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植烟土壤中枯萎病菌和黑胫病菌的快速检测方法 被引量:5
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作者 张纪利 齐是 +5 位作者 栾新博 金亚波 黄崇峻 黎平 韦建玉 颜健 《广东农业科学》 CAS 2022年第2期101-108,共8页
【目的】枯萎病和烟草黑胫病是植烟土壤中最为常见的主要土传病害,为害严重,建立植烟土壤中两种病原菌尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)和烟草疫霉菌(Phytophthora parasitica var.nicotianae)快速检测方法,为烟草种植过程中病害流行与... 【目的】枯萎病和烟草黑胫病是植烟土壤中最为常见的主要土传病害,为害严重,建立植烟土壤中两种病原菌尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)和烟草疫霉菌(Phytophthora parasitica var.nicotianae)快速检测方法,为烟草种植过程中病害流行与治理提供技术支持,保障烟草行业的稳定生产。【方法】以采集广西百色地区土传病害土壤与健康土壤为测试材料,以标准病原菌为参考模板建立标准曲线,利用尖孢镰刀菌和烟草疫霉菌的保守区域设计的引物,根据目标条带及荧光定量PCR(qPCR)的溶解曲线与循环阈值(Ct值)筛选出特异性引物;同时,改进土壤中微生物DNA试剂盒提取方法,建立PCR和qPCR检测体系。【结果】分别筛选出一对尖孢镰刀菌和烟草疫霉菌的特异性的引物Pn3和JBR,模板浓度在1×10^(2)~1×10^(-4)ng之间,具有良好的线性关系,两种病原菌的DNA数量在发病土壤高于健康土壤。风干土壤并研磨再加两次洗脱有助于提取土壤中病原菌的DNA,建立了以普通PCR预扩增反应得到的产物作为模板的qPCR检测方法。【结论】PCR和qPCR联用技术能快速地分辨和检测尖孢镰刀菌和烟草疫霉菌,对枯萎病和烟草黑胫病实时监测和前期预警具有重要作用。 展开更多
关键词 土传病害 枯萎病 黑胫病 烟草 荧光定量PCR
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