目的采用网络药理学和动物实验探讨射干止咳胶囊治疗感染后咳嗽的分子机制。方法通过中药系统药理学数据库与分析平台(traditional Chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform,TCMSP)获得射干的活性成分,利...目的采用网络药理学和动物实验探讨射干止咳胶囊治疗感染后咳嗽的分子机制。方法通过中药系统药理学数据库与分析平台(traditional Chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform,TCMSP)获得射干的活性成分,利用Swiss Target Prediction获取射干的相关靶点,并于GeneCards、OMIM、DisGeNET数据库筛选出的疾病靶点取交集获得射干止咳胶囊治疗感染后咳嗽的潜在靶点;采用STRING和Cytoscape 3.9.0构建“药物-有效成分-交集靶点”网络并筛选关键靶点;然后进行基因本体(Gene Ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)信号通路富集分析;Western blot法检测肺组织叉头状转录因子3(forkhead box protein,Foxp3)、维甲酸相关孤儿核受体γt(retinoic-acid-related orphan nuclear receptor gamma t,RORγt)蛋白表达。结果经过筛选,射干止咳胶囊中的木犀草素、野鸢尾黄素、异鼠李素、鸢尾甲黄素A、鸢尾甲黄素B、鸢尾黄素等多个关键活性成分,可能通过作用在蛋白质激酶Bα(protein kinase Bα,AKT1)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)等核心基因表达的蛋白上参与感染后咳嗽的治疗;KEGG富集分析所涉及的通路包括FoxO信号通路(FoxO signaling pathway)、IL-17信号通路(IL-17 signaling pathway)、Th17细胞分化(Th17 cell differentiation)、Th1和Th2细胞分化(Th1 and Th2 cell differentiation)、B细胞受体信号通路等;动物实验验证射干止咳胶囊可影响Foxp3、RORγt蛋白表达。结论射干止咳胶囊可以影响Foxp3、RORγt蛋白表达,调控Treg/Th17平衡通路发挥其抗炎作用,有效治疗感染后咳嗽。展开更多
文摘目的采用网络药理学与分子对接探讨莱菔及莱菔子防治痛风性关节炎(gouty arthritis,GA)的作用机制,并建立急性痛风性关节炎(acute gouty arthritis,AGA)大鼠模型进行验证。方法通过TCMSP、HERB数据库及文献查阅获得两味药潜在活性成分与治疗靶点,通过Genecards、OMIM、DisGeNET数据库获得GA靶点,利用VENNY2.1平台计算得出莱菔及莱菔子成分与GA的交集靶点。对交集靶点进行GO功能及KEGG通路富集分析。雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、雌性红莱菔(0.27 g·kg^(-1))+莱菔子(0.27 g·kg^(-1))组、美洛昔康组(0.66 mg·kg^(-1)),每组8只,踝关节注射单钠尿酸盐(monosodiumurate,MSU)混悬液建立AGA大鼠模型。采用游标卡尺测量大鼠踝关节直径,计算踝关节肿胀度;采用苏木素-伊红(HE)染色观察踝关节滑膜组织病理变化;采用ELISA、Western blotting检测踝关节滑膜组织中关键靶点和信号通路的表达。结果网络药理学共筛选出莱菔及莱菔子的10种活性成分及262个潜在靶点,GA相关靶点1949个,交集靶点87个,其中核心靶点13个,富集分析得出TNF通路、PI3K/AKT通路及癌症相关通路等,TNF通路是莱菔及莱菔子干预GA最有可能性的通路。大鼠踝关节注射MSU混悬液后明显肿胀(P<0.001),滑膜细胞坏死脱落,结缔组织重度增生,大量炎性细胞浸润,NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC)、半胱天冬酶-1(cysteinyl aspartate specific proteinase-1,caspase-1)、消皮素D(gasdermin D,GSDMD)、IL-1β、IL-18及TNF-α表达水平明显升高(P<0.001、P<0.01);雌性红莱菔及美洛昔康治疗后,有效缓解关节肿胀(P<0.001、P<0.01、P<0.05),关节滑膜坏死、炎性细胞浸润明显改善,同时显著抑制IL-1β、IL-18、TNF-α水平及NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD蛋白表达(P<0.001、P<0.01、P<0.05)。结论莱菔及莱菔子对AGA大鼠具有明显保护作用,其机制可能与抑制NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD蛋白表达,降低炎症因子(TNF-α等)水平,改善关节滑膜坏死、炎症细胞浸润相关。
