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内蒙古白绒山羊FGF5基因克隆及其靶向shRNA表达载体的构建和鉴定
被引量：
1
1
作者
鲍文蕾
其布日
+4 位作者
姚睿原
郭志新
朝格图
王彦凤
王志钢
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第11期1793-1798,共6页
旨在构建内蒙古白绒山羊成纤维细胞生长因子Ⅴ(Fibroblast growth factor 5,FGF5)基因shRNA真核表达载体(pRNAT-shRNA)。以内蒙古白绒山羊胎儿成纤维细胞总RNA为模板,PCR扩增FGF5基因。设计并合成3条FGF5基因的靶向shRNA序列,分别插入pR...
旨在构建内蒙古白绒山羊成纤维细胞生长因子Ⅴ(Fibroblast growth factor 5,FGF5)基因shRNA真核表达载体(pRNAT-shRNA)。以内蒙古白绒山羊胎儿成纤维细胞总RNA为模板,PCR扩增FGF5基因。设计并合成3条FGF5基因的靶向shRNA序列,分别插入pRNAT-U6.1/Neo载体中,构建重组干扰质粒载体pRNATshRNA1、pRNAT-shRNA2和pRNAT-shRNA3,用脂质体LipofectamineTM2000将各重组干扰质粒转染内蒙古白绒山羊胎儿成纤维细胞,Real time PCR检测FGF5mRNA表达量。结果表明:克隆获得813bp的目的基因,包含了完整的ORF,编码270个氨基酸。核苷酸序列及推导的氨基酸序列与绵羊FGF5基因(NM_001246263.1)及氨基酸序列同源性均为99%。FGF5基因shRNA重组质粒经测序鉴定证明构建成功。重组表达质粒转染绒山羊胎儿成纤维细胞48h后可见绿色荧光表达;pRNAT-shRNA1组、pRNAT-shRNA2组和pRNAT-shRNA3组FGF5的mRNA表达水平均低于干扰空载体对照组(P<0.01),pRNAT-shRNA2对FGF5的表达具有最佳的抑制效应。综上表明,成功构建pRNAT-U6.1/Neo-FGF5表达载体,为探讨FGF5在毛囊生长中的作用奠定了基础。
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关键词
内蒙古白绒山羊
成纤维细胞生长因子Ⅴ(FGF5)
短发夹RNA
荧光定量PCR
载体构建
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职称材料
题名
内蒙古白绒山羊FGF5基因克隆及其靶向shRNA表达载体的构建和鉴定
被引量：
1
1
作者
鲍文蕾
其布日
姚睿原
郭志新
朝格图
王彦凤
王志钢
机构
内蒙古大学生命科学学院
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第11期1793-1798,共6页
基金
国家自然科学基金(31160469)
国家转基因重大专项(2013ZX08008-002)
文摘
旨在构建内蒙古白绒山羊成纤维细胞生长因子Ⅴ(Fibroblast growth factor 5,FGF5)基因shRNA真核表达载体(pRNAT-shRNA)。以内蒙古白绒山羊胎儿成纤维细胞总RNA为模板,PCR扩增FGF5基因。设计并合成3条FGF5基因的靶向shRNA序列,分别插入pRNAT-U6.1/Neo载体中,构建重组干扰质粒载体pRNATshRNA1、pRNAT-shRNA2和pRNAT-shRNA3,用脂质体LipofectamineTM2000将各重组干扰质粒转染内蒙古白绒山羊胎儿成纤维细胞,Real time PCR检测FGF5mRNA表达量。结果表明:克隆获得813bp的目的基因,包含了完整的ORF,编码270个氨基酸。核苷酸序列及推导的氨基酸序列与绵羊FGF5基因(NM_001246263.1)及氨基酸序列同源性均为99%。FGF5基因shRNA重组质粒经测序鉴定证明构建成功。重组表达质粒转染绒山羊胎儿成纤维细胞48h后可见绿色荧光表达;pRNAT-shRNA1组、pRNAT-shRNA2组和pRNAT-shRNA3组FGF5的mRNA表达水平均低于干扰空载体对照组(P<0.01),pRNAT-shRNA2对FGF5的表达具有最佳的抑制效应。综上表明,成功构建pRNAT-U6.1/Neo-FGF5表达载体,为探讨FGF5在毛囊生长中的作用奠定了基础。
关键词
内蒙古白绒山羊
成纤维细胞生长因子Ⅴ(FGF5)
短发夹RNA
荧光定量PCR
载体构建
Keywords
Inner Mongolia Cashmere goat
fibroblast growth factor 5(FGF5)
short hairpin RNA
real time PCR
construction of vector
分类号
S827 [农业科学—畜牧学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
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1
内蒙古白绒山羊FGF5基因克隆及其靶向shRNA表达载体的构建和鉴定
鲍文蕾
其布日
姚睿原
郭志新
朝格图
王彦凤
王志钢
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014
1
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参考文献
引证文献
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