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TMEM182基因调控猪骨骼肌卫星细胞成肌分化的研究 被引量:1
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作者 龚宇轩 黑伟 +4 位作者 鲍武 陈佳仪 李萌 郭晓红 李步高 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第4期1676-1688,共13页
旨在探究TMEM182对猪骨骼肌卫星细胞增殖和成肌分化的调控作用。本研究选取饲养在相同条件下马身猪和大白猪各3头(180日龄,健康去势公猪),采集各组织;选取1周龄仔猪分离猪骨骼肌卫星细胞;通过qRT-PCR检测TMEM182在猪不同组织的表达谱、... 旨在探究TMEM182对猪骨骼肌卫星细胞增殖和成肌分化的调控作用。本研究选取饲养在相同条件下马身猪和大白猪各3头(180日龄,健康去势公猪),采集各组织;选取1周龄仔猪分离猪骨骼肌卫星细胞;通过qRT-PCR检测TMEM182在猪不同组织的表达谱、在不同猪种肌肉组织中的表达差异以及在骨骼肌卫星细胞不同分化天数的时序表达模式;通过在卫星细胞过表达TMEM182(OE-TMEM182)和干扰TMEM182 (si-TMEM182),采用qRT-PCR检测增殖标志基因的表达变化,采用EdU试验检测EdU阳性细胞数量变化;诱导猪骨骼肌卫星细胞成肌分化后,通过qRT-PCR、 Wstern blot、免疫荧光染色等技术检测成肌分化关键基因mRNA和蛋白的表达水平以及对肌管融合的影响。结果显示,TMEM182在猪肌肉组织中均高表达,在其他组织中几乎不表达;与马身猪相比,TMEM182在大白猪肌肉组织中表达量更高(P<0.05);随着卫星细胞分化天数的增加,TMEM182的表达量在分化第4天和5天时上升,分化第6天时下降,在分化第0天时表达量最低,第7天时表达量最高(P<0.05);互作蛋白结果显示,OE-TMEM182组CDH15、TMEM25、HS3ST1、SEC11A的表达量极显著降低(P<0.01),VWC2L的表达量显著降低(P<0.05);在细胞增殖过程中,过表达TMEM182后极显著下调CDK1、PCNA、Ki67的表达(P<0.01),且EdU阳性细胞数极显著减少(P<0.01)。干扰TMEM182后极显著上调CDK4、CDK1(P<0.01),显著上调Ki67的表达(P<0.05),且EdU阳性细胞数极显著增加(P<0.01)。在成肌分化过程中,过表达TMEM182后,MyoG、MyHC表达量极显著降低(P<0.01),MyoD表达量显著降低(P<0.05);干扰TMEM182后,MyoD、MyoG、MyHC的表达量极显著上升(P<0.01),Myf5的表达量显著上升(P<0.05);同时,TMEM182可能通过抑制PI3K-Akt信号通路调控猪卫星细胞的增殖和分化。本研究结果表明,TMEM182为猪骨骼肌卫星细胞增殖及分化过程中的一个负调控因子,推测其为猪骨骼肌生长发育的一个关键候选基因。 展开更多
关键词 TMEM182 肌肉特异性 骨骼肌卫星细胞 增殖 成肌分化
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miR-375-3p 靶向 Fam 229a 调控猪前体脂肪细胞分化 被引量:1
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作者 杨宇婷 陈国梁 +7 位作者 常巧宁 鲍武 刘靖超 姬梦婷 荣晓音 郭晓红 杨阳 李步高 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第3期1120-1133,共14页
旨在探究miR-375-3p对猪脂肪细胞生成的调控作用及靶向Fam 229a的作用机制。本研究选取了饲养在相同条件下的10头30日龄的健康无病的公猪为研究对象,通过实时荧光定量PCR技术(qPCR)检测miR-375-3p在心脏、肝脏、脾脏等组织的表达分布及... 旨在探究miR-375-3p对猪脂肪细胞生成的调控作用及靶向Fam 229a的作用机制。本研究选取了饲养在相同条件下的10头30日龄的健康无病的公猪为研究对象,通过实时荧光定量PCR技术(qPCR)检测miR-375-3p在心脏、肝脏、脾脏等组织的表达分布及在脂肪细胞成脂诱导分化不同时期的表达水平;利用miRNA mimic和miRNA inhibitor过表达和干扰miR-375-3p,qPCR检测miR-375-3p对成脂关键基因CEBPα、PPARγ、FABP 4表达的影响,油红O染色和统计分析检测成脂能力;通过生物信息学分析和双荧光素酶报告试验预测并鉴定miR-375-3p的下游靶标Fam 229a,并对Fam 229a进行功能验证;最后利用PSIPRED软件、Phyre2.0软件和STRING网站预测Fam 229a下游功能及qPCR检测Fam 229a对早期成脂关键基因CEBPα、CEBPβ、ZFP 423和ZFP 521表达的影响;上述试验方法均设立3个生物学重复。结果表明,miR-375-3p在猪各组织中广泛表达,在肺脏和肾周脂肪中相对表达量较高;时序表达谱显示,在猪原代前体脂肪细胞的分化过程中miR-375-3p的表达量呈先下降后上升趋势;过表达miR-375-3p后,猪原代前体脂肪细胞的脂滴明显增多,脂肪细胞分化标志基因CEBPα、PPARγ和FABP 4的mRNA水平极显著上升(P<0.01),干扰miR-375-3p后,结果相反。为了探究miR-375-3p的作用机制,通过qRT-RCR、结合位点预测以及双荧光素酶试验发现了miR-375-3p与Fam 229a之间存在结合作用,过表达miR-375-3p能显著抑制Fam 229a的表达(P<0.05),干扰后则表示相反结果。组织表达谱显示Fam 229a在肝脏和肾周脂肪中相对表达量较高;时序表达谱显示,在猪原代前体脂肪细胞的分化过程中,Fam 229a的表达量呈先上升后下降再上升趋势;过表达Fam 229a后,脂滴明显减少,脂肪细胞分化标志基因CEBPα、PPARγ的mRNA水平显著降低(P<0.05),干扰Fam 229a后,结果相反;通过qRT-RCR技术和生物信息学预测了Fam 229a调控成脂分化的下游机制。本研究结果表明,miR-375-3p能够促进猪原代前体脂肪细胞的成脂分化,其靶基因Fam 229a抑制成脂分化,揭示了miR-375-3p靶向Fam 229a调控成脂分化的机制,丰富了miRNA的分子调控网络。 展开更多
关键词 脂肪细胞分化 miR-375-3p Fam 229a
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河南省珍稀野生植物资源现状分析及对策 被引量:1
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作者 冷冰 江帆 +2 位作者 梅继林 鲍武 郭明仁 《河南林业科技》 2006年第2期41-42,共2页
结合1999年到2001年河南省全国重点保护野生植物资源调查结果,分析了河南省珍稀植物现状,并针对珍稀植物保护利用存在问题,提出了相应的对策。
关键词 珍稀野生植物 现状分析 对策 河南省
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