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猪细小病毒自然弱毒N株VP2基因的克隆及原核表达 被引量:1
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作者 李斌 苏乾莲 +5 位作者 赵武 梁家幸 梁保忠 何颖 秦毅斌 何苹萍 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第1期310-314,共5页
为了进一步研究猪细小病毒自然弱毒株(PPV-N株)的自然弱毒分子生物学机理,对PPV-N株VP2基因进行克隆、测序和原核表达研究。结果表明,成功构建PPV-N株VP2基因的克隆重组质粒pMD18-T-VP2及表达重组质粒pET32a-VP2,经SDS-PAGE及Western bl... 为了进一步研究猪细小病毒自然弱毒株(PPV-N株)的自然弱毒分子生物学机理,对PPV-N株VP2基因进行克隆、测序和原核表达研究。结果表明,成功构建PPV-N株VP2基因的克隆重组质粒pMD18-T-VP2及表达重组质粒pET32a-VP2,经SDS-PAGE及Western blotting鉴定,PPV-N株VP2基因在BL21(DE3)plysS菌中成功进行融合表达,表达出约85.4 KDa的VP2融合蛋白,且表达的VP2融合蛋白能与PPV阳性血清发生特异性反应。PPV-N株VP2基因的成功克隆及原核表达为今后研究PPV-N株的自然弱毒的分子生物学机理和研制PPV诊断抗原奠定了基础。 展开更多
关键词 猪细小病毒自然弱毒株(ppv-n株) VP2基因 克隆 原核表达
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猪细小病毒自然弱毒N株VP1蛋白二级结构及B细胞抗原表位预测 被引量:2
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作者 李斌 赵武 +5 位作者 梁家幸 梁保忠 姚瑞英 黄安国 何颖 蒋玉雯 《广西农业科学》 CSCD 2008年第6期820-824,共5页
以PPV—N株的VP1蛋白基因序列为材料,采用Chou—Fasman、Garnier—Robson和Karplus—Schultz预测VP1蛋白的二级结构,用Kyte—Doolittle法预测VP1蛋白的亲水性,用Emini法预测VP1蛋白的表面可能性,用Jameson—Wolf法预测VP1蛋白的抗... 以PPV—N株的VP1蛋白基因序列为材料,采用Chou—Fasman、Garnier—Robson和Karplus—Schultz预测VP1蛋白的二级结构,用Kyte—Doolittle法预测VP1蛋白的亲水性,用Emini法预测VP1蛋白的表面可能性,用Jameson—Wolf法预测VP1蛋白的抗原指数,然后综合分析VP1蛋白的B细胞抗原表位。结果表明,PPV—N株VP1蛋白的二级结构以β-折叠为主,并有较多的转角和无规则卷曲区域,在序列的20~56、61~80、86~130、136~188区域最有可能是B细胞抗原表位的优势区域。本研究为PPV—N株的自然弱毒分子机理以及反向疫苗学研究提供了一定的理论依据。 展开更多
关键词 ppvn VP1蛋白 二级结构 B细胞抗原表位
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猪细小病毒自然弱毒N株VP1基因的扩增与序列分析
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作者 李斌 赵武 +6 位作者 梁家幸 梁保忠 白安斌 姚瑞英 黄安国 何颖 蒋玉雯 《动物医学进展》 CSCD 2008年第10期5-9,共5页
对猪细小病毒自然弱毒N株(PPV-N株)VP1基因扩增及测序,利用生物信息学技术预测VP1蛋白的二级结构与B细胞抗原表位,以及分析该蛋白的氨基酸差异位点及密码子偏爱性。结果表明,PPV-N株VP1基因与弱毒参考毒株NADL-2VP1基因同源性最高,亲缘... 对猪细小病毒自然弱毒N株(PPV-N株)VP1基因扩增及测序,利用生物信息学技术预测VP1蛋白的二级结构与B细胞抗原表位,以及分析该蛋白的氨基酸差异位点及密码子偏爱性。结果表明,PPV-N株VP1基因与弱毒参考毒株NADL-2VP1基因同源性最高,亲缘关系最近。PPV-N株VP1蛋白的二级结构较为复杂,以β-折叠为主,并有较多的转角和无规则卷曲区域,在序列的20~56、61~80、86~130、136~188区域为B细胞抗原表位的优势区域。PPV强、弱毒株VP1蛋白存在5个氨基酸差异位点(T-365-I,G-528-D,Q-533-H,P-586-S,K-715-R),这些位点处氨基酸残基抗原性与毒力成正相关。PPV-N株VP1蛋白在A、C、E、G、H、I、K、N、Q、R、S、T、V和Y氨基酸于密码子选择上存在一定的偏爱性。 展开更多
关键词 ppvn VP1基因 扩增 生物信息学分析
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低含量血清培养IBRS-2细胞及其增殖猪细小病毒N株的研究 被引量:3
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作者 卢冰霞 段群棚 +10 位作者 梁家幸 周英宁 赵武 何颖 闭炳芬 秦毅斌 蒋冬福 卢敬专 李斌 苏乾莲 陈忠伟 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2018年第3期40-44,共5页
依次采用含8%、4%、2%、1%小牛血清MEM培养基驯化IBRS-2细胞,并在驯化好的IBRS-2细胞上接种猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)N株,确定PPV N株在该培养体系下的生长情况。结果显示,用含8%、4%、2%小牛血清MEM培养基各进行5代次驯化,IB... 依次采用含8%、4%、2%、1%小牛血清MEM培养基驯化IBRS-2细胞,并在驯化好的IBRS-2细胞上接种猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)N株,确定PPV N株在该培养体系下的生长情况。结果显示,用含8%、4%、2%小牛血清MEM培养基各进行5代次驯化,IBRS-2细胞能完全适应且生长状态良好。当血清浓度降至1%时,仅传代1次,细胞就无法保持良好状态,细胞出现贴壁较差、拉网、生长停滞等现象。各血清浓度培养体系中细胞生长曲线测定结果显示,在细胞培养的0、24、48、72、96 h,各组细胞密度与常规培养的对照组差别不明显。因此用MEM培养基培养IBRS-2细胞时,血清最低含量为2%。用该体系培养IBRS-2细胞接种PPV N株后,通过TCID_(50)和HA测定病毒滴度。结果显示,2%血清培养的PPV N株病毒滴度平均值与常规条件培养(6%~10%血清)无明显差别,表明该体系可用于PPV N株的增殖。本研究成功驯化出能在低含量血清培养条件下生长良好的IBRS-2细胞,血清浓度可以降低到2%,且PPV N株在该低含量血清培养的IBRS-2细胞中能良好增殖。 展开更多
关键词 IBRS-2细胞 低含量血清 猪细小病毒
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豚鼠对猪细小病毒弱毒苗抗体反应的研究 被引量:10
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作者 盘宝进 白安斌 +3 位作者 姚瑞英 陈西宁 黄安国 蒋玉雯 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期467-470,共4页
用不同批次、不同剂量、不同保存时间的猪细小病毒N株弱毒苗接种豚鼠 ,观察豚鼠对PPVN株弱毒苗的抗体反应。结果 4种不同剂量和 3个不同批次的PPVN株弱毒苗接种豚鼠后第 14天均产生抗体反应 ,其PPVHI效价在 1∶16~ 1∶6 4之间 ,0 .1ml... 用不同批次、不同剂量、不同保存时间的猪细小病毒N株弱毒苗接种豚鼠 ,观察豚鼠对PPVN株弱毒苗的抗体反应。结果 4种不同剂量和 3个不同批次的PPVN株弱毒苗接种豚鼠后第 14天均产生抗体反应 ,其PPVHI效价在 1∶16~ 1∶6 4之间 ,0 .1ml和 1ml剂量接种豚鼠产生的PPVHI抗体水平相近 ,抗体持续长达 12个月以上。在 4℃保存 0天、12个月和 - 2 0℃保存 2年、3年的PPVN株弱毒苗接种豚鼠 ,其PPVHI价在 1∶16~ 1∶32之间 ,说明该苗在 4℃至少能保存 12个月 ,- 2 0℃能保存 3年以上。比较了不同批次疫苗接种猪和豚鼠所产生的抗体反应 ,结果两者相似。用 3批引起豚鼠产生抗体反应的PPVN株弱毒苗接种 76 8头后备母猪 ,共产仔 7136头 ,其中健活仔 6 5 75头 ,平均每窝产健活仔 8.5 6头 ,产死仔仅 0 .73头。证明豚鼠是监测PPV弱毒苗抗体的首选实验动物。 展开更多
关键词 豚鼠 细小病毒 ppv n株弱毒苗 抗体反应
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