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拟南芥ProNAS4-GUS转基因植株的构建及表达模式
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作者 贾亚峰 樊婷婷 +3 位作者 吴席 马倩 张震 王婷婷 《合肥工业大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第4期508-511,共4页
为了进一步研究NAS4基因的表达模式及其在缺铁胁迫下的响应模式,文章利用从野生型拟南芥中提取的基因组DNA作为模板,克隆获得NAS4启动子片段,将片段与pART27-GUS质粒进行酶切处理,然后将片段与质粒进行连接,将连接产物通过热激转化法转... 为了进一步研究NAS4基因的表达模式及其在缺铁胁迫下的响应模式,文章利用从野生型拟南芥中提取的基因组DNA作为模板,克隆获得NAS4启动子片段,将片段与pART27-GUS质粒进行酶切处理,然后将片段与质粒进行连接,将连接产物通过热激转化法转入大肠杆菌中,通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)鉴定获得阳性菌株。质粒测序正确后将重组质粒通过电击转化法转入农杆菌中,经过PCR鉴定得到阳性菌株后,用浸花法侵染野生型拟南芥;通过抗性筛选和PCR鉴定得到ProNAS4-GUS转基因植株,并对获得的转基因植株进行GUS染色分析,发现NAS4基因在幼苗的根部和叶脉中都有所表达。实验结果为研究NAS4基因在植物缺铁胁迫下的响应模式奠定了基础。 展开更多
关键词 拟南芥 NAS4基因 重组质粒 转基因植株 gus染色分析
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日本落叶松内源GUS基因鉴定及其酶活性分析
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作者 叶查龙 张陈谊 +2 位作者 杨玲 孙晓梅 李万峰 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2024年第6期86-92,共7页
[目的]研究日本落叶松内源β-葡糖苷酸酶(GUS)基因及其酶活性,分析GUS作为报告基因的可靠性。[方法]利用pCAMBIA1301载体上的GUS基因序列在日本落叶松参考基因组中进行比对,鉴定并克隆出日本落叶松GUS(LaGUS)基因。在NCBI利用blastp查... [目的]研究日本落叶松内源β-葡糖苷酸酶(GUS)基因及其酶活性,分析GUS作为报告基因的可靠性。[方法]利用pCAMBIA1301载体上的GUS基因序列在日本落叶松参考基因组中进行比对,鉴定并克隆出日本落叶松GUS(LaGUS)基因。在NCBI利用blastp查找其他物种中LaGUS的同源序列并构建进化树。利用已有的转录组数据和实时荧光定量PCR分析LaGUS基因在日本落叶松中的表达模式。利用组织化学的方法,以X-gluc作为GUS酶反应底物,检测日本落叶松体细胞胚胎发生过程中内源GUS的酶活性。[结果]在日本落叶松中鉴定到一个LaGUS基因,CDS长3435 bp,编码1144个氨基酸。25种植物中具有与LaGUS基因相似的序列。LaGUS基因的表达量在活动期高于休眠期,在体胚苗中高于在胚性愈伤组织和体细胞胚胎中。组织化学染色表明,日本落叶松胚性愈伤组织、体细胞胚胎和体胚苗在室温下染色6 d时均观察到蓝色,但体胚苗的染色程度高于胚性愈伤组织和体细胞胚胎。[结论]日本落叶松具有内源GUS活性,在基因工程中利用GUS作为报告基因可能存在一定干扰。 展开更多
关键词 日本落叶松 内源gus 体细胞胚胎发生 报告基因
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用基因枪将GUS基因导入褐藻细胞中表达 被引量:27
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作者 秦松 张健 +4 位作者 李文斌 王希华 童顺 孙勇如 曾呈奎 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 1994年第4期353-356,共4页
于1993年11月-1994年2月,用高压氦气式基因枪,将PB1221质粒[装有CaMV35s启动子、GUS(β-葡精苷酸酶)基因以及nos的3’调控区]导入海带和裙带菜组织切块中。48h后,在海带假根细胞和裙带菜中肋部叶片细胞中检测到GUS基因的表达。实... 于1993年11月-1994年2月,用高压氦气式基因枪,将PB1221质粒[装有CaMV35s启动子、GUS(β-葡精苷酸酶)基因以及nos的3’调控区]导入海带和裙带菜组织切块中。48h后,在海带假根细胞和裙带菜中肋部叶片细胞中检测到GUS基因的表达。实验表明,微粒子轰击法是外源基因导入大型褐藻的一个有效途径。CaMV35s启动子能够驱动外源基因在海洋藻类中的表达,可作为藻类基因工程的启动元件。 展开更多
关键词 褐藻 基因导入 gus基因 细胞
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GUS基因在杜氏盐藻细胞中的瞬间表达 被引量:37
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作者 耿德贵 王义琴 +1 位作者 李文彬 孙勇如 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2002年第2期35-39,共5页
利用电激法将GUS基因转入杜氏盐藻细胞内进行瞬间表达 ,研究了盐藻的生长状态和电激转化条件对转化率的影响 ,并比较了CaMV35S、Ubil、Ubil Ω、CaMV35S U bil和CaMV35S Ubil Ω 5种启动子的转化效率。结果表明 ,培养 5d的盐藻在 6kV的... 利用电激法将GUS基因转入杜氏盐藻细胞内进行瞬间表达 ,研究了盐藻的生长状态和电激转化条件对转化率的影响 ,并比较了CaMV35S、Ubil、Ubil Ω、CaMV35S U bil和CaMV35S Ubil Ω 5种启动子的转化效率。结果表明 ,培养 5d的盐藻在 6kV的脉冲电压、0 .0 5s的脉冲持续时间和 2 10的脉冲次数下电激可获得较高的转化率 ,为转化最佳条件。 5种启动子中 ,Ubil Ω启动子的转化效率最高 。 展开更多
关键词 杜氏盐藻细胞 转化率 杜氏盐藻 gus基因 电激法 瞬间表达 转基因 基因表达
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高羊茅组织培养再生体系及GUS基因瞬间表达研究 被引量:11
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作者 高丽美 徐子勤 +2 位作者 张永彦 黄萱 刘杨 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期40-45,共6页
以成熟种子为外植体,对高羊茅组织培养和植株再生体系进行了优化,分析了不同浓度2,4-D、6-BA和激动素对高羊茅愈伤组织诱导和愈伤组织分化成苗的影响,结果表明:9.0mg/L2,4-D对愈伤组织的诱导效果最佳,0.2mg/L激动素是愈伤组织分化成苗... 以成熟种子为外植体,对高羊茅组织培养和植株再生体系进行了优化,分析了不同浓度2,4-D、6-BA和激动素对高羊茅愈伤组织诱导和愈伤组织分化成苗的影响,结果表明:9.0mg/L2,4-D对愈伤组织的诱导效果最佳,0.2mg/L激动素是愈伤组织分化成苗的最适浓度,二者的诱导率和分化率分别达到68.08%和45.83%.在愈伤组织继代培养基中附加1.0mg/L2,4-D、0.5mg/L6-BA和1.25mg/LCuSO4有利于胚性愈伤组织的形成,可以明显促进愈伤组织分化.同时,采用基因枪法将GUS基因导入高羊茅愈伤组织中,通过组织化学染色检测到了GUS瞬间表达活性;并对影响GUS基因瞬间表达的因素进行了分析,以期为提高基因枪法遗传转化效率提供参考. 展开更多
关键词 高羊茅 组织培养 基因枪 gus基因 瞬间表达
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GUS基因和NPTII基因表达的相关性及其在转基因棉花检测研究中的应用 被引量:10
6
作者 上官小霞 李燕娥 +3 位作者 梁运生 吴霞 杜春芳 张林水 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2007年第3期163-167,共5页
利用农杆菌介导转化法,将含有35S启动子驱动NPTII基因和GUS基因以及棉纤维特异表达启动子E6驱动目的基因FB的植物表达载体转入到常规棉花R15中。重点分析了GUS基因和NPTII基因在愈伤诱导阶段、T0代及T1代转基因棉花中的表达情况。综合... 利用农杆菌介导转化法,将含有35S启动子驱动NPTII基因和GUS基因以及棉纤维特异表达启动子E6驱动目的基因FB的植物表达载体转入到常规棉花R15中。重点分析了GUS基因和NPTII基因在愈伤诱导阶段、T0代及T1代转基因棉花中的表达情况。综合两个基因的表达来进行转基因棉花的阳性鉴定,可以为转基因棉花后代的纯合选育提供双重保障。7个转基因株系选育到T3代共获得株行51个,卡那霉素检测多数株行阳性率在90%以上,其中21个株行阳性率达100%。 展开更多
关键词 gus基因 NPTII基因 相关性 转基因棉花 基因表达
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GUS组织化学染色法——一种快速筛选抗二化螟转Btcry1Ab基因水稻的方法(英文) 被引量:9
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作者 吴刚 崔海瑞 +2 位作者 舒庆尧 叶恭银 夏英武 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期141-143,共3页
关键词 转基因水稻 杭药性 二化螟 gus组织化学染色法
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基于GUS基因瞬时表达优化云南杜鹃(Rhododendron yunnanense Franch.)遗传转化方法 被引量:8
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作者 彭绿春 周微 +5 位作者 汪玲敏 张露 宋杰 解玮佳 关文灵 李世峰 《云南农业大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2016年第6期1045-1051,共7页
本研究以云南杜鹃无菌叶片和愈伤组织为受体材料,运用正交试验设计,通过组织染色分析法研究了预培养时间、菌液密度、侵染时间、共培养时间对农杆菌介导的GUS基因瞬时表达的影响。结果表明:叶片是云南杜鹃较理想的遗传转化受体材料,无... 本研究以云南杜鹃无菌叶片和愈伤组织为受体材料,运用正交试验设计,通过组织染色分析法研究了预培养时间、菌液密度、侵染时间、共培养时间对农杆菌介导的GUS基因瞬时表达的影响。结果表明:叶片是云南杜鹃较理想的遗传转化受体材料,无菌叶片预培养0 d,菌液OD_(600)值0.5,侵染时间40 min,共培养5 d,GUS基因瞬时表达率最高,平均表达率为70%。试验结果为云南杜鹃遗传转化研究提供了快速可靠的依据。 展开更多
关键词 云南杜鹃 gus基因 瞬时表达 遗传转化方法
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兰花圆球茎基因枪转化后的GUS基因表达 被引量:13
9
作者 陈志俊 明小天 +2 位作者 刘荣维 李毅 陈章良 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2000年第4期94-96,共3页
利用花椰菜花叶病毒 (CaMV ) 35S启动子引导的葡糖醛酸糖苷酶 (β glu curonidase ,GUS)基因检测基因枪法转化兰花圆球茎组织的瞬间表达效率。发现在基因枪轰击时在DNA 金粉悬液中加入 0 1mol/L的生长激素NAA ,轰击前预培养时使用0 1m... 利用花椰菜花叶病毒 (CaMV ) 35S启动子引导的葡糖醛酸糖苷酶 (β glu curonidase ,GUS)基因检测基因枪法转化兰花圆球茎组织的瞬间表达效率。发现在基因枪轰击时在DNA 金粉悬液中加入 0 1mol/L的生长激素NAA ,轰击前预培养时使用0 1mol/L甘露醇处理 ,每个培养皿轰击两次和轰击压力为 110 0 psi下 。 展开更多
关键词 gus 兰花圆球式 基因枪 瞬间表达
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利用GUS基因瞬时表达探索佛手叶盘基因枪转化参数 被引量:6
10
作者 周春丽 郭卫东 +3 位作者 王德解 余初浪 路梅 李玉萍 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第11期2145-2150,共6页
佛手是芳香科枸橼类植物,有很好的药用和观赏价值,但其品种较为单一,对其进行遗传改良和品种选育显得十分必要.为了将基因枪转化方法应用于佛手的遗传改良和品种选育,本实验以GUS基因为报告基因,利用基因枪方法将其转入金华佛手外植体内... 佛手是芳香科枸橼类植物,有很好的药用和观赏价值,但其品种较为单一,对其进行遗传改良和品种选育显得十分必要.为了将基因枪转化方法应用于佛手的遗传改良和品种选育,本实验以GUS基因为报告基因,利用基因枪方法将其转入金华佛手外植体内,通过检测GUS基因在佛手叶盘中的瞬时表达情况,分析了外植体的幼嫩程度、射程、氦气压力、真空度、轰击次数等参数对GUS瞬时表达的影响,并研究了最佳检测时间.结果表明,以幼叶为受体,在射程为6 cm、氦气压力为7.584×106Pa,真空度为88.046 kPa条件下,2 d后可检测出GUS基因的最佳表达活性.轰击次数多少对GUS基因瞬时表达影响不明显. 展开更多
关键词 佛手 基因枪 gus基因 瞬时表达
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农杆菌介导的半夏GUS基因瞬时表达 被引量:11
11
作者 贾永芳 马玉坤 +1 位作者 郭余龙 李名扬 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2007年第4期42-45,共4页
采用根癌农杆菌感染半夏无菌叶片、叶柄和愈伤组织,对GUS基因的瞬间表达进行研究,并分析了不同转化受体、感染时间、菌液浓度、共培养、预培养时间、菌种对GUS基因的瞬间表达的影响。结果显示,以半夏的无菌苗叶柄和愈伤组织,在OD值为0.2... 采用根癌农杆菌感染半夏无菌叶片、叶柄和愈伤组织,对GUS基因的瞬间表达进行研究,并分析了不同转化受体、感染时间、菌液浓度、共培养、预培养时间、菌种对GUS基因的瞬间表达的影响。结果显示,以半夏的无菌苗叶柄和愈伤组织,在OD值为0.2的EHA101或EHA105农杆菌液中感染15 min,叶柄暗处共培养3 d,愈伤组织2 d,能够得到较高的GUS基因瞬间表达。 展开更多
关键词 半夏 根癌农杆菌 gus基因 瞬间表达
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不同调控序列控制下的gus基因在柑桔原生质体中的瞬间表达 被引量:8
12
作者 王锋 朱祯 +1 位作者 李向辉 章文才 《福建农业学报》 CAS 1998年第2期1-5,共5页
通过PEG法及转化脂介导法将不同调控序列控制下的gus基因导入柑桔原生质体中,研究了gus基因在柑桔原生质体中的瞬间表达情况,结果表明,在柑桔原生质体中,控制gus基因表达水平的能力由大至小依次为CaMV35S启动子... 通过PEG法及转化脂介导法将不同调控序列控制下的gus基因导入柑桔原生质体中,研究了gus基因在柑桔原生质体中的瞬间表达情况,结果表明,在柑桔原生质体中,控制gus基因表达水平的能力由大至小依次为CaMV35S启动子、AdhI启动子及rbcs启动子,内含子的存在可以提高gus基因在柑桔原生质体中的表达水平。 展开更多
关键词 瞬间表达 gus基因 调控序列 柑桔 原生质体
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α-硫辛酸对大豆农杆菌介导GUS瞬时表达和芽诱导的影响 被引量:8
13
作者 杨晓凤 卢涛 +2 位作者 周正剑 寿惠霞 唐桂香 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期552-556,共5页
以适宜转化大豆受体YC-2为材料,研究了抗氧化剂α-硫辛酸对农杆菌介导GUS瞬时表达和芽诱导率的影响。结果表明:在共培养基中添加不同浓度的抗氧化剂可显著降低外植体的褐化率,随α-硫辛酸浓度的增加外植体褐化率明显减少,但白化率增加,... 以适宜转化大豆受体YC-2为材料,研究了抗氧化剂α-硫辛酸对农杆菌介导GUS瞬时表达和芽诱导率的影响。结果表明:在共培养基中添加不同浓度的抗氧化剂可显著降低外植体的褐化率,随α-硫辛酸浓度的增加外植体褐化率明显减少,但白化率增加,且这些白化的外植体在后期不易产生诱导芽;共培养中添加不同浓度的α-硫辛酸可增强GUS瞬时表达率和芽诱导的再生率,且以25 mg·L-1效果最佳。 展开更多
关键词 大豆 Α-硫辛酸 gus瞬时表达 芽诱导率
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采用GUS标记技术研究钙调素在转基因烟草中的分布 被引量:1
14
作者 陶文菁 梁述平 吕应堂 《武汉植物学研究》 CSCD 2003年第3期187-192,共6页
为了监测钙调素 (Ca M)在植物细胞内的分布并探索其生物学功能 ,将水稻 Ca M和 GU S融合基因 (cam.gus)分别置于 35 S启动子和花粉特异启动子 L AT5 2 - 7控制下 ,构建出载体 p MD/ Ca M.GU S和 p BI/ L AT.Ca M.GU S,转化烟草 (N icoti... 为了监测钙调素 (Ca M)在植物细胞内的分布并探索其生物学功能 ,将水稻 Ca M和 GU S融合基因 (cam.gus)分别置于 35 S启动子和花粉特异启动子 L AT5 2 - 7控制下 ,构建出载体 p MD/ Ca M.GU S和 p BI/ L AT.Ca M.GU S,转化烟草 (N icotiana tobacum cv.SR ) ,GU S染色结果显示 ,Ca M.GU S融合蛋白广泛分布于植物根、茎、叶等组织 ,根尖生长点细胞、根毛细胞、表皮毛细胞、气孔保卫细胞、维管束细胞的细胞质中融合蛋白含量较多。花粉粒中也分布着 Ca M,并在萌发沟处表现出较高的浓度。保卫细胞和表皮毛细胞中 Ca M分布在相邻细胞连接处细胞模内侧 ,呈现出极性分布。研究结果表明 ,细胞内 Ca M的不均匀分布可能与细胞功能相关。 展开更多
关键词 gus标记 钙调素 转基因烟草 CaM·gus融合基因
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Gus基因在转基因棉花细胞中的表达及其与NPTⅡ基因、Bt基因表达的相关性 被引量:6
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作者 孟钊红 焦改丽 +1 位作者 张换样 李燕娥 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2001年第4期243-246,共4页
通过农杆菌介导法将含有 Gus基因、NPT 基因、Bt基因的 Ti质粒转入棉花细胞中 ,用Gus组织化学检测法检测转化愈伤组织、再生棉株 R0 、R1和 R2 代植株组织细胞中的 Gus基因表达的水平 ,并用 NPT 活性速测法和室内生物测虫法检测三个外... 通过农杆菌介导法将含有 Gus基因、NPT 基因、Bt基因的 Ti质粒转入棉花细胞中 ,用Gus组织化学检测法检测转化愈伤组织、再生棉株 R0 、R1和 R2 代植株组织细胞中的 Gus基因表达的水平 ,并用 NPT 活性速测法和室内生物测虫法检测三个外源基因在 R0 、R1和 R2 代植物植株组织中的表达情况 ,分析三者存在及表达的相互关系。结果表明 ,Gus基因在转化愈伤组织细胞有丝分裂增殖过程中能稳定遗传给后代细胞。转化棉株 R0 、R1和 R2 代 Gus活性、NPT 活性、抗虫性三者有一定的相关性但不完全是共表达的 。 展开更多
关键词 转基因棉花 农杆菌介导 gus基因 基因表达 NPTⅡ基因 BT基因 相关性 协同性
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根癌农杆菌介导转化甘蓝型油菜子叶GUS基因瞬间表达 被引量:4
16
作者 谢伶俐 李加纳 +3 位作者 殷家明 柴友荣 许本波 林呐 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期9-13,共5页
为提高根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导转化甘蓝型油菜外源基因的瞬间表达率和优化遗传转化体系,利用根癌农杆菌共培养法转化甘蓝型油菜(Brassica napusL.)湘油15带柄子叶,通过组织化学染色法检测GUS基因瞬间表达情况,研究... 为提高根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导转化甘蓝型油菜外源基因的瞬间表达率和优化遗传转化体系,利用根癌农杆菌共培养法转化甘蓝型油菜(Brassica napusL.)湘油15带柄子叶,通过组织化学染色法检测GUS基因瞬间表达情况,研究了预培养基、蔗糖浓度、无机盐浓度和乙酰丁香酮对GUS基因瞬间表达的影响。结果表明,预培养基为MS+6-BA1.0mg/L+2,4-D 1.0mg/L、菌悬液为MS+蔗糖30g/L+乙酰丁香酮100μmol/L或1/2MS+蔗糖60g/L+乙酰丁香酮100μmol/L时GUS基因瞬间表达率较高,达到约40%。 展开更多
关键词 甘蓝型油菜 子叶 根癌农杆菌 gus基因 瞬间表达
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棉花GhCCR4基因表达载体构建及GUS基因的瞬时表达 被引量:4
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作者 秦超 倪志勇 +3 位作者 郝晓燕 王娟 吕萌 范玲 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期639-642,共4页
研究以GUS基因为报告基因,构建CCR4基因的瞬时表达载体,首先酶切带有CCR4基因的pGEM-T-CCR4载体,获得CCR4基因目的片段,然后将其克隆到瞬时表达载体pGUS/NIa中,获得由CaMV35S启动子调控目的基因的pGUS-CCR4融合表达载体,使目的基因能够... 研究以GUS基因为报告基因,构建CCR4基因的瞬时表达载体,首先酶切带有CCR4基因的pGEM-T-CCR4载体,获得CCR4基因目的片段,然后将其克隆到瞬时表达载体pGUS/NIa中,获得由CaMV35S启动子调控目的基因的pGUS-CCR4融合表达载体,使目的基因能够和GUS基因同时表达。采用基因枪法将pGUS-CCR4转化到洋葱表皮细胞中,暗培养24h,经GUS组织化学染色,检测到多个洋葱细胞呈现蓝色,表明构建的瞬时表达载体可在植物细胞中高效表达。为进一步在棉花中研究GhCCR4基因的功能奠定了实验基础。 展开更多
关键词 CCR 载体构建 瞬时表达 gus基因
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植物源内含子对GUS基因表达模式的影响 被引量:5
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作者 邹智 吴刚 +4 位作者 肖玲 武玉花 聂淑晶 肖娜 卢长明 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第6期78-82,共5页
采用报告基因的瞬间表达来优化转化体系是提高农杆菌介导法转化效率的重要手段,GUS以稳定、易于定性定量分析等独特优点成为瞬间表达体系的首选。pCaMV 35S启动下的GUS基因可在农杆菌中表达,另外还首次报道该嵌合基因同时也可在大肠杆... 采用报告基因的瞬间表达来优化转化体系是提高农杆菌介导法转化效率的重要手段,GUS以稳定、易于定性定量分析等独特优点成为瞬间表达体系的首选。pCaMV 35S启动下的GUS基因可在农杆菌中表达,另外还首次报道该嵌合基因同时也可在大肠杆菌中高效表达。为避免GUS基因在农杆菌中的表达对瞬间表达体系的影响,一拟南芥蛋白基因的内含子被插入到GUS基因的编码区,进而构建了含内含子的GUS植物表达载体pBI121-GUSint。组织化学染色结果表明,GUSint在农杆菌中没有表达,而在接种3d的油菜中可高效瞬间表达,其中在子叶柄(带子叶)中瞬间表达率高达100%,这一方面证实载体构建成功,另一方面也为进一步优化油菜及其它芸薹属植物转化体系及在油菜中快速研究目的基因的功能和表达调控模式奠定了基础。 展开更多
关键词 gus 内含子 表达模式 根癌农杆菌 甘蓝型油菜 瞬间表达
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棉花GhCAD6基因表达载体构建及GUS基因的瞬时表达 被引量:3
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作者 倪志勇 吕萌 +3 位作者 王娟 李波 白岩 范玲 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期20-24,共5页
【目的】以GUS基因为报告基因,构建GhCAD6基因的瞬时表达载体。【方法】采用PCR方法和基因枪法。【结果】用PCR法,以pGEM-T-CAD6质粒为模板,获得GhCAD6基因目的片段。然后将其克隆到瞬时表达载体pRTL2-GUS/NIa中,获得由CaMV35S启动子调... 【目的】以GUS基因为报告基因,构建GhCAD6基因的瞬时表达载体。【方法】采用PCR方法和基因枪法。【结果】用PCR法,以pGEM-T-CAD6质粒为模板,获得GhCAD6基因目的片段。然后将其克隆到瞬时表达载体pRTL2-GUS/NIa中,获得由CaMV35S启动子调控目的基因的pGUS-CAD6融合表达载体,使目的基因能够和GUS基因同时表达。采用基因枪法将pGUS-CAD6转化到洋葱表皮细胞中,暗培养24 h,经GUS组织化学染色,检测到多个洋葱细胞呈现蓝色。【结论】构建的瞬时表达载体可在植物细胞中高效表达,为进一步研究棉花GhCAD6基因的功能奠定了实验基础。 展开更多
关键词 CAD 载体构建 瞬时表达 gus基因
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农杆菌介导GUS基因对多年生黑麦草转化的研究 被引量:4
20
作者 张振霞 刘萍 +2 位作者 杜雪玲 苏乔 杨中艺 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期121-126,共6页
通过检测愈伤组织中GUS基因的瞬间表达,研究农杆菌LBA4404/pCAMBIA1301介导多年生黑麦草的转化体系。通过对多年生黑麦草瞬间表达率的比较,确立了其遗传转化的最佳优化条件。研究发现,多年生黑麦草不同品种的转化率在25%~45%之... 通过检测愈伤组织中GUS基因的瞬间表达,研究农杆菌LBA4404/pCAMBIA1301介导多年生黑麦草的转化体系。通过对多年生黑麦草瞬间表达率的比较,确立了其遗传转化的最佳优化条件。研究发现,多年生黑麦草不同品种的转化率在25%~45%之间变化。多年生黑麦草遗传转化最佳优化条件是预培养10d的胚性愈伤组织、浓度为0.5~0.8OD的农杆菌菌液以及2d共培养时间。在共培养基中添加100μmol/L乙酰丁香酮能有效地提高植物瞬间表达率。两种侵染处理方法比较结果为滤纸滴加法比浸泡法更优。转化后对愈伤组织的干燥处理能抑制农杆菌过度繁殖,能改善愈伤状态,有利于提高转化率。 展开更多
关键词 多年生黑麦草 农杆菌转化 gus基因
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