【目的】探讨猪链球菌2型超氧化物歧化酶A(SodA)、硫氧还蛋白A(TrxA)和TrxC基因在调控氧化应激和参与致病过程中的生物学功能。【方法】比较猪链球菌2型3个突变菌株ΔSodA、ΔTrxA和ΔTrxC对抗应激能力和毒力的调控作用。通过应激存活试...【目的】探讨猪链球菌2型超氧化物歧化酶A(SodA)、硫氧还蛋白A(TrxA)和TrxC基因在调控氧化应激和参与致病过程中的生物学功能。【方法】比较猪链球菌2型3个突变菌株ΔSodA、ΔTrxA和ΔTrxC对抗应激能力和毒力的调控作用。通过应激存活试验,分别检测SodA、TrxA和TrxC基因对不同氧化应激处理(0.04%过氧化氢(H 2O 2)、10 mol/L百草枯(PQ))的抗氧化应激能力以及不同温度(4、43℃)的抗温度应激能力;将不同基因缺失株与猪肠道上皮细胞(IPEC-J2)、小鼠巨噬细胞(RAW264.7)共培养,探究3个基因对细胞黏附和抗吞噬功能的影响;通过小鼠攻毒试验,测定各组织载菌量和血清抗氧化酶与肝功能指标,探明SodA、TrxA和TrxC基因在抗氧化应激以及致病过程中的作用。【结果】抗应激试验结果显示,在不同氧化应激和不同温度应激条件下,ΔSodA和ΔTrxC菌株存活能力均极显著低于野生菌株(P<0.01),ΔTrxA菌株在43℃高温刺激下存活能力极显著低于野生菌株(P<0.01)。细胞黏附试验结果显示,SodA和TrxA基因缺失导致细菌黏附能力降低55%~65%,极显著低于野生菌株(P<0.01)。细胞抗吞噬试验结果显示,ΔSodA、ΔTrxC和ΔTrxA菌株在吞噬细胞中的存活率极显著或显著低于野生菌株(P<0.01;P<0.05)。动物攻毒试验结果显示,与野生菌株相比,ΔSodA、ΔTrxA和ΔTrxC菌株毒力均极显著下降(P<0.01);ΔSodA、ΔTrxA和ΔTrxC菌株组小鼠死亡率分别为10%、50%和20%,组织载菌量分别为3.6 lg CFU/g~4.4 lg CFU/g、4.2 lg CFU/g~5.1 lg CFU/g和3.1 lg CFU/g~4.1 lg CFU/g;野生菌株组小鼠死亡率为90%,组织载菌量为6.4 lg CFU/g~7.8 lg CFU/g。小鼠感染ΔSodA、ΔTrxC和ΔTrxA菌株后血清中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和总抗氧化能力(T-AOC)极显著高于野生菌株(P<0.01),天门冬氨酸转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)和碱性磷酸酶(ALP)活性极显著低于野生菌株(P<0.01)。【结论】猪链球菌2型SodA和TrxC基因通过中和菌体内超氧根离子和维持蛋白稳态对抗氧化应激引起的损伤,从而介导细菌毒力,而TrxA可能作为一个调控基因参与抗氧化应激反应。展开更多
猪细小病毒1型(porcine parvovirus type 1,PPV1)是母猪繁殖失败的主要病原体,即通常所称的猪细小病毒。2001—2016年,在猪体相继鉴定出了6种新型猪细小病毒,分别被命名为猪细小病毒2~7型(PPV2~PPV7型)。为确定中国江苏地区PPV1~PPV7型...猪细小病毒1型(porcine parvovirus type 1,PPV1)是母猪繁殖失败的主要病原体,即通常所称的猪细小病毒。2001—2016年,在猪体相继鉴定出了6种新型猪细小病毒,分别被命名为猪细小病毒2~7型(PPV2~PPV7型)。为确定中国江苏地区PPV1~PPV7型感染情况和遗传变异特征,采用PPV1~PPV7型常规PCR检测方法,从江苏地区猪场收集到2株PPV1、2株PPV2,以及PPV3、PPV4、PPV5、PPV6、PPV7各1株阳性组织病料,对这9株阳性组织病料进行全基因组测序,采用生物信息分析软件与GenBank中PPV1~PPV7型参考毒株进行比较,系统分析全基因组和衣壳蛋白2(VP2)的遗传进化分子特征。结果表明,PPV1~PPV7型测序毒株与GenBank中同型毒株全基因组同源性均高于97%,而不同型基因组间同源性均小于60.40%。PPV1~PPV7型测序毒株的VP2氨基酸序列与同型毒株同源性均高于97%,但不同型毒株之间差异巨大,PPV4与PPV5有55%同源性,其他毒株之间同源性更低,仅为9%~17%。毒力分析结果表明,2株PPV1流行株与PPV1强毒株Kresse存在相似的毒力位点,且存在5处特有的突变,可能为高毒力毒株。研究结果有助于更好地了解中国猪群中PPV1~PPV7型分子流行病学并制定科学的防治措施。展开更多
文摘【目的】探讨猪链球菌2型超氧化物歧化酶A(SodA)、硫氧还蛋白A(TrxA)和TrxC基因在调控氧化应激和参与致病过程中的生物学功能。【方法】比较猪链球菌2型3个突变菌株ΔSodA、ΔTrxA和ΔTrxC对抗应激能力和毒力的调控作用。通过应激存活试验,分别检测SodA、TrxA和TrxC基因对不同氧化应激处理(0.04%过氧化氢(H 2O 2)、10 mol/L百草枯(PQ))的抗氧化应激能力以及不同温度(4、43℃)的抗温度应激能力;将不同基因缺失株与猪肠道上皮细胞(IPEC-J2)、小鼠巨噬细胞(RAW264.7)共培养,探究3个基因对细胞黏附和抗吞噬功能的影响;通过小鼠攻毒试验,测定各组织载菌量和血清抗氧化酶与肝功能指标,探明SodA、TrxA和TrxC基因在抗氧化应激以及致病过程中的作用。【结果】抗应激试验结果显示,在不同氧化应激和不同温度应激条件下,ΔSodA和ΔTrxC菌株存活能力均极显著低于野生菌株(P<0.01),ΔTrxA菌株在43℃高温刺激下存活能力极显著低于野生菌株(P<0.01)。细胞黏附试验结果显示,SodA和TrxA基因缺失导致细菌黏附能力降低55%~65%,极显著低于野生菌株(P<0.01)。细胞抗吞噬试验结果显示,ΔSodA、ΔTrxC和ΔTrxA菌株在吞噬细胞中的存活率极显著或显著低于野生菌株(P<0.01;P<0.05)。动物攻毒试验结果显示,与野生菌株相比,ΔSodA、ΔTrxA和ΔTrxC菌株毒力均极显著下降(P<0.01);ΔSodA、ΔTrxA和ΔTrxC菌株组小鼠死亡率分别为10%、50%和20%,组织载菌量分别为3.6 lg CFU/g~4.4 lg CFU/g、4.2 lg CFU/g~5.1 lg CFU/g和3.1 lg CFU/g~4.1 lg CFU/g;野生菌株组小鼠死亡率为90%,组织载菌量为6.4 lg CFU/g~7.8 lg CFU/g。小鼠感染ΔSodA、ΔTrxC和ΔTrxA菌株后血清中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和总抗氧化能力(T-AOC)极显著高于野生菌株(P<0.01),天门冬氨酸转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)和碱性磷酸酶(ALP)活性极显著低于野生菌株(P<0.01)。【结论】猪链球菌2型SodA和TrxC基因通过中和菌体内超氧根离子和维持蛋白稳态对抗氧化应激引起的损伤,从而介导细菌毒力,而TrxA可能作为一个调控基因参与抗氧化应激反应。
文摘猪细小病毒1型(porcine parvovirus type 1,PPV1)是母猪繁殖失败的主要病原体,即通常所称的猪细小病毒。2001—2016年,在猪体相继鉴定出了6种新型猪细小病毒,分别被命名为猪细小病毒2~7型(PPV2~PPV7型)。为确定中国江苏地区PPV1~PPV7型感染情况和遗传变异特征,采用PPV1~PPV7型常规PCR检测方法,从江苏地区猪场收集到2株PPV1、2株PPV2,以及PPV3、PPV4、PPV5、PPV6、PPV7各1株阳性组织病料,对这9株阳性组织病料进行全基因组测序,采用生物信息分析软件与GenBank中PPV1~PPV7型参考毒株进行比较,系统分析全基因组和衣壳蛋白2(VP2)的遗传进化分子特征。结果表明,PPV1~PPV7型测序毒株与GenBank中同型毒株全基因组同源性均高于97%,而不同型基因组间同源性均小于60.40%。PPV1~PPV7型测序毒株的VP2氨基酸序列与同型毒株同源性均高于97%,但不同型毒株之间差异巨大,PPV4与PPV5有55%同源性,其他毒株之间同源性更低,仅为9%~17%。毒力分析结果表明,2株PPV1流行株与PPV1强毒株Kresse存在相似的毒力位点,且存在5处特有的突变,可能为高毒力毒株。研究结果有助于更好地了解中国猪群中PPV1~PPV7型分子流行病学并制定科学的防治措施。
