋白,本试验对IBDV VP2蛋白基因与能进行自我组装的幽门螺杆菌(Hp)铁蛋白基因进行融合PCR扩增,获得其融合基因。根据成熟VP2蛋白基因cDNA序列... 为获得高活性的鸡传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)VP2蛋白的重组蛋白,本试验对IBDV VP2蛋白基因与能进行自我组装的幽门螺杆菌(Hp)铁蛋白基因进行融合PCR扩增,获得其融合基因。根据成熟VP2蛋白基因cDNA序列和Hp铁蛋白基因的碱基序列,设计合成2对引物,应用融合PCR技术扩增获得融合基因片段VP2-Fe。将目的基因克隆至pMD18-T载体筛选阳性重组克隆质粒,然后将目的基因亚克隆至真核表达载体pPICZaC后转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选获得阳性表达质粒。结果显示,通过两轮PCR扩增出长度为1 824 bp的融合基因VP2-Fe,亚克隆至pMD18-T载体,测序结果显示,融合基因无任何碱基的突变,筛选的阳性质粒命名为pMD-VP2-Fe。双酶切回收目的基因大小为1 824 bp,亚克隆至pPICZaC,PCR和双酶切鉴定出现预期大小的片段,将获得的阳性表达质粒命名为pPICZaC-VP2-Fe。本研究为后期利用真核表达载体获得其融合重组蛋白奠定基础。 展开更多

关键词 传染性法氏囊病病毒(IBDV) vp 2基因 幽门螺杆菌 铁蛋白 融合PCR

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rhGM-CSF对VP-16诱导的HL-60细胞凋亡的影响

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作者 刘复强 靳新强 +5 位作者 杨敏 杨凌 王津津 吴轶苹 翟艳苓 刘元波 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2000年第4期275-279,共5页

为探讨rhGM CSF对VP 16诱导的HL 60细胞凋亡的影响 ,我们观察了预先应用rhGM CSF孵育的HL 60细胞由VP 16诱导的凋亡过程及凋亡相关基因bcl 2和fas的表达变化。应用光学显微镜和电子显微镜观察细胞形态和超微结构的变化 ,凝胶电泳检测DN... 为探讨rhGM CSF对VP 16诱导的HL 60细胞凋亡的影响 ,我们观察了预先应用rhGM CSF孵育的HL 60细胞由VP 16诱导的凋亡过程及凋亡相关基因bcl 2和fas的表达变化。应用光学显微镜和电子显微镜观察细胞形态和超微结构的变化 ,凝胶电泳检测DNA的碎片 ,流式细胞术检测细胞凋亡率、bcl 2和fas的表达。实验结果显示 ,rhGM CSF可抑制VP 16诱导的HL 60细胞的凋亡 ,它加强了VP 16对bcl 2表达的下调作用 ,抑制了VP 16对fas表达的上调作用。由此推测 ,rhGM CSF可能是通过下调fas表达降低HL 60细胞对VP 展开更多

关键词 RHGM-CSF 细胞凋亡 足叶乙甙 HL-60细胞系

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貉细小病毒LN10-1株分离鉴定及其免疫原性研究 被引量：11

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作者 康洪涛 赵建军 +4 位作者 柴秀丽 张蕾 胡博 闫喜军 吴威 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期956-964,共9页

为研制貉细小病毒性肠炎疫苗,筛选出针对貉细小病毒性肠炎免疫原性好、安全高效的疫苗备选株,应用CRFK细胞从辽宁省发病貉的粪便中分离病毒,并通过形态学、血清学、分子生物学、动物回归及免疫接种等方法对分离株进行鉴定。鉴定结果表... 为研制貉细小病毒性肠炎疫苗,筛选出针对貉细小病毒性肠炎免疫原性好、安全高效的疫苗备选株,应用CRFK细胞从辽宁省发病貉的粪便中分离病毒,并通过形态学、血清学、分子生物学、动物回归及免疫接种等方法对分离株进行鉴定。鉴定结果表明成功分离出1株貉细小病毒,命名为LN10-1株。其VP2基因核苷酸序列与猕猴源猫泛白细胞综合征病毒株(BJ-22/2008/CHN株)相似性高达99.7%。VP2蛋白上决定宿主范围的2个氨基酸位点发生了突变。VP2基因种系发生分析显示,LN10-1株位于猫泛白细胞综合征病毒(Feline panleukopenia virus,FPLV)、蓝狐细小病毒(Blue fox parvovirus,BFPV)、水貂肠炎病毒(Mink enteritis virus,MEV)组成的食肉类动物细小病毒聚类分支与由犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)组成的聚类分支。由LN10-1株制备的灭活疫苗免疫结果显示,接种28d细小病毒中和抗体滴度可达到1∶256以上。推测LN10-1株可能正处于FPLV与CPV进化的中间状态,或是CPV适应新宿主(貉)而形成的一种新病毒,可以作为针对貉细小病毒性肠炎灭活疫苗的候选株。 展开更多

关键词 貉细小病毒 分离鉴定 vp2基因 免疫原性

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一步法扩增IBDV上海株全长基因组cDNA 被引量：2

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作者 孙建和 陆苹 +1 位作者 赵渝 李晖 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期194-197,共4页

为了研究鸡传染性法氏囊病病毒 (IBDV)上海株的全部核苷酸序列 ,应用蛋白酶K消化、割胶纯化获得了高纯度的dsRNA ,应用随机引物合成了cDNA的第一链。参照基因库中相关IBDV毒株的基因序列 ,设计合成了两对引物 ,一步扩增出IBDV上海株全... 为了研究鸡传染性法氏囊病病毒 (IBDV)上海株的全部核苷酸序列 ,应用蛋白酶K消化、割胶纯化获得了高纯度的dsRNA ,应用随机引物合成了cDNA的第一链。参照基因库中相关IBDV毒株的基因序列 ,设计合成了两对引物 ,一步扩增出IBDV上海株全长基因组cDNA的A片段和B片段。为了验证获得的A片段和B片段的正确性 ,以扩增出的A片段为模板 ,成功扩增出IBDV的VP2 基因 ,并应用T载体进行了克隆和测序 ,测序结果显示 ,其与国内外数株IBDV毒株的同源性很高 ,表明本文建立的扩增IBDV全长基因组cDNA的一步法正确。 展开更多

关键词 鸡 传染性法氏囊病病毒 全长基因组 CDNA vp2基因 基因克隆 一步法扩增 IBDVD上海株

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