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黑曲霉C112脂肪酶基因的克隆及异源表达优化
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作者 徐鹏钧 曾柏全 +5 位作者 肖志红 李美群 张轩 李培旺 赵茜彤 颜丽安 《中国油脂》 北大核心 2025年第4期73-81,共9页
旨在为脂肪酶的改性及其工业化应用提供参考,基于黑曲霉C112菌株通过PCR扩增得到脂肪酶基因,对该基因进行了生物信息学分析,并运用基因工程技术构建了毕赤酵母GS115重组菌,对该重组菌诱导产生的脂肪酶进行了纯化,分析了该脂肪酶的酶学性... 旨在为脂肪酶的改性及其工业化应用提供参考,基于黑曲霉C112菌株通过PCR扩增得到脂肪酶基因,对该基因进行了生物信息学分析,并运用基因工程技术构建了毕赤酵母GS115重组菌,对该重组菌诱导产生的脂肪酶进行了纯化,分析了该脂肪酶的酶学性质,并通过单因素实验和响应面实验对该重组菌产酶条件进行了优化。结果表明:该脂肪酶基因片段长度为894 bp,理论分子质量为31.79 kDa,其氨基酸序列中存在一个新的五肽基序RHSLG;该脂肪酶最适反应温度和pH分别为40℃和4,具有良好的热稳定性和pH稳定性;重组菌最佳产酶条件为YNB添加量10.50 mL(100 mL BMMY培养基中)、接种量4.3%、每隔24 h添加1%甲醇、培养时间2.8 d,优化条件下所得重组脂肪酶活性达到78.92 U/mL,是优化前的1.79倍。综上,经克隆、异源表达优化的重组脂肪酶稳定性强、酶活性高。 展开更多
关键词 黑曲霉C112 脂肪酶 毕赤酵母 生物信息学 克隆
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微藻油脂合成的转录调控研究进展 被引量:1
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作者 张艺博 薛永常 刘长斌 《中国油脂》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期97-102,126,共7页
生物燃料是传统化石燃料的理想替代品,微藻是生产生物燃料的优良原料,通过对微藻油脂合成和调控的了解,能够有效提高微藻生产生物柴油的效率。转录因子是一种具有特殊功能结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子,在复杂的油脂合成代谢... 生物燃料是传统化石燃料的理想替代品,微藻是生产生物燃料的优良原料,通过对微藻油脂合成和调控的了解,能够有效提高微藻生产生物柴油的效率。转录因子是一种具有特殊功能结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子,在复杂的油脂合成代谢过程中,转录因子能对代谢过程中多个酶系进行集体调控,从而促进藻细胞中油脂积累。从微藻油脂的合成途径出发,简要介绍了合成途径中的关键酶,重点综述了bZIP、MYB、Dof、bHLH转录因子对于微藻油脂合成的调控影响。微藻油脂合成涉及多个亚细胞单位的多条途径,是一个十分复杂的代谢网络过程,通过基因工程手段改变合成途径中相关酶的表达可以增加微藻中油脂积累。 展开更多
关键词 微藻 转录因子 转录调控 油脂积累
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植物SWEET基因及其糖转运功能研究进展 被引量:1
3
作者 王鸿梅 张召聪 +4 位作者 刘坤 薛芳 韩洁 赵慧 陈四龙 《河北科技大学学报》 CAS 北大核心 2024年第4期406-414,共9页
SWEET(sugars will eventually be exported transporter)是一类介导蔗糖或己糖通过顺浓度梯度被动扩散跨细胞膜转运的新型糖转运蛋白。植物SWEET蛋白包括7个跨膜结构域,其中包含2个MtN3/Saliva结构域,可分为4个进化分支。SWEET转运蛋... SWEET(sugars will eventually be exported transporter)是一类介导蔗糖或己糖通过顺浓度梯度被动扩散跨细胞膜转运的新型糖转运蛋白。植物SWEET蛋白包括7个跨膜结构域,其中包含2个MtN3/Saliva结构域,可分为4个进化分支。SWEET转运蛋白在多种生理和生化过程中发挥着关键作用,包括韧皮部装载、激素运输、营养和生殖生长等。结合当前SWEET转运蛋白的研究进展,重点总结了SWEET的发现、蛋白结构及其在糖转运中的生物学功能,指出目前植物SWEET基因研究面临的问题,并对未来SWEET蛋白的研究重点进行了展望:1)探究SWEET蛋白的底物识别机制;2)挖掘提高作物产量和品质的关键SWEET基因;3)利用SWEET基因编辑和磷酸化等策略改良作物产量和品质。 展开更多
关键词 基因工程 糖转运 SWEET 蛋白结构 生物学功能
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扩张型心肌病动物模型及治疗的研究进展 被引量:2
4
作者 金佳敏 巩倩 庄乐南 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期1-11,共11页
扩张型心肌病(dilated cardiomyopathy,DCM)是一类以一侧或双侧心室扩张和收缩功能障碍为特征的心血管疾病,发病原因包括遗传性的基因突变及多种继发因素。人类DCM动物模型涉及小鼠、大鼠、斑马鱼、猪等多种实验动物,一般通过基因编辑... 扩张型心肌病(dilated cardiomyopathy,DCM)是一类以一侧或双侧心室扩张和收缩功能障碍为特征的心血管疾病,发病原因包括遗传性的基因突变及多种继发因素。人类DCM动物模型涉及小鼠、大鼠、斑马鱼、猪等多种实验动物,一般通过基因编辑、药物诱导、自身免疫缺陷诱导、病毒感染等方法构建。借助DCM动物模型,研究者对该病的致病机制和治疗靶点进行了深入的研究。本文简述了人类DCM的病理特征、临床症状和流行病学特征,对近年来DCM动物模型的种类和构建方法进行了综述,并对优化造模方法与推动治疗研究提出了新的展望。基于DCM动物模型的治疗研究可以帮助我们更好地理解DCM的发生机制,为开发新的治疗方法提供依据。 展开更多
关键词 扩张型心肌病 疾病动物模型 生物治疗 基因编辑
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鸡的FETUB基因真核表达载体的构建及其在LMH细胞中的表达
5
作者 刘晨 徐庶勋 +5 位作者 魏志恒 彭鑫 刘世昊 徐璐 郁建锋 顾志良 《常熟理工学院学报》 2024年第2期39-45,共7页
胎球蛋白B(FETUB)是一种新型的脂肪因子/肝因子,是由肝脏产生并释放入血液的半胱氨酸蛋白酶抑制剂,其在糖脂代谢中起重要作用.本研究目的是构建鸡的FETUB基因真核表达载体,在LMH细胞过表达FETUB后研究其对其他脂类相关基因表达的影响.... 胎球蛋白B(FETUB)是一种新型的脂肪因子/肝因子,是由肝脏产生并释放入血液的半胱氨酸蛋白酶抑制剂,其在糖脂代谢中起重要作用.本研究目的是构建鸡的FETUB基因真核表达载体,在LMH细胞过表达FETUB后研究其对其他脂类相关基因表达的影响.采用荧光定量PCR检测FETUB基因在鸡各种不同组织中的表达量,以肝脏组织总RNA为模板,RT-PCR扩增鸡FETUB基因编码区,并构建真核表达重组载体,转染LMH细胞后分别提取总蛋白和总RNA,Western Blot检测重组蛋白表达,荧光定量PCR检测脂类代谢相关基因的表达.结果显示,FETUB基因在鸡11种不同组织中有表达,其中在肝脏中表达量极高,小肠和肾脏中表达较高,而在肌胃、脾脏、脂肪中表达量较低.通过RT-PCR获得鸡FETUB基因CDS,构建真核表达载体pCMV-3Tag-9-ggaFETUB,在LMH中成功融合表达FETUB-MYC.FETUB基因过表达使LMH细胞LPL和ITIH2基因表达均显著下调,而对APOA4、DGAT2、FASN、ACACA四个基因的表达没有显著影响.研究结果表明FETUB基因通过抑制LPL和ITIH2基因表达来影响脂类代谢,为进一步分析鸡的FETUB基因的功能奠定基础. 展开更多
关键词 FETUB基因 真核表达 LPL基因 ITIH2基因
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高产肌醇-1-磷酸合酶大肠杆菌重组工程菌的构建及其产肌醇发酵条件优化
6
作者 易明花 任国平 +1 位作者 胡琼 钱蒙蒙 《中国酿造》 CAS 北大核心 2024年第12期143-148,共6页
该研究以酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)SC288基因组为模版,利用基因工程技术克隆肌醇合成途径关键酶肌醇-1-磷酸合酶(IPS)的表达基因INO1,以质粒pETDuet-1为载体,构建重组质粒pETDuet-INO1,导入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21,... 该研究以酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)SC288基因组为模版,利用基因工程技术克隆肌醇合成途径关键酶肌醇-1-磷酸合酶(IPS)的表达基因INO1,以质粒pETDuet-1为载体,构建重组质粒pETDuet-INO1,导入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21,构建重组菌株E.coli BL21/pETDuet-INO1,实现IPS在大肠杆菌高效表达,并采用单因素试验及正交试验对其产肌醇的发酵条件进行优化。结果表明,成功构建重组大肠杆菌E.coli BL21/pETDuet-INO1,其发酵产肌醇的最佳工艺条件为:初始葡萄糖添加量12 g/L,诱导温度28℃,接种量3%。在此条件下进行诱导发酵24 h,肌醇产量高达(0.81±0.007)g/L,比优化前提高60.39%。 展开更多
关键词 大肠杆菌 肌醇-1-磷酸合酶 基因工程 肌醇 正交试验 发酵条件
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人C/EBP β结构与功能的生物信息学分析及原核表达
7
作者 陈利荣 刘玉玲 +2 位作者 贾艳梅 李佳佳 刘菲 《山西医科大学学报》 CAS 2024年第6期707-712,共6页
目的 研究人CCAAT/增强子结合蛋白β(CCAAT/enhancer binding proteins, C/EBP β)原核表达载体的构建和蛋白表达,并通过生物信息学分析其结构和生物学功能。方法 收集对数生长期的肝癌细胞SMMC-7721,通过TRIzol法提取SMMC-7721细胞内总... 目的 研究人CCAAT/增强子结合蛋白β(CCAAT/enhancer binding proteins, C/EBP β)原核表达载体的构建和蛋白表达,并通过生物信息学分析其结构和生物学功能。方法 收集对数生长期的肝癌细胞SMMC-7721,通过TRIzol法提取SMMC-7721细胞内总RNA,并以RNA为模板采用RT-PCR获得C/EBP β基因的编码序列,通过同源重组的方法将目的基因与原核表达质粒pET-28a(+)相连接,经过大肠杆菌转化、抗性筛选、质粒提取、酶切和DNA测序获得重组质粒pET-28a(+)-C/EBP β。将重组质粒导入大肠杆菌BL21中,通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl β-D-1-thiogal, IPTG)诱导C/EBP β重组蛋白表达,采用镍离子亲和层析法纯化C/EBP β融合蛋白,通过蛋白免疫印迹验证目的蛋白并分析C/EBP β的蛋白纯度。同时对人C/EBP β编码的蛋白质进行理化性质、亲水/疏水性、二级结构以及磷酸化位点等生物信息学分析。结果 通过RT-PCR成功获得人C/EBP β基因,构建的pET-28a(+)-C/EBP β重组质粒经测序鉴定C/EBP β DNA序列完全正确,表明重组pET-28a(+)-C/EBP β质粒构建成功。C/EBP β蛋白是一个性质不稳定的亲水蛋白质,由345个氨基酸组成,分子量为36.105 kD,等电点为8.55。其是一种胞内蛋白质,主要分布在细胞质和细胞核。对其结构分析发现:无规则卷曲是其主要的二级结构,为60.87%。蛋白免疫印迹结果显示通过亲和层析纯化后获得较高纯度的C/EBP β。结论 本实验成功克隆并构建人pET-28a(+)-C/EBP β重组质粒,获得较高纯度的C/EBP β,为进一步C/EBP β蛋白功能的研究和抗体的制备奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 C/EBPΒ 重组质粒 原核表达 生物信息学 翻译后修饰
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实时荧光聚合酶链式反应检测转基因小麦B73-6-1、B72-8-11b和B102-1-2品系 被引量:7
8
作者 曹际娟 徐君怡 +3 位作者 曹冬梅 张丕桥 栾凤侠 刘洋 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第8期156-159,共4页
目的:建立实时荧光聚合酶链式反应检测转基因小麦B73-6-1、B72-8-11b和B102-1-2品系的鉴定方法。方法:以转基因小麦B73-6-1、B72-8-11b和B102-1-2为研究对象,在转基因小麦外源片段与小麦染色体重组的边界序列分别设计引物和探针,以其他... 目的:建立实时荧光聚合酶链式反应检测转基因小麦B73-6-1、B72-8-11b和B102-1-2品系的鉴定方法。方法:以转基因小麦B73-6-1、B72-8-11b和B102-1-2为研究对象,在转基因小麦外源片段与小麦染色体重组的边界序列分别设计引物和探针,以其他多种转基因产品和非转基因小麦为对照进行特异性实验,以B73-6-1样品模拟制备10个含量梯度的添加样品进行灵敏度实验。结果:本研究设计的引物和探针具有很好的品系鉴定特异性,检测灵敏度可达到0.01%(m/m)。结论:该方法特异性好、灵敏度高,可快速、准确地鉴定转基因小麦B73-6-1、B72-8-11b和B102-1-2品系。 展开更多
关键词 转基因小麦 B73-6-1 B72-8-11b B102-1-2 品系鉴定 实时荧光聚合酶链式反应
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转基因猪技术及其在农业上的应用 被引量:8
9
作者 曾芳 李紫聪 +2 位作者 董锐 吴珍芳 王翀 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期218-224,共7页
转基因猪技术不仅可用于猪的育种,还可应用于生物医药领域。该技术对养猪业生产水平的提高和人类健康的改善均有重要的应用价值。本文从转基因猪制备所需的显微操作技术和介导外源基因整合方法两方面对转基因猪技术的研究进展进行综述,... 转基因猪技术不仅可用于猪的育种,还可应用于生物医药领域。该技术对养猪业生产水平的提高和人类健康的改善均有重要的应用价值。本文从转基因猪制备所需的显微操作技术和介导外源基因整合方法两方面对转基因猪技术的研究进展进行综述,并简要概括转基因猪技术在农业领域的应用现状。 展开更多
关键词 转基因 显微注射 基因打靶
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br基因的克隆及表达 被引量:12
10
作者 李凌 吴敏 +1 位作者 乔守怡 陈抗生 《浙江大学学报(工学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2001年第3期324-327,共4页
细菌视紫红质 ( Bacteriorhodopsin,BR)是嗜盐菌细胞膜上唯一的一种光能转换色素蛋白 ,BR以视黄醛 ( retinal)作辅基 ,在光诱导下吸收光子后会产生一系列的光循环中间体 ,最后又回到原始状态 .由于 BR这种独特的分子结构和光循环过程 ,... 细菌视紫红质 ( Bacteriorhodopsin,BR)是嗜盐菌细胞膜上唯一的一种光能转换色素蛋白 ,BR以视黄醛 ( retinal)作辅基 ,在光诱导下吸收光子后会产生一系列的光循环中间体 ,最后又回到原始状态 .由于 BR这种独特的分子结构和光循环过程 ,及其作为一种具有光敏特性的蛋白质生物分子 ,可通过生物学技术进行改造 ,正引起光子学研究及生物学研究领域的高度注意 .从 Genbank查询 br基因的全序列 ,然后采用聚合酶链反应 ( Polymerase chain reaction,PCR)技术 ,采用 DNA star软件辅助设计了上下游引物 ,以嗜盐菌 ( H alobactrium H alobium)的基因组 DNA为模板克隆获得了完整的细菌视紫红质基因 br,并且将经测序鉴定的 br基因重组到原核高效表达载体 p GEX- 4 T- 2中 ,转化大肠杆菌 E.coli.,将阳性转化子经 IPTG诱导表达获得 BR与 GST(谷胱苷肽转移酶 )的融合蛋白后 ,提取蛋白进行 SDS-PAGE电泳、Western印迹反应 ,检测表达结果为阳性 ,且表达蛋白的大小与预想的一致 . 展开更多
关键词 细菌视紫红质BR 克隆 表达
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小菜蛾moricin在毕赤酵母中的表达及抑菌活性分析 被引量:5
11
作者 黄钦耿 梁玲 +2 位作者 陈巧红 吴松刚 黄建忠 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第16期36-42,共7页
抗生素的过度使用给自然生态带来诸多不利影响,寻找合适的抗生素的替代物,从而减少抗生素的使用正成为当下的研究热点。以来自于小菜蛾的特异性抗菌肽moricin为研究对象,研究其酵母异源表达水平和抑菌性能及生化特性,为进一步的开发利... 抗生素的过度使用给自然生态带来诸多不利影响,寻找合适的抗生素的替代物,从而减少抗生素的使用正成为当下的研究热点。以来自于小菜蛾的特异性抗菌肽moricin为研究对象,研究其酵母异源表达水平和抑菌性能及生化特性,为进一步的开发利用提供理论支持。根据已有的小菜蛾抗菌肽moricin特异性基因信息,采用聚合酶链式反应扩增其成熟肽基因mor-3,并克隆至pGAPZαA质粒中,构建组成型分泌表达载体pGAPZαA-mor3,线性化片段电转化导入毕赤酵母SMD1168菌株,高质量浓度Zeocin筛选获得高拷贝重组转化子。以YPD为培养基进行摇瓶发酵,重组蛋白获得高效表达,分子质量约为5kD,与理论预测的基本一致;发酵60 h,上清液中重组蛋白表达量达248.98 mg/L,而且耐热性能良好,同时具备较强的耐强酸及强碱的能力,特别在强酸环境中活性保持稳定,体现了较好的机体内环境的适应性潜力;对部分革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均具有抑菌作用,特别是对革兰氏阴性菌具备特异性较强的抑制作用,对大肠杆菌的最低抑菌浓度为6.25μg/mL,而对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度仅为124.49μg/mL。独特的抑菌性能和理化特点,使其具备广阔的开发应用前景及良好的社会与环保效益。 展开更多
关键词 抗菌肽 moricin 毕赤酵母 高效表达 抑菌活性 生化特性
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不产桔霉素高产红曲色素的基因工程红曲菌株构建 被引量:11
12
作者 李琦 高健信 +1 位作者 陈福生 李牧 《中国酿造》 CAS 北大核心 2018年第6期30-35,共6页
以一株高产红曲色素的紫色红曲菌(Monascus purpureus)J01为研究对象,采用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的T-DNA转化技术,敲除紫色红曲菌株J01基因组中的桔霉素合成关键基因pksCT,构建一株不产桔霉素高产红曲色素的红曲菌... 以一株高产红曲色素的紫色红曲菌(Monascus purpureus)J01为研究对象,采用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的T-DNA转化技术,敲除紫色红曲菌株J01基因组中的桔霉素合成关键基因pksCT,构建一株不产桔霉素高产红曲色素的红曲菌株。结果表明,通过菌落形态观察和生物量测定得出,菌株J42与菌株J01的菌落形态及生物量无显著性差异(P>0.05);经高效液相色谱(HPLC)与液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)分析得出,菌株J01的桔霉素含量为5.1 mg/kg,pksCT基因敲除菌株J42菌丝体中未检测到桔霉素;菌株J42的黄色素,橙色素和红色素色价分别为1 877 U/g、773 U/g、1 068 U/g,显著高于菌株J01(P<0.01),并且菌株J42的红曲色素总色价为415 U/mL,是原始菌株的1.56倍,成功构建了一株不产桔霉素高产红曲色素的生产菌株J42。 展开更多
关键词 紫色红曲菌 红曲色素 桔霉素 pksCT基因 基因敲除
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桑椹总RNA抽提方法的比较 被引量:8
13
作者 周向红 易乐飞 王萍 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第12期209-212,共4页
为对比CTAB改良法、E.Z.N.A.TM总RNA抽提试剂盒Ⅱ、EZ-10柱式总RNA抽提试剂盒和异硫氰酸胍法4种方法抽提桑椹总RNA的效果,对该4种方法抽提后的总RNA进行纯度、得率和完整性检测以及进一步的RT-PCR检测。结果显示:CTAB改良法和E.Z.N.A.TM... 为对比CTAB改良法、E.Z.N.A.TM总RNA抽提试剂盒Ⅱ、EZ-10柱式总RNA抽提试剂盒和异硫氰酸胍法4种方法抽提桑椹总RNA的效果,对该4种方法抽提后的总RNA进行纯度、得率和完整性检测以及进一步的RT-PCR检测。结果显示:CTAB改良法和E.Z.N.A.TM总RNA抽提试剂盒Ⅱ均适用于桑椹总RNA抽提,获得的总RNA纯度高、得率高、完整性好,完全可用于后续的分子生物学实验;但两者相比,CTAB改良法成本更低,操作更简单。 展开更多
关键词 桑椹 总RNA 抽提 方法比较 多酚 多糖
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盐度胁迫下口虾蛄Mn-SOD基因的表达分析 被引量:5
14
作者 刘海映 张红 +3 位作者 陈雷 邢坤 于晓明 田燚 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期17-21,共5页
利用实时定量PCR技术,分析了Z9~Z11期口虾蛄Oratosquilla oratoria Mn-SOD基因在不同盐度胁迫下的表达情况.试验共设置8组,盐度分别为12.8、16.3、19.8、23.3、26.8(对照组)、30.3、33.8、37.3,各组均在盐度胁迫后的1.5、3、6、9、12... 利用实时定量PCR技术,分析了Z9~Z11期口虾蛄Oratosquilla oratoria Mn-SOD基因在不同盐度胁迫下的表达情况.试验共设置8组,盐度分别为12.8、16.3、19.8、23.3、26.8(对照组)、30.3、33.8、37.3,各组均在盐度胁迫后的1.5、3、6、9、12、24、36、48、72 h取样.结果表明:在盐度胁迫时间为6、9、12、48、72 h时,各盐度组口虾蛄Mn-SOD基因的表达量总体上极显著或显著低于对照组(P<0.01或P<0.05),且与对照组盐度差值小的23.3、30.3两个盐度组,Mn-SOD基因表达量总体上均高于极高盐度(37.3)和极底盐度(12.8)组,在胁迫时间为24、36 h时,除12.8、16.3两个低盐度组外,其余盐度组Mn-SOD基因的表达量总体上极显著高于对照组(P<0.01);除极高和极低盐度组外,其余盐度组Mn-SOD基因的表达量均随着胁迫时间的延长总体上呈先降低再升高再逐步降低的变化趋势,盐度为12.8、16.3、19.8、23.3、30.3、33.8、37.3的各试验组,Mn-SOD基因最大表达量的时间点分别为6、12、24、24、24、24、24h.研究表明,各试验盐度组口虾蛄在72 h内对盐度胁迫的适应总趋势为不适应—最不适应—逐步适应—不适应. 展开更多
关键词 口虾蛄 Mn-SOD基因 盐度胁迫 基因表达
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牛凝乳酶原基因在食品级乳酸乳球菌中的重组表达 被引量:4
15
作者 张艳丽 聂春明 +3 位作者 周利伟 张伟 张宇宏 杨晓红 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第7期123-127,共5页
将牛凝乳酶原基因连接pNZ8149载体,并转化乳酸乳球菌NZ3900,经乳酸链球菌素Nisin诱导,测得重组菌株胞内凝乳酶活力达到0.7 SU/mL,培养基中检测不到凝乳酶活力,实现了牛凝乳酶原基因在乳酸链球菌Nisin诱导基因表达系统(nisin controlled ... 将牛凝乳酶原基因连接pNZ8149载体,并转化乳酸乳球菌NZ3900,经乳酸链球菌素Nisin诱导,测得重组菌株胞内凝乳酶活力达到0.7 SU/mL,培养基中检测不到凝乳酶活力,实现了牛凝乳酶原基因在乳酸链球菌Nisin诱导基因表达系统(nisin controlled gene expression system,NICE)中活性表达。在此基础上,将分泌信号肽SPusp45连接于pNZ8149,构建了分泌型表达载体pNZ8149s,并实现牛凝乳酶原基因在NICE系统中分泌表达。当使用1 ng/mL Nisin诱导5 h后,重组菌株胞内检测不到凝乳酶活力,培养基中凝乳酶活力为1.2 SU/mL,说明pNZ8149s能够促使凝乳酶原从乳酸乳球菌中分泌。该方法为重组牛凝乳酶在食品级菌株中重组表达提供了一种可行的方案。 展开更多
关键词 凝乳酶 乳酸乳球菌 食品级 表达
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根癌农杆菌介导脂肪酶在无孢黑曲霉中的高效表达 被引量:3
16
作者 潘力 王云艳 +2 位作者 王斌 何攀 李俊星 《华南理工大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第5期84-89,共6页
黑曲霉(Aspergillus niger)具有高效的蛋白表达和分泌能力.为实现异源蛋白在无孢黑曲霉中的高效重组表达,在优化遗传筛选标记的基础上,建立了根癌农杆菌介导的、以潮霉素抗性基因为筛选标记的黑曲霉转化体系.利用该体系介导米黑根毛霉... 黑曲霉(Aspergillus niger)具有高效的蛋白表达和分泌能力.为实现异源蛋白在无孢黑曲霉中的高效重组表达,在优化遗传筛选标记的基础上,建立了根癌农杆菌介导的、以潮霉素抗性基因为筛选标记的黑曲霉转化体系.利用该体系介导米黑根毛霉脂肪酶(RML)转化黑曲霉SH-1,通过PCR鉴定、酶活检测、镍柱亲和层析及SDS-PAGE电泳检测等确定成功获得了RML的黑曲霉转化子,并通过发酵条件优化实现了RML的高效表达,对硝基苯酚比色法测得转化子酶活最高可达15 U/mL,是其在酵母中表达水平的10倍以上. 展开更多
关键词 无孢黑曲霉 根癌农杆菌介导转化 米黑根毛霉脂肪酶 基因表达
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高光学纯度L-乳酸工程菌的构建及其蔗糖发酵 被引量:6
17
作者 赵筱 李坤朋 +2 位作者 赵锦芳 王永泽 王金华 《食品与发酵科技》 CAS 2012年第5期40-45,共6页
本研究以可利用蔗糖发酵产D-乳酸的工程菌WD 206为出发菌株(ΔcscR,ΔadhE,ΔfrdBC,Δpta,ΔpflB,Δal-dA),敲除D-乳酸脱氢酶基因(ldhA),并插入乳酸片球菌pediococcus.acidilactici的L-乳酸脱氢酶基因(ldhL),以构建L-乳酸工程菌WL306。... 本研究以可利用蔗糖发酵产D-乳酸的工程菌WD 206为出发菌株(ΔcscR,ΔadhE,ΔfrdBC,Δpta,ΔpflB,Δal-dA),敲除D-乳酸脱氢酶基因(ldhA),并插入乳酸片球菌pediococcus.acidilactici的L-乳酸脱氢酶基因(ldhL),以构建L-乳酸工程菌WL306。该菌在60h的发酵过程中,可将100g/L的蔗糖转化生成81.92g/L的乳酸,产率为82%,在发酵产物中占99.5%;L-乳酸的光学纯度高达99.9%。该结果说明此工程菌具有生产高纯度L-乳酸的工业开发潜力,为采用廉价碳源材料(甘蔗渣,糖蜜)生产打下良好基础。 展开更多
关键词 L-乳酸 大肠杆菌 基因工程 蔗糖发酵
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通过改良农杆菌介导的floral-dip法和花粉管通道法转化紫薇 被引量:5
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作者 陈彦 孙宽莹 张涛 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期250-255,共6页
以绿色荧光蛋白(GFP)基因为报告基因,分别用改良农杆菌介导的花序浸渍法(floral-dip)和花粉管通道法转化紫薇(Lagerstroemia indica),统计果实数、结实率、成苗率,然后用紫外灯照射28d左右的幼苗筛选转化株。结果表明:花粉管通道法转化... 以绿色荧光蛋白(GFP)基因为报告基因,分别用改良农杆菌介导的花序浸渍法(floral-dip)和花粉管通道法转化紫薇(Lagerstroemia indica),统计果实数、结实率、成苗率,然后用紫外灯照射28d左右的幼苗筛选转化株。结果表明:花粉管通道法转化紫薇的结实率、成苗率均明显高于floral-dip法;用手携式紫外灯(365nm)照射进行活体鉴定,floral-dip法转化率比花粉管通道转基因法转化率高0.06%,但未达到显著水平;而花粉管通道法的结实率比floral-dip法的高11.87%~26.74%,更利于获得转化植株。说明通过花粉管通道法进行转化更适合于紫薇转基因新品种的培育。 展开更多
关键词 紫薇 改良农杆菌介导的floral—dip法 花粉管通道法 转化
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不同地理群体的鲇线粒体DNA 16S rRNA基因序列比较分析 被引量:4
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作者 王庆容 宋培勇 +1 位作者 唐立俊 喻哓丹 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期150-153,共4页
对长江中上游主要支流5个野生群体鲇〔舞阳河群体(WYH)、乌江群体(WJ)、雅砻江群体(YLJ)、岷江群体(MJ)、金沙江群体(CS)〕中的27个样品的16S rRNA基因进行PCR扩增,并对扩增产物测序。用CLUSTAL X v 1.81软件对所得的27个16SrRNA序列进... 对长江中上游主要支流5个野生群体鲇〔舞阳河群体(WYH)、乌江群体(WJ)、雅砻江群体(YLJ)、岷江群体(MJ)、金沙江群体(CS)〕中的27个样品的16S rRNA基因进行PCR扩增,并对扩增产物测序。用CLUSTAL X v 1.81软件对所得的27个16SrRNA序列进行比对,并用Dna SP 5.10软件进行比较分析,共检测出74个变异位点、8种单倍型。舞阳河、乌江、雅砻江、岷江、金沙江等5个野生群体的单倍型多样性(H)分别为0.600、0.857、0.600、0.600、0.667,核苷酸多样性(π)分别为0.00072、0.1754、0.00036、0.00072、0.01871。对5个野生群体的16S rRNA序列进行Tajima’s D和Fst分析发现,所有群体符合中性进化模型,且有一些单倍型的分化,只有金沙江群体的遗传差异显著。对5个群体进行分子变异等级分析的结果表明,群体间分子变异不显著。对5个群体构建分子系统树发现,乌江、雅砻江、岷江、金沙江群体之间的亲缘关系较近,舞阳河群体与其他群体间的亲缘关系较远。 展开更多
关键词 线粒体DNA 遗传多样性 16SRRNA基因
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刺参C型凝集素(AJL)基因的克隆及原核表达分析 被引量:3
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作者 薛壮 李慧 +6 位作者 孙鹤 孔德荣 马普 周玮 仇雪梅 刘洋 王秀利 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期610-615,共6页
为了开发海参免疫基因,生产重组免疫因子蛋白,利用cDNA末端快速扩增技术(Rapid-amplification of cDNA ends,RACE)获得了刺参凝集素基因(Apostichopus japonicus Lectin,AJL)的编码区序列(Coding sequence,CDS),CDS的长度为492 bp,编码... 为了开发海参免疫基因,生产重组免疫因子蛋白,利用cDNA末端快速扩增技术(Rapid-amplification of cDNA ends,RACE)获得了刺参凝集素基因(Apostichopus japonicus Lectin,AJL)的编码区序列(Coding sequence,CDS),CDS的长度为492 bp,编码163个氨基酸,其中成熟肽由143个氨基酸组成。将成熟肽的基因克隆并连接至载体p ET-32a(+)中,成功构建了原核表达的重组体p ET-32a(+)-AJL,进一步将重组体转化至大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)中,经诱导表达、分离纯化,获得了融合表达蛋白。本研究结果为进一步研究重组刺参C型凝集素在刺参健康养殖上的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 刺参 凝集素 基因克隆 原核表达
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