一种检测血清心肌肌钙蛋白I的生物传感器 被引量：5

1

作者 魏景艳 宋大千 +9 位作者 卜丽莎 朱冬元 牟颖 刘霞 张寒琦 金钦汉 张桂珍 丁家华 王维忠 罗贵民 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期272-275,共4页

目的 :建立一种新的血清心肌肌钙蛋白I(cTnI)定量检测法。方法 :用亲和层析法提纯cTnI,免疫BALB C鼠及新西兰兔 ,并用杂交瘤技术及膜渗滤亲和层析法 ,制备了特异性抗cTnI单克隆抗体和多克隆抗体。以葡萄球菌蛋白A作基底膜 ,特异性多克... 目的 :建立一种新的血清心肌肌钙蛋白I(cTnI)定量检测法。方法 :用亲和层析法提纯cTnI,免疫BALB C鼠及新西兰兔 ,并用杂交瘤技术及膜渗滤亲和层析法 ,制备了特异性抗cTnI单克隆抗体和多克隆抗体。以葡萄球菌蛋白A作基底膜 ,特异性多克隆抗体作捕捉抗体 ,单抗 9F5作第二抗体 ,制成了表面等离子体共振生物传感器。比较了直接法和夹心免疫法检测血清cTnI的性能。结果 :夹心免疫法的最低检测限 (0 8μg L)是直接法的 5倍 (4 μg L) ,检测范围为 (0 8～ 2 0 ) μg L ,批内及批间精密度分别达 3 8%～ 5 1% ,6 3%～ 8 1%。用该夹心法及国外试剂盒分别检测 4 0名健康献血队员和 2 8例急性心肌梗死患者血清cTnI水平 ,两者符合率分别为 97 5 %和 94 6 %。结论 :所建立的夹心免疫法操作简单 ,特异性强 ,灵敏度高 ,符合临床诊断要求。 展开更多

关键词 心肌肌钙蛋白Ⅰ 抗心肌肌钙蛋白I抗体 夹心免疫法 表面等离子体共振生物传感器 急性心肌梗死

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用多克隆抗体构建的夹心免疫传感器检测心肌肌钙蛋白I 被引量：2

2

作者 魏景艳 牟颖 +6 位作者 许海波 胡鑫 宋大千 刘霞 张寒琦 金钦汉 罗贵民 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2003年第12期2161-2164,共4页

用表面等离子体子共振生物传感器构建对心肌肌钙蛋白 I特异性的免疫传感器检测心肌肌钙蛋白 I,并建立两种检测方法 :直接法的最低检测限为 2 .5 μg/L,基于传感膜上的夹心免疫法的灵敏度为 0 .5 μg/L,检测范围为 0 .5～ 2 0 μg/L,批... 用表面等离子体子共振生物传感器构建对心肌肌钙蛋白 I特异性的免疫传感器检测心肌肌钙蛋白 I,并建立两种检测方法 :直接法的最低检测限为 2 .5 μg/L,基于传感膜上的夹心免疫法的灵敏度为 0 .5 μg/L,检测范围为 0 .5～ 2 0 μg/L,批内及批间精密度分别为 3 .5 %～ 4.9% ,6.1 %～ 7.4% ;用夹心法及国外试剂盒对 40名健康献血者和 2 0例急性心肌梗死患者血清心肌肌钙蛋白 I水平进行检测 ,两者符合率为 95 % . 展开更多

关键词 心肌肌钙蛋白I 多克隆抗体 夹心免疫分析 SPR传感器 心肌梗塞

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量子点偶联抗体型夹心免疫传感法检测心肌肌钙蛋白I 被引量：11

3

作者 宋健 范佳 +5 位作者 宋大千 毕丽荣 周广宇 张皓 魏景艳 杨柏 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1940-1944,共5页

将纳米量子点（QD）的放大作用与夹心免疫传感技术相结合，首次应用量子点标记抗体和表面等离子体共振生物传感器（SPR）对心肌肌钙蛋白Ⅰ（cTnⅠ）进行特异性定量检测．利用N-羟基琥珀酰（NHS）和1-乙基-3-（3-二甲氨基丙基）碳二亚胺... 将纳米量子点（QD）的放大作用与夹心免疫传感技术相结合，首次应用量子点标记抗体和表面等离子体共振生物传感器（SPR）对心肌肌钙蛋白Ⅰ（cTnⅠ）进行特异性定量检测．利用N-羟基琥珀酰（NHS）和1-乙基-3-（3-二甲氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐（EDC）将量子点偶联到cTnⅠ的单克隆抗体2F11上，再利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）验证偶联是否成功，膜印迹法证明标记后的2F11具有良好的生物学和免疫学活性，最后以蛋白A为基底膜、特异性抗心肌肌钙蛋白Ⅰ多克隆抗体为第-抗体（捕捉抗体）、QD标记的抗心肌肌钙蛋白Ⅰ单克隆抗体2F11为第二抗体（检测抗体），用表面等离子体共振生物传感器构建了对心肌肌钙蛋白Ⅰ具有特异性的夹心免疫传感法，并成功用于检测心肌肌钙蛋白Ⅰ．本法的检测范围为0．4～15μg/L，检出限为0．4μg/L，较未标记夹心法和直接法分别提高了约2倍和10倍． 展开更多

关键词 心肌肌钙蛋白I 特异性抗心肌肌钙蛋白I抗体 夹心免疫传感法 量子点 生物传感器

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用表面等离子体子共振传感器测定人心肌肌钙蛋白I的研究 被引量：5

4

作者 宋大千 刘霞 +4 位作者 赵丽巍 张寒琦 魏景艳 牟颖 罗贵民 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2003年第7期1185-1188,共4页

采用自组装表面等离子体子共振 (SPR)传感装置 ,固定入射角 ,以波长为变量 ,以 CCD为检测系统 ,用对金和抗体均有较强吸附作用的葡萄球菌 A蛋白作为基底膜 ,观测了人心肌肌钙蛋白 I的抗体和抗原之间免疫反应的动力学过程 ,并进行了人心... 采用自组装表面等离子体子共振 (SPR)传感装置 ,固定入射角 ,以波长为变量 ,以 CCD为检测系统 ,用对金和抗体均有较强吸附作用的葡萄球菌 A蛋白作为基底膜 ,观测了人心肌肌钙蛋白 I的抗体和抗原之间免疫反应的动力学过程 ,并进行了人心肌肌钙蛋白 I的定量测定 .结果表明 ,人心肌肌钙蛋白 I的浓度在5 .0～ 5 0 μg/L范围内与传感器的响应值呈线性关系 . 展开更多

关键词 表面等离子体子共振 传感器 测定 心肌肌钙蛋白I 急性心肌梗塞

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具有谷胱甘肽过氧化物酶活性的含硒人源单链抗体的制备 被引量：4

5

作者 霍锐 石毅 +10 位作者 魏景艳 徐俊杰 吕绍武 闫飞 苏家明 段玉晶 王诗雯 丛登立 李唯 闫岗林 罗贵民 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2008年第7期1379-1383,共5页

以谷胱甘肽(GSH)为靶抗原,从噬菌体展示人源单链抗体库中筛选人源单链抗体(scFv).经3轮筛选后,用ELISA方法检测出5个(2,11,16,24,32)可以和GSH结合的克隆.PCR产物的电泳和测序结果表明,只有3个克隆(11,16,24)具有完整的scFv编码基因.选... 以谷胱甘肽(GSH)为靶抗原,从噬菌体展示人源单链抗体库中筛选人源单链抗体(scFv).经3轮筛选后,用ELISA方法检测出5个(2,11,16,24,32)可以和GSH结合的克隆.PCR产物的电泳和测序结果表明,只有3个克隆(11,16,24)具有完整的scFv编码基因.选取和GSH结合力高的克隆11的scFv编码基因组装到表达载体pPELB上,在大肠杆菌Rosetta中进行可溶性表达,用Ni2+螯合亲和层析纯化scFv-11,免疫点印迹结果证实该抗体能与GSH特异结合.通过化学突变将scFv-11的丝氨酸转变成硒代半胱氨酸(Sec)后,获得了具有谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活力的含硒(Se)人源单链抗体(Se-scFv-11),其活力为351U/μmol. 展开更多

关键词 人源单链抗体 噬菌体展示抗体库 谷胱甘肽过氧化物酶 硒 化学突变

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量子点标记的斑点免疫渗滤分析定量检测cTnI 被引量：4

6

作者 范佳 宋健 +4 位作者 毕丽荣 周广宇 张皓 魏景艳 杨柏 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2009年第11期2180-2183,共4页

利用量子点良好的光谱特征和光化学稳定性,结合免疫分析技术,对心肌肌钙蛋白I(cTnI)特异性进行定量检测.用量子点标记cTnI的单克隆抗体(2F11),通过SDS-PAGE电泳证明标记成功.斑点免疫膜渗滤法证明标记后的2F11仍具有良好的生物学活性,... 利用量子点良好的光谱特征和光化学稳定性,结合免疫分析技术,对心肌肌钙蛋白I(cTnI)特异性进行定量检测.用量子点标记cTnI的单克隆抗体(2F11),通过SDS-PAGE电泳证明标记成功.斑点免疫膜渗滤法证明标记后的2F11仍具有良好的生物学活性,再将标记并纯化后的2F11与NC膜上不同浓度的cTnI进行免疫反应,使用Im ageM aster图像分析软件对膜上荧光斑点图像进行定量分析.应用此方法测得cTnI的浓度和斑点处相对荧光值有良好的线性关系(R2=0.9966),最低检出值为120 ng. 展开更多

关键词 心肌肌钙蛋白I 特异性抗心肌肌钙蛋白I单克隆抗体 斑点免疫渗滤 量子点

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具有GPX活性单链抗体的制备及其抗氧化效应 被引量：4

7

作者 李维佳 魏景艳 +4 位作者 孙晔 牟颖 吕绍武 闫岗林 罗贵民 《吉林大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期458-462,共5页

为实现单链抗体的可溶性表达,制备具有谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活力的单链抗体,在单链抗体表达载体pTMF 2F3上去除原2F3基因N端非必需的18个氨基酸,采用新的表达载体pRose质粒,在2F3的N端引入13个氨基酸的前导肽,转入BL21(lysS)中,使其... 为实现单链抗体的可溶性表达,制备具有谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活力的单链抗体,在单链抗体表达载体pTMF 2F3上去除原2F3基因N端非必需的18个氨基酸,采用新的表达载体pRose质粒,在2F3的N端引入13个氨基酸的前导肽,转入BL21(lysS)中,使其分泌到大肠杆菌的周质腔中得以表达,获得可溶性表达产物.产物经过分离纯化、WesternBlot印迹和硒化测活确定具有GPX活性的鼠单链抗体,其GPX活力为2530U/μmol.以脂质过氧化、细胞存活率和细胞膜完整性为指标的抗氧化实验研究表明,具有GPX活性的单链抗体对大鼠乳鼠表皮细胞有抗紫外线损伤的作用,是膜脂质过氧化的有效抑制剂. 展开更多

关键词 谷胱甘肽过氧化物酶 单链抗体 可溶性表达 抗氧化

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量子点与人源抗谷胱甘肽单链抗体的连接与表征 被引量：2

8

作者 徐俊杰 王诗雯 +7 位作者 赵虹 陈桂秋 霍锐 田莉 段玉晶 李敏杰 杨柏 魏景艳 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2009年第3期506-509,共4页

用已构建的表达载体pPELB-B3,在大肠杆菌Rosetta中可溶性表达人源抗谷胱甘肽(GSH)单链抗体B3(scFv-B3),经N i2+螯合亲和层析纯化后,用点印迹法验证了其与GSH结合的特异性.将水相合成的半导体纳米粒子(半导体量子点,QD s)在N-羟基琥珀酰... 用已构建的表达载体pPELB-B3,在大肠杆菌Rosetta中可溶性表达人源抗谷胱甘肽(GSH)单链抗体B3(scFv-B3),经N i2+螯合亲和层析纯化后,用点印迹法验证了其与GSH结合的特异性.将水相合成的半导体纳米粒子(半导体量子点,QD s)在N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDC)的作用下,与scFvs连接.光谱分析和膜印迹结果表明,scFvs成功地共价连接到QD s表面,所得的QD-scFvs复合物能够较好地识别GSH.荧光显微镜观察QD-scFvs与人乳腺癌细胞MCF-7的作用结果,初步判断QD-scFvs能够跨膜进入细胞. 展开更多

关键词 量子点 人源单链抗体 谷胱甘肽过氧化物酶(GPX) 共价结合 印迹

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槽式对流免疫电泳法检测可提取性核抗原抗体的研究 被引量：4

9

作者 刘学明 郑德明 +2 位作者 魏景艳 张晓慧 孙荣武 《白求恩医科大学学报》 CSCD 1995年第2期203-205,共3页

用引进的槽式对流免疫电泳法（槽ＣＩＥ）和国内常规的免疫双扩散法（ＩＤ），同时对８９例病人血清可提取性核抗原（ＥＮＡ）的抗体进行了测定和比较。槽ＣＩＥ法图像清晰、沉淀线呈弧型，结果明显比ＩＤ法容易判断，ＥＮＡ抗体阳性病... 用引进的槽式对流免疫电泳法（槽ＣＩＥ）和国内常规的免疫双扩散法（ＩＤ），同时对８９例病人血清可提取性核抗原（ＥＮＡ）的抗体进行了测定和比较。槽ＣＩＥ法图像清晰、沉淀线呈弧型，结果明显比ＩＤ法容易判断，ＥＮＡ抗体阳性病人血清的检出率非常显著地高于ＩＤ法（Ｐ＜０．００１），抗ＳＭ、ＲＮＰ、ＳＳＡ、ＳＳＢ等每种抗休的检出率也均高于ＩＤ法，其中前３种差异非常显著（分别Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．００１）。 展开更多

关键词 对流免疫电泳 ENA抗体 抗体

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哮喘儿童血清白细胞介素4、转化生长因子β_1及IgE水平的变化及临床意义 被引量：1

10

作者 李善玉 赵凯姝 +2 位作者 李波 鲁继荣 魏景艳 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期602-604,共3页

目的:探讨哮喘儿童血清白细胞介素4(IL4)、转化生长因子β1(TGFβ1)及IgE水平变化及临床意义。方法:对98例哮喘患儿应用双抗体夹心ELISA法,检测血清IL4、TGFβ1、IgE水平,其中发作期42例、缓解期56例;设正常对照52例。结果:在哮喘组,血... 目的:探讨哮喘儿童血清白细胞介素4(IL4)、转化生长因子β1(TGFβ1)及IgE水平变化及临床意义。方法:对98例哮喘患儿应用双抗体夹心ELISA法,检测血清IL4、TGFβ1、IgE水平,其中发作期42例、缓解期56例;设正常对照52例。结果:在哮喘组,血清IL4、IgE水平明显高于对照组[(12.09±6.00)ng·L-1,(58.16±15.47)ng·L-1](P<0.05),TGFβ1水平显著低于对照组[(181.59±96.05)ng·L-1](P<0.05);在发作期血清IL4、IgE水平[(105.86±34.33)ng·L-1,(270.21±74.84)ng·L-1]均高于缓解期[(61.58±11.04)ng·L-1,(152.80±45.15)ng·L-1](P<0.05),在发作期血清TGFβ1水平[(41.97±12.77)ng·L-1]均低于缓解期[(63.40±23.40)ng·L-1](P<0.05)。IL4与IgE呈正相关(r=0.581,P<0.001),TGFβ1分别与IL4、IgE呈负相关(r1=-0.614,P<0.001;r2=-0.609,P<0.001)。结论:IL4可促进哮喘患儿IgE分泌,并抑制嗜酸性粒细胞产生TGFβ1,这一机理在哮喘发病中起重要作用。 展开更多

关键词 哮喘/血液 白细胞介素4/血液 转化生长因子β1/血液 免疫球蛋白E/血液

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红细胞标记抗体的化学发光免疫分析 被引量：1

11

作者 张雯艳 魏景艳 +8 位作者 郭杰 陈桂秋 邢程 石立华 袁玮 钱莉娜 阙肖冬 高莉 刘梦虹 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2006年第8期1435-1438,共4页

用红细胞代替辣根过氧化物酶作为双抗体夹心免疫分析中第二抗体的标记物,建立了一种红细胞标记抗体的免疫化学发光测定乙型肝炎病毒表面抗原的新方法.在免疫反应完成后,结合了抗原-抗体免疫复合物的致敏红细胞在低渗溶液中溶血,释放出... 用红细胞代替辣根过氧化物酶作为双抗体夹心免疫分析中第二抗体的标记物,建立了一种红细胞标记抗体的免疫化学发光测定乙型肝炎病毒表面抗原的新方法.在免疫反应完成后,结合了抗原-抗体免疫复合物的致敏红细胞在低渗溶液中溶血,释放出血红蛋白.基于血红蛋白对鲁米诺-H_(2)O_(2)体系化学发光具有催化作用的原理,采用化学发光法测定血红蛋白含量.测得的血红蛋白发光强度与待测抗原浓度呈线性关系.采用这种方法可检测出0.5 ng/mL的乙型肝炎病毒表面抗原.将该方法与酶联免疫吸附分析(ELISA)结合起来对乙型肝炎患者血清乙肝病毒表面抗原(HBsAg)进行检测,两者符合率均为97%,表明本法具有良好的灵敏度和特异性,可用于临床标本测试. 展开更多

关键词 红细胞标记抗体 化学发光免疫分析 乙型肝炎病毒表面抗原

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基于快速定点突变研究含硒人Zeta型谷胱甘肽硫转移酶1c-1c的催化活性

12

作者 郭笑 于扬 +7 位作者 陈龙 王铭铄 金梦梦 刘广娜 张黎 李涛 高壮 魏景艳 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2014年第10期2109-2113,共5页

先将人Zeta型谷胱甘肽硫转移酶1c-1c(hGSTZ1c-1c)中非催化中心的Cys-137,Cys-154,Cys-165和Cys-205突变为Ser,然后将催化中心14,15和17位的3个氨基酸残基突变为Cys,再利用半胱氨酸缺陷型大肠杆菌表达系统将其特定地转化为Sec,即把GPx的... 先将人Zeta型谷胱甘肽硫转移酶1c-1c(hGSTZ1c-1c)中非催化中心的Cys-137,Cys-154,Cys-165和Cys-205突变为Ser,然后将催化中心14,15和17位的3个氨基酸残基突变为Cys,再利用半胱氨酸缺陷型大肠杆菌表达系统将其特定地转化为Sec,即把GPx的催化基团引入到hGSTZ1c-1c中,高效地获得了具有谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活力的模拟酶.其中制备的3个含硒突变体15C,14C/15C和17C均显示出明显的GPx活力.对非含硒突变体性质研究发现,Ser-14或Ser-15任何一个残基发生突变都会导致hGSTZ1c-1c的GST活力几乎丧失,表明Ser-14和Ser-15在催化反应中发挥着重要作用,但前者主要参与底物结合,后者更侧重于催化. 展开更多

关键词 快速定点突变 谷胱甘肽过氧化物酶 人Zeta型谷胱甘肽硫转移酶

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Se-scFv-B3对过氧化氢诱导的大鼠乳鼠心肌细胞损伤的保护作用 被引量：3

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作者 苏家明 魏景艳 +2 位作者 宋宇 杨蕾 霍锐 《吉林大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期146-151,共6页

用H2O2损伤大鼠乳鼠的心肌细胞建立氧化应激损伤模型,考察谷胱甘肽过氧化物酶模拟物Se-scFv-B3对H2O2诱导的大鼠乳鼠心肌细胞氧化损伤的影响.结果表明,Se-scFv-B3能部分增加心肌细胞存活率,减少细胞凋亡,恢复线粒体膜电位,下调Caspase-... 用H2O2损伤大鼠乳鼠的心肌细胞建立氧化应激损伤模型,考察谷胱甘肽过氧化物酶模拟物Se-scFv-B3对H2O2诱导的大鼠乳鼠心肌细胞氧化损伤的影响.结果表明,Se-scFv-B3能部分增加心肌细胞存活率,减少细胞凋亡,恢复线粒体膜电位,下调Caspase-3活力并降低细胞内活性氧的含量.表明Se-scFv-B3可以保护心肌细胞抵制H2O2诱导的氧化应激损伤. 展开更多

关键词 氧化应激 凋亡 Se-scFv-B3 心肌细胞 过氧化氢

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通过快速定点突变表征人源含硒单链抗体酶的底物结合部位 被引量：2

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作者 宋健 徐俊杰 +3 位作者 魏景艳 于扬 孙卫国 张桂荣 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2010年第3期502-506,共5页

为了对人源含硒单链抗体酶Se-scFv-B3的底物结合部位和催化基团进行研究,在理论预测的基础上,通过快速定点突变法分别在2个理论预测的底物结合部位(位点1和位点2)内选定Ala180和Ala44定点突变为丝氨酸(Ser).2个突变体蛋白经化学修饰将Se... 为了对人源含硒单链抗体酶Se-scFv-B3的底物结合部位和催化基团进行研究,在理论预测的基础上,通过快速定点突变法分别在2个理论预测的底物结合部位(位点1和位点2)内选定Ala180和Ala44定点突变为丝氨酸(Ser).2个突变体蛋白经化学修饰将Ser转变成谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)的催化基团硒代半胱氨酸(Sec)后,前者的GPX活力达到了Se-scFv-B3的2倍多,而后者的GPX活力没有明显提高,这表明位点1可能是主要的底物结合部位,与理论预测的结果一致. 展开更多

关键词 快速定点突变 人源含硒单链抗体酶 底物结合部位

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