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禽致病性大肠杆菌phoP/phoQ基因敲除株的构建及其毒力基因转录调控的研究
被引量：
2
1
作者
黄博言
祁克宗
+4 位作者
涂健
周秀红
张宇曦
谭莎莎
李少参
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第7期518-523,共6页
为研究Pho P/Q二元调控系统对禽致病性大肠杆菌(APEC)致病性的调控作用,本研究采用Red同源重组技术分别构建了APEC AE17株的pho P基因敲除株AE18和pho Q基因敲除株AE19,并通过p STV-28质粒分别构建pho P和pho Q基因回补株CAE18和CAE19...
为研究Pho P/Q二元调控系统对禽致病性大肠杆菌(APEC)致病性的调控作用,本研究采用Red同源重组技术分别构建了APEC AE17株的pho P基因敲除株AE18和pho Q基因敲除株AE19,并通过p STV-28质粒分别构建pho P和pho Q基因回补株CAE18和CAE19。并对这些菌株的运动能力、对鸡胚成纤维细胞(CEF)的黏附和侵入能力以及其13个毒力基因的转录水平进行了检测。结果表明,pho P和pho Q基因敲除株运动性能力分别为AE17的70.92%和83.83%;黏附和侵入CEF细胞的能力比AE17均极显著降低,分别为AE17的63.11%、65.42%和59.83%、57.82%。荧光定量PCR结果显示,AE18的毒力基因(sod A、pol A和iss)和AE19的毒力基因(fim C和iss)比AE17相应的毒力基因m RNA的转录水平均呈极显著下降(p<0.01)。此外,回补株CAE18和CAE19株能够部分恢复运动性能力、黏附和侵入CEF细胞的能力及相关毒力基因的转录水平。结果表明pho P和pho Q基因的敲除均能够显著改变APEC AE17株相关的生物学特性,并且能够调控毒力基因的转录水平,使其毒力显著下降。本研究为进一步了解APEC的Pho P/Q二元调控系统对其致病性影响提供实验依据。
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关键词
禽致病性大肠杆菌
PhoP/Q
致病性
敲除
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职称材料
鸡肺表面活性蛋白A的表达及其多克隆抗体的制备
被引量：
1
2
作者
刘红梅
王浩
+5 位作者
邵颖
黄博言
周秀红
潘玲
王桂军
祁克宗
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第1期63-65,70,共4页
目的表达鸡肺表面活性蛋白A(cSP-A)重组蛋白,并制备鼠抗cSP-A多克隆抗体。方法人工合成cSP-A的凝集素糖识别区(CRD)基因(cSP-A-CRD),亚克隆到pGEX-6P-1载体中进行原核表达,对表达产物进行鉴定。切胶纯化法纯化重组蛋白,并免疫小鼠制备抗...
目的表达鸡肺表面活性蛋白A(cSP-A)重组蛋白,并制备鼠抗cSP-A多克隆抗体。方法人工合成cSP-A的凝集素糖识别区(CRD)基因(cSP-A-CRD),亚克隆到pGEX-6P-1载体中进行原核表达,对表达产物进行鉴定。切胶纯化法纯化重组蛋白,并免疫小鼠制备抗cSP-A多克隆抗体,ELISA检测抗体效价,Western blot法、免疫荧光组织化学染色和ELISA鉴定该抗体的特异性和适用范围。结果获得鼠抗cSP-A血清,效价达到105;Western blot法结果表明多抗血清具有良好的特异性和反应性,并可用免疫荧光组织化学技术检测鸡肺上皮细胞表达的cSP-A和用间接ELISA检测鸡肺灌洗液中存在的水溶性cSP-A蛋白。结论成功表达了cSP-A重组蛋白并制备了小鼠抗cSP-A多克隆抗体。
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关键词
鸡肺表面活性蛋白A
糖识别区
原核表达
多抗
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职称材料
题名
禽致病性大肠杆菌phoP/phoQ基因敲除株的构建及其毒力基因转录调控的研究
被引量：
2
1
作者
黄博言
祁克宗
涂健
周秀红
张宇曦
谭莎莎
李少参
机构
安徽农业大学
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第7期518-523,共6页
基金
国家自然科学基金(31372402)
文摘
为研究Pho P/Q二元调控系统对禽致病性大肠杆菌(APEC)致病性的调控作用,本研究采用Red同源重组技术分别构建了APEC AE17株的pho P基因敲除株AE18和pho Q基因敲除株AE19,并通过p STV-28质粒分别构建pho P和pho Q基因回补株CAE18和CAE19。并对这些菌株的运动能力、对鸡胚成纤维细胞(CEF)的黏附和侵入能力以及其13个毒力基因的转录水平进行了检测。结果表明,pho P和pho Q基因敲除株运动性能力分别为AE17的70.92%和83.83%;黏附和侵入CEF细胞的能力比AE17均极显著降低,分别为AE17的63.11%、65.42%和59.83%、57.82%。荧光定量PCR结果显示,AE18的毒力基因(sod A、pol A和iss)和AE19的毒力基因(fim C和iss)比AE17相应的毒力基因m RNA的转录水平均呈极显著下降(p<0.01)。此外,回补株CAE18和CAE19株能够部分恢复运动性能力、黏附和侵入CEF细胞的能力及相关毒力基因的转录水平。结果表明pho P和pho Q基因的敲除均能够显著改变APEC AE17株相关的生物学特性,并且能够调控毒力基因的转录水平,使其毒力显著下降。本研究为进一步了解APEC的Pho P/Q二元调控系统对其致病性影响提供实验依据。
关键词
禽致病性大肠杆菌
PhoP/Q
致病性
敲除
Keywords
avian pathogenic Escherichia coli
PhoP/Q
pathogenicity
mutant
分类号
S852.61 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
鸡肺表面活性蛋白A的表达及其多克隆抗体的制备
被引量：
1
2
作者
刘红梅
王浩
邵颖
黄博言
周秀红
潘玲
王桂军
祁克宗
机构
安徽农业大学动物科技学院
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第1期63-65,70,共4页
基金
安徽省教育厅自然科学基金重点项目(KJ2012A112)
文摘
目的表达鸡肺表面活性蛋白A(cSP-A)重组蛋白,并制备鼠抗cSP-A多克隆抗体。方法人工合成cSP-A的凝集素糖识别区(CRD)基因(cSP-A-CRD),亚克隆到pGEX-6P-1载体中进行原核表达,对表达产物进行鉴定。切胶纯化法纯化重组蛋白,并免疫小鼠制备抗cSP-A多克隆抗体,ELISA检测抗体效价,Western blot法、免疫荧光组织化学染色和ELISA鉴定该抗体的特异性和适用范围。结果获得鼠抗cSP-A血清,效价达到105;Western blot法结果表明多抗血清具有良好的特异性和反应性,并可用免疫荧光组织化学技术检测鸡肺上皮细胞表达的cSP-A和用间接ELISA检测鸡肺灌洗液中存在的水溶性cSP-A蛋白。结论成功表达了cSP-A重组蛋白并制备了小鼠抗cSP-A多克隆抗体。
关键词
鸡肺表面活性蛋白A
糖识别区
原核表达
多抗
Keywords
chicken pulmonary surfactant protein A
carbohydrate recognition domain
prokaryotic expression
polyclonalantibodies
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
S831.99 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
禽致病性大肠杆菌phoP/phoQ基因敲除株的构建及其毒力基因转录调控的研究
黄博言
祁克宗
涂健
周秀红
张宇曦
谭莎莎
李少参
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
鸡肺表面活性蛋白A的表达及其多克隆抗体的制备
刘红梅
王浩
邵颖
黄博言
周秀红
潘玲
王桂军
祁克宗
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014
1
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