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猪圆环病毒3型PCR检测方法的建立及其应用 被引量:10
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作者 肖琦 茅爱华 +13 位作者 汪伟 俞正玉 郭佳慧 袁万哲 赵攀登 温立斌 范宝超 李彬 朱雪蛟 胡屹屹 郭容利 曲梦 杨倩 何孔旺 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2018年第2期9-14,共6页
根据Gen Bank登录的猪圆环病毒3型(porcine circovirus type 3,PCV3)全基因组序列设计并合成了一对特异性引物,经条件优化,建立了检测PCV3的PCR方法,扩增片段大小为932 bp;最低的质粒检测浓度为10 copy/μL;对猪圆环病毒1型、猪圆环病毒... 根据Gen Bank登录的猪圆环病毒3型(porcine circovirus type 3,PCV3)全基因组序列设计并合成了一对特异性引物,经条件优化,建立了检测PCV3的PCR方法,扩增片段大小为932 bp;最低的质粒检测浓度为10 copy/μL;对猪圆环病毒1型、猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒的核酸进行扩增,均无PCV3目的条带出现;随机抽取扩增的16份临床病猪样品目的条带进行TA克隆后测序,结果显示均为PCV3特异性目的片段,16株PCV3江苏毒株扩增序列与已报道的PCV3/US/SD2016和PCV3/CN/Hubei-618基因序列同源性分别为98.4%~99.6%、99.0%~99.8%,而16个毒株之间的同源性为98.3%~100%。利用所建立的PCR方法检测了2014~2017年间收集的江苏省临床病猪样品938份、健康猪样品500份,PCV3的阳性检出率分别为6.93%和0.6%;其中,2014年病猪样品中的阳性率为1.92%,后呈逐渐上升的趋势,2017年达到12.67%。本研究表明,建立的PCR方法特异、敏感,可以用于临床PCV3的检测;PCV3在江苏省猪群2014年已有感染,并呈逐年升高的趋势,应予以重视。 展开更多
关键词 圆环病毒3型 PCR 临床应用
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猪胸膜肺炎放线杆菌及血清1、3、5、7型多重PCR检测方法的建立及应用 被引量:3
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作者 孙学飞 谭业平 +9 位作者 王丹丹 周俊明 祝昊丹 吕立新 俞正玉 何孔旺 李彬 温立斌 张雪寒 倪艳秀 《动物医学进展》 北大核心 2020年第12期17-22,共6页
针对猪胸膜肺炎放线杆菌种特异性基因ApxⅣ和血清1、3、5、7型的特异Cps基因设计5对引物,通过扩增条件的优化,建立了猪胸膜肺炎放线杆菌及血清1、3、5、7型的五重PCR检测方法。特异性试验显示,对血清1~15型参考菌株均扩增出相应的预期... 针对猪胸膜肺炎放线杆菌种特异性基因ApxⅣ和血清1、3、5、7型的特异Cps基因设计5对引物,通过扩增条件的优化,建立了猪胸膜肺炎放线杆菌及血清1、3、5、7型的五重PCR检测方法。特异性试验显示,对血清1~15型参考菌株均扩增出相应的预期目的条带,对6种引起猪发病的主要病原菌均未扩增出任何条带。敏感性试验表明,对各血清型细菌纯培物的敏感性皆为103 CFU/mL;对1、5型感染样品的敏感性为104 CFU/g,对3、7型感染样品的敏感性为103 CFU/g。可在4.5 h左右直接从病猪肺脏中得到检测结果。方法的建立为相关临床病例快速诊断及流行病学调查提供了有效的技术支持。 展开更多
关键词 猪胸膜肺炎放线杆菌 血清1 3 5和7型 多重PCR
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Infectivity Analysis of Cloned Genomic DNA of P1 Agent in vitro 被引量:3
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作者 wen li-bin HE Kong-wang YANG Han-chun 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第S1期43-46,共4页
The ultrastructure of porcine kidney(PK)-15 cells was examined after lipofectamine-aided transfection of the molecular clone of the P1 agent.PK-15 cells transfected with the tandem dimer of the P1molecular DNA clone h... The ultrastructure of porcine kidney(PK)-15 cells was examined after lipofectamine-aided transfection of the molecular clone of the P1 agent.PK-15 cells transfected with the tandem dimer of the P1molecular DNA clone had numbers of intracytoplasmic inclusions,and a few cells had intranuclear inclusions.Intracytoplasmic inclusions were round to oval and 0.1-0.3μm in diameter,and intranuclear inclusions,which were more electron dense,were of two general types:the first were round and small(0.1μm approximately)and the second were hexagonal and larger(0.4-0.8μm in diameter).Cells transfected with the tandem dimer of the P1 molecular DNA clone tested positive for P1 DNA at passage 5.This is the first report that the P1 molecular clone has infectivity in vitro and it will provide fundamental materials for further study of the biological characterization of P1. 展开更多
关键词 P1 AGENT molecular CLONE in vitro infectivity ANALYSIS
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