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我国五省区部分猪场高致病性猪蓝耳病毒感染情况检测与分析 被引量:12
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作者 高许雷 吴发兴 +6 位作者 朱紫祥 李平 张燕霞 张志 刘爽 李晓成 黄保续 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第11期32-36,共5页
对2008年-2009年我国五省区发病猪场235份、屠宰场的218份样品进行了高致病性猪蓝耳病病毒(HP-PRRSV)RT-PCR检测,挑选具有代表性的HP-PRRSV阳性样品进行HP-PRRSV ORF5基因扩增、测序及分析。结果表明,这五个省区发病场蓝耳病的检出率平... 对2008年-2009年我国五省区发病猪场235份、屠宰场的218份样品进行了高致病性猪蓝耳病病毒(HP-PRRSV)RT-PCR检测,挑选具有代表性的HP-PRRSV阳性样品进行HP-PRRSV ORF5基因扩增、测序及分析。结果表明,这五个省区发病场蓝耳病的检出率平均74.6%。屠宰场的检出率平均44%,混合感染主要以二重感染为主,且发病场较屠宰场严重。对获得的13株HP-PRRSV ORF5进行测序分析,发现序列长度均为603 bp,未见缺失或插入,仅在9 aa^29 aa存在点突变;序列比较发现,与普通株标准序列VR-2332株核苷酸同源性达85.9%~87.2%;与高致病性毒株的同源性JXA1-06核苷酸同源性达96.0%~99.0%。而其推导氨基酸序列与普通型、高致病性毒株的同源性分别为87.1%~88.1%和97.5%~98.0%。从遗传进化以及变异情况看,获得的PRRSV ORF5序列均为与JXA1类似的高致病性PRRSV序列,与JXA1和HB-1同属美洲型中的一个亚群。 展开更多
关键词 高致病性猪蓝耳病病毒 RT-PCR检测 ORF5基因
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猪伪狂犬病病毒PCR检测方法的建立与应用 被引量:21
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作者 吴发兴 郑辉 +5 位作者 亓传德 高许雷 张志 刘爽 张燕霞 李晓成 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第5期5-9,共5页
参考GenBank中收录的猪伪狂犬病病毒gE基因序列,应用Primer5.0软件设计了一对引物,扩增目的片段为632 bp。进行PCR检测方法的特异性、敏感性、重复性及符合性试验,建立了PRV的PCR检测方法。应用该方法对临床疑似发病样品进行了检测,PRV... 参考GenBank中收录的猪伪狂犬病病毒gE基因序列,应用Primer5.0软件设计了一对引物,扩增目的片段为632 bp。进行PCR检测方法的特异性、敏感性、重复性及符合性试验,建立了PRV的PCR检测方法。应用该方法对临床疑似发病样品进行了检测,PRV检出率为14.6%。表明该方法具有快速、特异、敏感、重复性好等优点,可用于PRV的临床发病诊断及流行病学监测等。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 GE基因 聚合酶链式反应
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我国部分省区HP-PRRSV分离株ORF5基因遗传变异分析 被引量:1
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作者 李平 吴发兴 +6 位作者 朱紫祥 高许雷 张志 刘爽 张燕霞 李晓成 阿合买提 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第9期1-6,共6页
参考GenBank发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)JXA1的ORF5基因序列,设计并合成了一对引物,对分离自云南、浙江、山东、辽宁、黑龙江、天津、湖南等7省12株PRRSV分离株进行RT-PCR扩增,获得约773 bp的DNA片段,将其分别克隆至pGEM-T E... 参考GenBank发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)JXA1的ORF5基因序列,设计并合成了一对引物,对分离自云南、浙江、山东、辽宁、黑龙江、天津、湖南等7省12株PRRSV分离株进行RT-PCR扩增,获得约773 bp的DNA片段,将其分别克隆至pGEM-T Easy载体中,并进行测序。应用DNAS-tar软件分析序列,并与VR-2332、CH-la、MLV、LV、BJ4、HB1、HuB2J、XA1等毒株ORF5序列进行比较,结果表明,分离株间的核苷酸同源性为91.9%~100%,氨基酸同源性为90.1%~100%;在美洲株遗传关系上又分为明显的2个群:12株分离株与HB1、HuB2J、XA1、CH-la亲缘关系比较近,处于一个亚群;VR-2332、MLV、BJ4处于另一个亚群。说明高致病PRRSV为我国PRRS主要流行病毒。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5基因 遗传进化树 变异
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PRRSV基因缺失片段dNsp2(87)的原核表达
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作者 亓传德 吴发兴 +8 位作者 梁继望 高许雷 郑辉 张志 张燕霞 刘爽 王洪斌 黄保续 李晓成 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第5期1-4,共4页
将质粒pUC57-dNsp2(87)经BamHⅠ和HindⅢ双酶切后,与经过相同酶切处理的pET-32a相连接,重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3)进行表达,经SDS-PAGE电泳和Western blot检测,dNsp2(87)重组菌得到了有效表达,融合蛋白的分子质量约为23.5 ku,表... 将质粒pUC57-dNsp2(87)经BamHⅠ和HindⅢ双酶切后,与经过相同酶切处理的pET-32a相连接,重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3)进行表达,经SDS-PAGE电泳和Western blot检测,dNsp2(87)重组菌得到了有效表达,融合蛋白的分子质量约为23.5 ku,表达量可达菌体总蛋白的28.9%,重组蛋白能被PRRSV普通株阳性血清所识别,具有一定的生物学活性。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 NSP2基因 原核表达
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PRRSV和PCV-2二重PCR检测方法的建立及初步应用 被引量:7
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作者 王林 吴发兴 +7 位作者 吴美芹 高许雷 李平 朱紫祥 张燕霞 张志 李晓成 单虎 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第6期1-5,共5页
参考GenBank上已发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp2基因序列和猪圆环病毒2型ORF1基因序列,分别设计并合成了可用于检测猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型的2对引物,扩增目的片段大小分别为421 bp和714 bp。在建立了用于检测猪繁殖... 参考GenBank上已发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp2基因序列和猪圆环病毒2型ORF1基因序列,分别设计并合成了可用于检测猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型的2对引物,扩增目的片段大小分别为421 bp和714 bp。在建立了用于检测猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型的单项PCR检测方法并优化单项PCR条件的基础上,建立了针对两种病毒的二重PCR检测方法。通过检测143份临床病料对二重PCR方法和单项PCR/RT-PCR方法进行了对比验证。结果显示,两者的总符合率在92.6%以上,表明该二重PCR检测方法可以用于临床病料的检测。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪圆环病毒2型 二重PCR
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黄曲霉毒素对雏鸡免疫机能的影响 被引量:6
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作者 高许雷 《中国动物检疫》 CAS 2016年第1期59-61,共3页
为了研究黄曲霉素对雏鸡免疫机能的影响,试验选用40只14日龄的海兰褐雏鸡,随机分为两组,每组20只。试验组饲喂被黄曲霉菌毒素污染的饲料,对照组饲喂未污染饲料,并于试验后14 d和21 d,从试验组和对照组分别随机抽取5只鸡进行免疫器官指... 为了研究黄曲霉素对雏鸡免疫机能的影响,试验选用40只14日龄的海兰褐雏鸡,随机分为两组,每组20只。试验组饲喂被黄曲霉菌毒素污染的饲料,对照组饲喂未污染饲料,并于试验后14 d和21 d,从试验组和对照组分别随机抽取5只鸡进行免疫器官指数测定和血清NDV抗体检测。结果表明,试验后14 d试验组与对照组各项指标无显著差异;试验后21 d试验组胸腺指数显著低于对照组,法氏囊指数极显著低于对照组,而脾脏指数无显著差异;试验组抗体效价降低,差异极显著(P<0.01),说明黄曲霉毒素会抑制雏鸡的免疫机能。 展开更多
关键词 黄曲霉毒素 雏鸡 抗体效价
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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体间接ELISA检测方法的建立
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作者 高许雷 孙国强 李永锋 《中国动物检疫》 CAS 2018年第11期75-78,共4页
为建立一种准确检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体的方法,通过对PRRSV基因连续缺失片段dNsp2(87)进行诱导表达,重组pUC57-dNsp2蛋白,经镍柱纯化后,作为抗原包被微量反应板,建立了检测PRRSV抗体的间接ELISA方法。经反应条件优化,确... 为建立一种准确检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体的方法,通过对PRRSV基因连续缺失片段dNsp2(87)进行诱导表达,重组pUC57-dNsp2蛋白,经镍柱纯化后,作为抗原包被微量反应板,建立了检测PRRSV抗体的间接ELISA方法。经反应条件优化,确定抗原的最适包被浓度为40μg/mL,最适封闭液为5%脱脂奶粉,检测血清稀释度为1:40,酶标二抗的最适工作浓度为1:5 000,最佳显色时间为1 h,确定阴阳性临界值为0.35(OD450)。该方法均不与猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒(PCV)、猪乙型脑炎病毒(JEV)、猪伪狂犬病毒(PRV)阳性血清发生交叉反应,具有良好的特异性。与IDEXX PRRSV Kit进行重复性、敏感性、符合性试验,证明该方法具有较好的重复性、敏感性、符合性。结果表明,该方法可用于临床PRRSV抗体的检测。 展开更多
关键词 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 基因连续缺失片段 间接ELISA
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牛至油和过瘤胃蛋氨酸不同组合对奶牛产奶性能和氮排泄的影响 被引量:6
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作者 丁大伟 滕乐帮 +2 位作者 高许雷 吕永艳 孙国强 《草业学报》 CSCD 北大核心 2020年第3期70-77,共8页
本试验旨在研究牛至油(Oo)和过瘤胃蛋氨酸(RPMet)的不同添加量组合对奶牛产奶性能与氮排泄的影响。选取年龄、体重、胎次、产奶量、乳成分及泌乳期(90±15)d相近的荷斯坦奶牛40头随机分为10个组,每组4头。对照(C)组饲喂基础日粮,试... 本试验旨在研究牛至油(Oo)和过瘤胃蛋氨酸(RPMet)的不同添加量组合对奶牛产奶性能与氮排泄的影响。选取年龄、体重、胎次、产奶量、乳成分及泌乳期(90±15)d相近的荷斯坦奶牛40头随机分为10个组,每组4头。对照(C)组饲喂基础日粮,试验组饲喂不同添加水平的Oo和RPMet,Oo添加水平分别为11.5(L)、13.0(M)、14.5(H)g·(d·头)^-1;RPMet添加水平分别为22.5(L)、25.0(M)、27.5(H)g·(d·头)^-1,共组成9个不同的添加量组合,分别为LL、ML、HL、LM、MM、HM、LH、MH、HH(第1个字母为Oo添加水平,第2个字母为RPMet添加水平)。预试期15 d,正试期60 d。结果表明:产奶量方面,LL、HL、HM、MH、HH组产奶量极显著高于对照组(P<0.01),以MH组最高。乳成分方面,MH、HM组乳脂率极显著提高(P<0.01);HM、HH组乳蛋白率极显著提高(P<0.01),各试验组在乳体细胞数均极显著低于对照组(P<0.01)。在氮排泄方面,LL、ML、LM、MM、HM、LH、MH、HH组氮排泄极显著低于对照组(P<0.01),以MH组最低。综合考虑上述指标,在本试验条件下,以MH组[Oo 13.0 g·(d·头)^-1、RPMet 27.5 g·(d·头)^-1]组合效果最好。 展开更多
关键词 牛至油 过瘤胃蛋氨酸 产奶性能 氮排泄
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