目的为快速检测微小隐孢子虫,建立并优化了以SYBR Green I显色的环介导等温扩增快速检测隐孢子虫的方法。方法根据微小隐孢子虫18SrRNA基因的4条特异LAMP引物,设计2条环引物,建立了微小隐孢子虫LAMP检测方法。结果该方法省去95℃热变性...目的为快速检测微小隐孢子虫,建立并优化了以SYBR Green I显色的环介导等温扩增快速检测隐孢子虫的方法。方法根据微小隐孢子虫18SrRNA基因的4条特异LAMP引物,设计2条环引物,建立了微小隐孢子虫LAMP检测方法。结果该方法省去95℃热变性和80℃酶失活过程,其最佳反应温度和时间是63℃和60min,Betaine、MgSO4、dNTP Mixture、Bst DNA聚合酶大片段的最佳浓度分别是0.8mol/L、8mmol/L、0.8mmol/L、8U/25μL,内外引物浓度分别为1.2μmol/L、0.2μmol/L,添加环引物后体系反应时间缩短为20min。对贾第虫、肠阿米巴、柔嫩艾美耳球虫、类圆线虫检测为阴性。该方法简便、快速,无需特殊设备。结论和常规PCR方法比较,LAMP检测隐孢子虫的灵敏度提高了100倍。该方法的建立为野外和临床隐孢子虫的快速检测提供技术手段。展开更多
文摘目的为快速检测微小隐孢子虫,建立并优化了以SYBR Green I显色的环介导等温扩增快速检测隐孢子虫的方法。方法根据微小隐孢子虫18SrRNA基因的4条特异LAMP引物,设计2条环引物,建立了微小隐孢子虫LAMP检测方法。结果该方法省去95℃热变性和80℃酶失活过程,其最佳反应温度和时间是63℃和60min,Betaine、MgSO4、dNTP Mixture、Bst DNA聚合酶大片段的最佳浓度分别是0.8mol/L、8mmol/L、0.8mmol/L、8U/25μL,内外引物浓度分别为1.2μmol/L、0.2μmol/L,添加环引物后体系反应时间缩短为20min。对贾第虫、肠阿米巴、柔嫩艾美耳球虫、类圆线虫检测为阴性。该方法简便、快速,无需特殊设备。结论和常规PCR方法比较,LAMP检测隐孢子虫的灵敏度提高了100倍。该方法的建立为野外和临床隐孢子虫的快速检测提供技术手段。
