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重组LacZ复制缺陷型腺病毒的构建和鉴定 被引量:1
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作者 裘秀春 许彦鸣 +7 位作者 马保安 周勇 单乐群 杨彤涛 于翠娟 孟艳玲 杨安钢 范清宇 《医学研究生学报》 CAS 2006年第11期963-966,I0009,共5页
目的:构建表达LacZ基因的复制缺陷型腺病毒。方法:用AdEasy-1TM系统,在大肠杆菌中同源重组,构建表达LacZ基因的复制缺陷型腺病毒载体(Ad-LacZ)。重组腺病毒在HEK293细胞内包装并扩增,测定病毒滴度、电镜鉴定病毒存在、斑点杂交检测其复... 目的:构建表达LacZ基因的复制缺陷型腺病毒。方法:用AdEasy-1TM系统,在大肠杆菌中同源重组,构建表达LacZ基因的复制缺陷型腺病毒载体(Ad-LacZ)。重组腺病毒在HEK293细胞内包装并扩增,测定病毒滴度、电镜鉴定病毒存在、斑点杂交检测其复制缺陷性,然后感染HeLa细胞X-gal染色检测LacZ的表达情况。结果:成功构建了重组LacZ腺病毒表达载体,包装获得的重组腺病毒的滴度为1.58×109PFU/m l。在转染的细胞和感染的靶细胞内均可检测到LacZ的表达。电镜下可见感染的HEK293细胞核内含晶格状结构的腺病毒包函体。斑点杂交提示重组病毒为复制缺陷型,其基因转移百分率和感染强度和感染时间有一定的相关性。结论:成功构建了表达LacZ基因的复制缺陷型腺病毒。 展开更多
关键词 腺病毒表达载体 LACZ
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腺病毒介导的碱性成纤维细胞生长因子对大鼠脊髓损伤腹后外侧索少突胶质细胞的影响 被引量:5
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作者 杨彦玲 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期348-352,共5页
目的观察腺病毒(Adts)介导碱性成纤维细胞生长因子(FGF-2)对大鼠脊髓损伤腹后外侧索少突胶质细胞的影响。方法 32只SD大鼠在T10水平制备脊髓损伤模型,随机分为体内转基因治疗组和损伤对照组,用携带FGF-2和绿色荧光蛋白(GFP)的Adts行直... 目的观察腺病毒(Adts)介导碱性成纤维细胞生长因子(FGF-2)对大鼠脊髓损伤腹后外侧索少突胶质细胞的影响。方法 32只SD大鼠在T10水平制备脊髓损伤模型,随机分为体内转基因治疗组和损伤对照组,用携带FGF-2和绿色荧光蛋白(GFP)的Adts行直接体内转基因治疗。荧光显微镜观察体内转基因表达,斜板实验检测大鼠运动功能恢复情况,免疫组织化学染色观察腹后外侧索少突胶质细胞(CC1+)数量的变化。结果荧光显微镜观察发现,Adts载体直接引入脊髓后可有效感染脊髓组织并表达报告基因。斜板实验检测结果显示,体内转基因治疗组大鼠的倾斜平面角度明显高于对照组(P<0.05或P<0.01)。免疫组织化学结果证实,腹后外侧索CC1+数量较对照组明显增加(P<0.05)。结论 Adts介导的FGF-2可促进少突胶质细胞的存活和增殖。 展开更多
关键词 脊髓损伤 碱性成纤维细胞生长因子 少突胶质细胞 腺病毒载体 基因治疗
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人骨形态发生蛋白-2基因腺病毒载体异位成骨
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作者 韩冬 李建军 +2 位作者 孙鸿斌 张巨 王健 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期985-988,F0002,共5页
目的:评价人骨形态发生蛋白2(hBMP-2)基因腺病毒表达载体(recombinant adenoviral vectorcarrying the human BMP-2 gene,AdBMP-2)成骨能力并探讨其成骨机制。方法:应用AdBMP-2体外感染兔骨髓间质干细胞(BMSC),7 d后观察hBMP-2和碱性磷... 目的:评价人骨形态发生蛋白2(hBMP-2)基因腺病毒表达载体(recombinant adenoviral vectorcarrying the human BMP-2 gene,AdBMP-2)成骨能力并探讨其成骨机制。方法:应用AdBMP-2体外感染兔骨髓间质干细胞(BMSC),7 d后观察hBMP-2和碱性磷酸酶(ALP)的表达,21 d后观察感染细胞钙结节形成能力。同时将AdBMP-2行裸鼠腓肠肌组织内注射,术后20 d取材,观察hBMP-2的表达及肌组织内异位成骨情况。结果:AdBMP-2可高效感染BMSC并获得hBMP-2的有效表达,ALP表达增高并形成钙结节。AdBMP-2在体内同样表达hBMP-2,并且以软骨化骨的方式启动成骨。结论:感染AdBMP-2的BMSC向成骨细胞分化,AdBMP-2在体内有着良好的成骨能力。 展开更多
关键词 腺病毒 骨形态发生蛋白类 基因 遗传载体
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