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抗人B7-2单链抗体基因的构建及其在大肠杆菌中的表达
被引量：
2
1
作者
董海辉
邱玉华
+3 位作者
陈永井
胡静平
黄光镁
朱江
《科技通报》
北大核心
2010年第3期367-373,共7页
在成功建立稳定分泌鼠抗人B7-2杂交瘤细胞株基础上,扩增并克隆出该单克隆抗体的重链(VH)和轻链(VL)可变区基因。通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法,在VH和VL可变区基因之间引入连接肽(Gly4Ser)3,体外构建抗人B7-2单链抗体(B7-2 ScFv)基因。...
在成功建立稳定分泌鼠抗人B7-2杂交瘤细胞株基础上,扩增并克隆出该单克隆抗体的重链(VH)和轻链(VL)可变区基因。通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法,在VH和VL可变区基因之间引入连接肽(Gly4Ser)3,体外构建抗人B7-2单链抗体(B7-2 ScFv)基因。为便于表达产物的纯化,在抗人B7-2 ScFv的C端增加了6×His tag序列。将其克隆至表达载体pET32a并在大肠杆菌中进行原核表达。SDS-PAGE和Western-blot分析结果表明,抗人B7-2 ScFv在大肠杆菌BL21(DE3)菌中获得表达,重组融合蛋白的相对分子量约为43 kD,表达产物以不溶性包涵体形式存在,经溶解包涵体,体外复性和Ni-NTA亲和柱纯化,获得了高纯度的抗人B7-2 ScFv,纯化蛋白得率约16.2%。成果为抗人B7-2单链抗体的生物学活性研究和抗肿瘤药物开发奠定了基础。
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关键词
单克隆抗体
单链抗体
B7-2
原核表达
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职称材料
斜纹夜蛾核型多角体病毒日本株pif-2基因的克隆及原核表达
被引量：
1
2
作者
胡贵玉
王文兵
+4 位作者
盛晔
黄光镁
石瑞英
金玉婷
朱江
《科技通报》
北大核心
2010年第1期81-87,共7页
为研究斜纹夜蛾核型多角体病毒(Spodoptera litura multicapsid nucleopoledrovirus,SpltMN-PV)侵染规律,根据SpltMNPV中国株(G2)ORF135基因序列设计引物,经PCR扩增,从SpltMNPV日本株(B)基因组中克隆了pif-2基因。核苷酸序列分析表明,...
为研究斜纹夜蛾核型多角体病毒(Spodoptera litura multicapsid nucleopoledrovirus,SpltMN-PV)侵染规律,根据SpltMNPV中国株(G2)ORF135基因序列设计引物,经PCR扩增,从SpltMNPV日本株(B)基因组中克隆了pif-2基因。核苷酸序列分析表明,该基因是甜菜夜蛾核型多角体病毒(Spodoptera exigua nucleopoledrovirus,SeMNPV)pif-2的同源物,读码框含1278 bp,编码425个氨基酸的蛋白质,推定分子量为48.6 kD。与其他杆状病毒的同源物比对显示,SpltMNPV-JP-B PIF-2蛋白中14个Cys残基高度保守。联配分析表明,SpltMNPV-JP-B pif-2的核苷酸序列与其他13种核型多角体病毒的同源性有较大差异。将pif-2克隆至原核表达载体pET32a(+),经IPTG诱导后在大肠杆菌BL21中获得了融合表达,SDS-PAGE分析表明在约69 kD处有特异性表达条带,经Western blot验证该蛋白即为融合表达的目的蛋白。
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关键词
斜纹夜蛾
核型多角体病毒
pif-2基因
原核表达
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职称材料
题名
抗人B7-2单链抗体基因的构建及其在大肠杆菌中的表达
被引量：
2
1
作者
董海辉
邱玉华
陈永井
胡静平
黄光镁
朱江
机构
苏州大学医学部基础医学与生物科学学院
苏州大学医学生物技术研究所
出处
《科技通报》
北大核心
2010年第3期367-373,共7页
基金
国家科技重大专项课题(2009ZX09103-705)
江苏省自然科学基金(BK2004203)
江苏省高校高新技术发展基金(JHB05-45)
文摘
在成功建立稳定分泌鼠抗人B7-2杂交瘤细胞株基础上,扩增并克隆出该单克隆抗体的重链(VH)和轻链(VL)可变区基因。通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法,在VH和VL可变区基因之间引入连接肽(Gly4Ser)3,体外构建抗人B7-2单链抗体(B7-2 ScFv)基因。为便于表达产物的纯化,在抗人B7-2 ScFv的C端增加了6×His tag序列。将其克隆至表达载体pET32a并在大肠杆菌中进行原核表达。SDS-PAGE和Western-blot分析结果表明,抗人B7-2 ScFv在大肠杆菌BL21(DE3)菌中获得表达,重组融合蛋白的相对分子量约为43 kD,表达产物以不溶性包涵体形式存在,经溶解包涵体,体外复性和Ni-NTA亲和柱纯化,获得了高纯度的抗人B7-2 ScFv,纯化蛋白得率约16.2%。成果为抗人B7-2单链抗体的生物学活性研究和抗肿瘤药物开发奠定了基础。
关键词
单克隆抗体
单链抗体
B7-2
原核表达
Keywords
monoclonal antibody
singlechain Fvantibody
B7-2
prokaryotic expression
分类号
Q789 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
斜纹夜蛾核型多角体病毒日本株pif-2基因的克隆及原核表达
被引量：
1
2
作者
胡贵玉
王文兵
盛晔
黄光镁
石瑞英
金玉婷
朱江
机构
苏州大学医学部基础医学与生物科学学院
江苏大学生命科学研究院
出处
《科技通报》
北大核心
2010年第1期81-87,共7页
基金
苏州市科技支撑计划项目(SNG0924)
文摘
为研究斜纹夜蛾核型多角体病毒(Spodoptera litura multicapsid nucleopoledrovirus,SpltMN-PV)侵染规律,根据SpltMNPV中国株(G2)ORF135基因序列设计引物,经PCR扩增,从SpltMNPV日本株(B)基因组中克隆了pif-2基因。核苷酸序列分析表明,该基因是甜菜夜蛾核型多角体病毒(Spodoptera exigua nucleopoledrovirus,SeMNPV)pif-2的同源物,读码框含1278 bp,编码425个氨基酸的蛋白质,推定分子量为48.6 kD。与其他杆状病毒的同源物比对显示,SpltMNPV-JP-B PIF-2蛋白中14个Cys残基高度保守。联配分析表明,SpltMNPV-JP-B pif-2的核苷酸序列与其他13种核型多角体病毒的同源性有较大差异。将pif-2克隆至原核表达载体pET32a(+),经IPTG诱导后在大肠杆菌BL21中获得了融合表达,SDS-PAGE分析表明在约69 kD处有特异性表达条带,经Western blot验证该蛋白即为融合表达的目的蛋白。
关键词
斜纹夜蛾
核型多角体病毒
pif-2基因
原核表达
Keywords
Spodoptera litura
nueleopolyhedrovirus
pif-2 gene
expression
分类号
S43 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
抗人B7-2单链抗体基因的构建及其在大肠杆菌中的表达
董海辉
邱玉华
陈永井
胡静平
黄光镁
朱江
《科技通报》
北大核心
2010
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
斜纹夜蛾核型多角体病毒日本株pif-2基因的克隆及原核表达
胡贵玉
王文兵
盛晔
黄光镁
石瑞英
金玉婷
朱江
《科技通报》
北大核心
2010
1
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职称材料
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