文摘目的探讨苯甲酰乌头碱(benzoylaconitine,BAC)对H9c2心肌细胞氧糖剥夺(oxygen glucose deprivation,OGD)/复氧(reoxyenation,R)损伤的保护作用。方法体外培养建立H9c2心肌细胞OGD/R损伤模型,通过不同浓度(0、25、50、75、100μmol/L)BAC处理,确定最佳BAC治疗浓度。根据BAC最佳剂量,将心肌细胞分为对照组、OGD/R组、BAC处理组(OGD/R+75μmol/L BAC组)、PI3K/Akt抑制剂组(OGD/R+LY294002组)以及BAC和PI3K/Akt抑制剂组(OGD/R+LY294002+75μmol/L BAC组)。通过相关试剂盒评估细胞活力及细胞乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)水平;检测细胞肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-1β、丙二醛(malondialdehyde,MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)的表达。蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)通路蛋白和微管相关蛋白1轻链3(light chain 3,LC3)Ⅱ/LC3Ⅰ、苄氯素1(Beclin1)和自噬降解底物(P62)等自噬相关蛋白的表达情况。结果与对照组比较,OGD/R组细胞活力显著下降,LDH显著升高(P<0.01);与OGD/R组比较,OGD/R+75μmol/L BAC组H9c2心肌细胞活力显著升高(0.87±0.06 vs 0.49±0.06,P<0.01),ODG/R+75μmol/L BAC组LDH水平显著下降(86.75±7.79 U/L vs 234.42±6.20 U/L,P<0.01)。与对照组比较,OGD/R组TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1表达显著升高(P<0.01),OGD/R组GSH-Px、p-PI3K、p-Akt、P62表达显著降低(P<0.01);与OGD/R组比较,OGD/R+75μmol/L BAC组p-PI3K、p-Akt、P62蛋白表达显著升高(0.90±0.07 vs 0.58±0.04、1.02±0.02 vs 0.49±0.01、1.48±0.05 vs 0.87±0.04),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1表达显著降低(0.52±0.01 vs 1.24±0.04、0.12±0.01 vs 0.32±0.02,P<0.01)。结论BAC能够降低OGD/R后心肌细胞炎性反应和氧化应激水平,调节细胞自噬稳态,降低心肌细胞损伤,其调节心肌自噬稳态的作用可能与PI3K/Akt通路的激活有关。
