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低醇草莓果酒酿造工艺的研究 被引量:26
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作者 高兆建 唐世荣 邵颍 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第10期157-162,共6页
以果酒酵母XEC.19为菌种,新鲜草莓全汁为原料,对草莓果酒发酵工艺进行研究,结果表明,草莓不进行漂烫处理;按照0.025%的量添加果胶酶,40℃作用2h;添加偏重亚硫酸钾至80mg/L;采用一次加糖法将糖浓度调至20g/100ml,添加柠檬酸至果汁初始pH3... 以果酒酵母XEC.19为菌种,新鲜草莓全汁为原料,对草莓果酒发酵工艺进行研究,结果表明,草莓不进行漂烫处理;按照0.025%的量添加果胶酶,40℃作用2h;添加偏重亚硫酸钾至80mg/L;采用一次加糖法将糖浓度调至20g/100ml,添加柠檬酸至果汁初始pH3.2,主发酵温度控制在21℃,发酵7d;添加0.10%的皂土对草莓原酒澄清处理,再经过后发酵、陈酿、调配、杀菌工艺,最后得到酒精含量在10%,糖含量为4.5%的低醇优质、果香浓郁、色泽深红、澄清透明的优质草莓果酒。 展开更多
关键词 草莓果酒 酿造工艺 低醇
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耐高温β-半乳糖苷酶的分离纯化与酶学性质分析 被引量:8
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作者 高兆建 侯进慧 +1 位作者 孙会刚 刁进进 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第23期151-156,共6页
为从嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)XG24发酵液中纯化到β-半乳糖苷酶,并对酶学性质进行研究,利用硫酸铵分级盐析、DEAE-SepharoseFastFlow阴离子交换层析和SephadexG-75分子筛凝胶过滤层析等方法进行分离纯化。结果表... 为从嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)XG24发酵液中纯化到β-半乳糖苷酶,并对酶学性质进行研究,利用硫酸铵分级盐析、DEAE-SepharoseFastFlow阴离子交换层析和SephadexG-75分子筛凝胶过滤层析等方法进行分离纯化。结果表明:经过系列步骤纯化后,酶纯度提高了54.5倍,回收率20.4%,酶比活力达32.7U/mg。以邻-硝基酚-D-半乳糖吡喃糖苷(ONPG)为底物,研究β-半乳糖苷酶的酶学性质。最适pH6.5,最适作用温度65℃。此菌株产β-半乳糖苷酶在70℃以下和pH4.0~8.0范围内具有较好的稳定性;Mg2+、Mn2+、Fe2+和Co2+对此酶有明显激活作用,而Cu2+、Ag+、Hg2+几乎完全抑制酶活性。以ONPG为底物酶的Km值为4.32mmol/L。SDS-PAGE和凝胶过滤层析测得酶蛋白为单肽链蛋白,表观分子质量64kD。因此,嗜热脂肪芽孢杆菌XG24β-半乳糖苷酶在乳制品工业中具有潜在的应用价值。 展开更多
关键词 嗜热脂肪芽孢杆菌 Β-半乳糖苷酶 分离纯化 性质
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表面活性剂稳定性碱性蛋白酶纯化及性质研究 被引量:6
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作者 高兆建 李超 侯进慧 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第5期211-216,共6页
从地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)XG12发酵液中分离纯化表面活性剂稳定性碱性蛋白酶,并对酶学性质进行研究。利用硫酸铵分级盐析、DEAE-Sepharose阴离子交换层析和Sephadex G-75分子筛凝胶过滤层析等方法,分离纯化到了均一的酶蛋... 从地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)XG12发酵液中分离纯化表面活性剂稳定性碱性蛋白酶,并对酶学性质进行研究。利用硫酸铵分级盐析、DEAE-Sepharose阴离子交换层析和Sephadex G-75分子筛凝胶过滤层析等方法,分离纯化到了均一的酶蛋白,酶纯度提高了42.6倍,回收率为25.3%。SDS-PAGE及Sephadex G-75分子筛凝胶过滤层析显示酶蛋白为单亚基蛋白,分子质量约为29.5kD。在pH7.0~11.0范围内酶活性及稳定性较高,最适作用pH值为10.0,最适作用温度40℃。Mg2+、Ca2+及Mn2+对酶有明显激活作用。丝氨酸蛋白酶特异性抑制剂强烈抑制酶活性,表明所纯化到的蛋白酶为丝氨酸蛋白酶。酶分别对终质量浓度为0.1g/100mL的阴离子表面活性剂SDS、阳离子表面活性剂CTAB和体积分数为1%的非离子型表面活性剂Tween-80、Tween-20、Triton X-100以及氧化剂均具有很强的稳定性。 展开更多
关键词 地衣芽孢杆菌XG12 碱性蛋白酶 分离纯化 表面活性剂 酶学性质
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产低温弹性蛋白酶菌株的筛选及酶学特性分析 被引量:4
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作者 高兆建 陈尚龙 +1 位作者 巫有华 张莉 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1105-1111,共7页
筛选获得一株产生低温型弹性蛋白酶菌株并研究酶学性质,为该酶在肉类嫩化中应用奠定理论基础。在不溶性的弹性蛋白琼脂平板上,以弹性蛋白作为惟一氮源,根据水解圈直径和菌落直径的比值筛选到一株分泌低温型弹性蛋白酶的菌株,命名为XZE1... 筛选获得一株产生低温型弹性蛋白酶菌株并研究酶学性质,为该酶在肉类嫩化中应用奠定理论基础。在不溶性的弹性蛋白琼脂平板上,以弹性蛋白作为惟一氮源,根据水解圈直径和菌落直径的比值筛选到一株分泌低温型弹性蛋白酶的菌株,命名为XZE116,通过形态学、生理生化试验以及16s rDNA序列分析,该菌株鉴定为短芽孢杆菌(Bacillus brevis)。菌株所产弹性蛋白酶最适作用pH值8.0,在较广的pH值范围(7.0~12.0)内酶稳定性较好。酶最适作用温度25℃,在40℃以下保温2 h,酶稳定性好。浓度为5 mmol/L的Mg2+离子对酶有激活作用,但Hg2+、Pb2+强烈抑制酶活性。丝氨酸蛋白酶特异性抑制剂苯甲基磺酰氟(PMSF)强烈抑制酶活性,但E-64对酶活性没有影响,表明菌株XZE116弹性蛋白酶是丝氨酸蛋白酶。0.1%的阴离子表面活性剂SDS、阳离子表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)以及非离子型表面活性剂Triton X-100对酶活性有轻微的抑制作用。这些酶的优良生化特性赋予了该酶在肉品工业中具有潜在的应用价值。 展开更多
关键词 低温弹性蛋白酶 短芽孢杆菌 鉴定 酶学性质
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短芽孢杆菌低温弹性蛋白酶酶学特性分析 被引量:3
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作者 高兆建 巫有华 +2 位作者 张桂英 李同祥 张莉 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期149-154,共6页
旨在从短芽孢杆菌(Bacillus brevis)XZE116发酵液中分离纯化低温弹性蛋白酶,并对酶学性质进行研究。利用硫酸铵分级盐析、DEAE-Sepharose阴离子交换层析和Sephadex G-75分子筛凝胶过滤层析等方法进行纯化。结果显示,分离纯化到了均一的... 旨在从短芽孢杆菌(Bacillus brevis)XZE116发酵液中分离纯化低温弹性蛋白酶,并对酶学性质进行研究。利用硫酸铵分级盐析、DEAE-Sepharose阴离子交换层析和Sephadex G-75分子筛凝胶过滤层析等方法进行纯化。结果显示,分离纯化到了均一的酶蛋白,酶纯度提高了37.21倍,回收率为35.3%。SDS-PAGE及Sephadex G-75分子筛凝胶过滤层析显示酶蛋白为单亚基蛋白,分子量是32.6 kD。最适作用温度25℃。在pH7.5-10.5范围内酶活性及稳定性较高,最适作用pH9.0,Mg2+对酶有明显激活作用。丝氨酸蛋白酶特异性抑制剂强烈抑制酶活性,表明所纯化到的弹性蛋白酶属于丝氨酸蛋白酶。酶对阴离子表面活性剂(0.1%SDS)、阳离子表面活性剂(0.1%CTAB)和非离子型表面活性剂(1%Tween80)均具有很强的稳定性。鉴于短芽孢杆菌XZE116弹性蛋白酶具有以上优良酶特性,它在肉品嫩化领域具有潜在的应用价值。 展开更多
关键词 短芽孢杆菌XZE116 低温弹性蛋白酶 分离纯化 酶学性质
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耐高温β-半乳糖苷酶产生菌诱变和突变菌株产酶特性 被引量:2
6
作者 高兆建 李勇 +2 位作者 陈尚龙 张桂英 纪伟 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2012年第24期180-183,共4页
以产β-半乳糖苷酶嗜热脂肪芽孢杆菌Bacillus stearothermophilus XG24为原始菌株,先后经微波辐照、亚硝基胍(NTG)诱变,选育获得1株高产突变菌株XGN52。产酶量比原始菌株提高了115.92%,其最大产酶量为31.59U/mL。经过10次传代实验,稳定... 以产β-半乳糖苷酶嗜热脂肪芽孢杆菌Bacillus stearothermophilus XG24为原始菌株,先后经微波辐照、亚硝基胍(NTG)诱变,选育获得1株高产突变菌株XGN52。产酶量比原始菌株提高了115.92%,其最大产酶量为31.59U/mL。经过10次传代实验,稳定性良好。突变菌株XGN52最适发酵时间36h,初始pH7.0,温度42℃。与原始菌株相比,突变株XGN52的产酶特性发生了改变。研究结果显示采用微波和NTG复合诱变对提高β-半乳糖苷酶产量具有显著的效果。 展开更多
关键词 Β-半乳糖苷酶 复合诱变 突变株 产酶特性
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生物工程专业实践教学与科研相融合的创新教学模式探索 被引量:3
7
作者 高兆建 张建萍 +4 位作者 张传丽 范晓博 周金伟 张娜 孙会刚 《安徽农业科学》 CAS 2021年第9期273-275,共3页
以徐州工程学院生物工程专业为例,提出了“实践教学与科研相融合”的教学模式,充分利用科研项目的先进性、创新性等特点,将科研融入实践教学中;探讨了科研融于实践教学的教学模式,并提出了具体保障有效融合的措施。通过不断改革探索和... 以徐州工程学院生物工程专业为例,提出了“实践教学与科研相融合”的教学模式,充分利用科研项目的先进性、创新性等特点,将科研融入实践教学中;探讨了科研融于实践教学的教学模式,并提出了具体保障有效融合的措施。通过不断改革探索和总结创新,科研与教学融合的教学模式显著提高了学生的综合素质和创新能力。 展开更多
关键词 教学模式 实践教学 教学科研融合 生物工程
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短小芽孢杆菌XZG33耐高温酸性β-甘露聚糖酶酶学性质研究 被引量:2
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作者 高兆建 唐仕荣 +1 位作者 孙会刚 侯进慧 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第18期9396-9399,共4页
[目的]从短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)XZG33发酵液中分离纯化甘露聚糖酶,并对其酶学性质进行研究。[方法]利用硫酸铵分级盐析、DEAE-cellulose DE52阴离子交换层析和Sephadex G-100分子筛凝胶过滤层析等方法,分离纯化到了均一的蛋白... [目的]从短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)XZG33发酵液中分离纯化甘露聚糖酶,并对其酶学性质进行研究。[方法]利用硫酸铵分级盐析、DEAE-cellulose DE52阴离子交换层析和Sephadex G-100分子筛凝胶过滤层析等方法,分离纯化到了均一的蛋白酶,酶纯度提高了39.7倍,回收率20.2%。通过SDS-PAGE电泳和SephadexG-75分子筛凝胶电泳测得酶蛋白分子量是40.0 kDa,为单亚基蛋白。酶最适作用pH值5.0,最适作用温度60℃,在pH值2.0~8.0范围内酶活性及稳定性较高。在80℃以下保温1 h,残余酶活还在80.0%以上。二价金属离子Mg2+、Ca2+、Co2+及Mn2+对酶有明显激活作用。酶对槐豆胶有强的底物水解特异性,而对淀粉、羧甲基纤维素钠以及桦树木聚糖水解活性极低。在最适作用条件下,以槐豆胶为底物测定Km为4.6 mg/ml。[结论]鉴于短小芽孢杆菌XZG33甘露聚糖酶具有以上优良的酶特性,它在食品原料及功能性低聚糖的开发方面有着潜在的应用价值。 展开更多
关键词 短小芽孢杆菌 甘露聚糖酶 分离纯化 酶学性质
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低醇菠萝果酒酿造工艺的研究 被引量:31
9
作者 高兆建 《中国酿造》 CAS 北大核心 2005年第11期16-19,共4页
用发酵法生产低醇优质菠萝果酒,对4种果酒专用的酿酒酵母进行了对比试验,确定选用最适合菠萝酒酿造的酵母菌株Y19;同时对影响菠萝果酒品质的重要工艺参数进行了探讨,确定菠萝果酒酿造最佳含糖量为20%,主发酵温度20℃,发酵时间7d,添加偏... 用发酵法生产低醇优质菠萝果酒,对4种果酒专用的酿酒酵母进行了对比试验,确定选用最适合菠萝酒酿造的酵母菌株Y19;同时对影响菠萝果酒品质的重要工艺参数进行了探讨,确定菠萝果酒酿造最佳含糖量为20%,主发酵温度20℃,发酵时间7d,添加偏重亚硫酸钾110mg/L。经过成分调配、澄清、陈酿等工艺得到酒精含量为10%(v/v),糖含量为45g/L的优质、低醇甜型菠萝果酒。 展开更多
关键词 菠萝 酿造 果酒 低醇
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菠萝果酒发酵的工艺 被引量:23
10
作者 高兆建 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期98-103,共6页
以菠萝全汁为原料,对菠萝果酒的加工工艺及影响菠萝果酒品质的关键性工艺参数进行了研究.按照0.025%的比例向压榨后的果汁中添加果胶酶,并保温40 ℃作用2 h后,采用正交试验法优化发酵条件,结果显示:采用一次加糖法将糖质量浓度调至每10... 以菠萝全汁为原料,对菠萝果酒的加工工艺及影响菠萝果酒品质的关键性工艺参数进行了研究.按照0.025%的比例向压榨后的果汁中添加果胶酶,并保温40 ℃作用2 h后,采用正交试验法优化发酵条件,结果显示:采用一次加糖法将糖质量浓度调至每100 mL 20 g,添加柠檬酸至pH 3.6、添加偏重亚硫酸钾至质量浓度110 mg/L、主发酵温度22 ℃,发酵7 d;后发酵温度16 ℃,发酵10 d;10 ℃陈酿2~3个月.采用明胶-丹宁复合澄清剂澄清处理,最后75 ℃,15 min杀菌后,得到果香浓郁、色泽金黄、澄清透明的优质菠萝果酒. 展开更多
关键词 菠萝酒 菠萝 发酵工艺
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源自泡菜的植物乳杆菌产新型广谱抑菌细菌素的特性分析 被引量:10
11
作者 高兆建 黄亮浩 +2 位作者 丁飞鸿 赵宜峰 陈腾 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第10期171-177,共7页
筛选对食源性致病菌和腐败菌有特异性抑制作用的产细菌素乳酸菌菌株,并研究细菌素的特性,为其在食品防腐中的应用提供参考。从分离自泡菜的112株乳酸菌中反复筛选得到1株产细菌素(BacH32)菌株(Hlh32),经鉴定菌株Hlh32为植物乳杆菌(Lacto... 筛选对食源性致病菌和腐败菌有特异性抑制作用的产细菌素乳酸菌菌株,并研究细菌素的特性,为其在食品防腐中的应用提供参考。从分离自泡菜的112株乳酸菌中反复筛选得到1株产细菌素(BacH32)菌株(Hlh32),经鉴定菌株Hlh32为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),其在35℃MRS培养基中发酵至稳定期即18~24 h达到最大BacH32产量(对金黄色葡萄球菌的抑菌活性达到1 850 AU/mL)。通过硫酸铵盐析、DEAE Sepharose Fast Flow离子交换层析、Sephadex G-15凝胶过滤层析、制备型高效液相色谱等方法进行纯化。Trinice十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳结果显示BacH32分子质量为6.7 kDa,与文献报道的植物乳杆菌细菌素分子质量有显著差异。细菌素BacH32对蛋白酶敏感,而脂肪酶、α-淀粉酶和β-淀粉酶对其无影响,表明BacH32为蛋白质。BacH32在pH 2~9的环境下孵育4 h,在37、60、80、100℃保持30 min或121℃保持15 min仍能保持较好抑菌活性。细菌素BacH32对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌具有广谱抑菌活性,对真菌也有一定的抑菌活性。向培养至对数初期的金黄色葡萄球菌中添加BacH32,菌体生长完全受到抑制。以上特性表明植物乳杆菌Hlh32合成的细菌素BacH32有潜力作为天然食品防腐剂在食品中使用。 展开更多
关键词 植物乳杆菌 细菌素 纯化 抑菌作用
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广谱拮抗菌株的筛选诱变及抗菌物质分离鉴定 被引量:7
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作者 高兆建 王秋芬 +4 位作者 丁飞鸿 许祥 赵宜峰 焦魏 陈腾 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第2期143-150,共8页
分离和鉴定产生广谱抗菌活性物质的菌株,并对抗菌物质分离鉴定。通过形态学、生理生化特征和16S rDNA序列分析鉴定菌株。采用紫外线-硫酸二乙酯化学复合诱变的方法,获得抗菌能力强、遗传稳定的高产菌株。分别用甲醇提取、凝胶过滤色谱(S... 分离和鉴定产生广谱抗菌活性物质的菌株,并对抗菌物质分离鉴定。通过形态学、生理生化特征和16S rDNA序列分析鉴定菌株。采用紫外线-硫酸二乙酯化学复合诱变的方法,获得抗菌能力强、遗传稳定的高产菌株。分别用甲醇提取、凝胶过滤色谱(Sephadex G-10)和半制备高效液相色谱分离纯化抗菌物质,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)技术对抗菌物质鉴定。本研究从土壤中分离出67株芽孢杆菌。其中8株表现出较强的抗菌作用,菌株XF32表现出显著广谱抑制活性,并鉴定为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。菌株XF32对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌、铜绿假单胞菌7种病原菌具有抗菌活性,对酿酒酵母、黑曲霉、深绿木霉和尖孢镰刀菌有抗真菌活性。经诱变筛选得到突变菌株XF32-22,对金黄色葡萄球菌的抑菌活性比原始菌株显著提高,分离纯化抗菌物质,得到单一的抗菌成分。MALDI-TOF-MS分析表明抗菌物质为Fengycin系脂肽化合物。采用复合诱变技术,可以有效地提高地衣芽孢杆菌脂肽的产量。成功分离得到对多种病原细菌具有较强抑制作用的Fengycin类脂肽,同时该菌株在拮抗植物病原真菌方面也有明显效果。XF32-22菌株在食品保鲜和农业生物防治方面具有很好的应用前景。 展开更多
关键词 地衣芽孢杆菌 诱变 抗菌 纯化 脂肽
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筛选自泡菜的发酵乳杆菌细菌素纯化及抑菌特性分析 被引量:11
13
作者 高兆建 张艳秋 +1 位作者 宋玉林 赵宜峰 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2021年第3期201-207,283,共8页
从中国传统发酵蔬菜中筛选鉴定对食源性致病菌有广谱抗性的细菌素(命名为BLF52)产生菌株并对细菌素分离纯化和抑菌特性分析。分子筛凝胶过滤层析和半制备高效液相色谱(RP-HPLC)纯化细菌素并用Tricine-SDS-PAGE法测定其分子量。筛选得到... 从中国传统发酵蔬菜中筛选鉴定对食源性致病菌有广谱抗性的细菌素(命名为BLF52)产生菌株并对细菌素分离纯化和抑菌特性分析。分子筛凝胶过滤层析和半制备高效液相色谱(RP-HPLC)纯化细菌素并用Tricine-SDS-PAGE法测定其分子量。筛选得到产细菌素的发酵乳杆菌(Lactobacilus fermentum)CH-16。MRS培养基中34℃发酵至稳定期前期即24~30 h对S.aureus抑制活性最大(875 AU/mL)。BLF52纯化至单一组分,分子量5.6 kDa,40~80℃(30 min)、pH2.0~7.0(2 h)有良好稳定性。胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和蛋白酶K处理后,抑菌活性完全丧失,α-淀粉酶对其无影响,表明BLF52有典型的细菌素特性。BLF52对食源性腐败菌和致病菌如单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌、蜡状芽孢杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、铜绿假单胞菌、大肠杆菌和副溶血性弧菌均有抑制活性,通过杀菌模式抑制培养中的S.aureus生长。细菌素BLF52有潜力开发为适合酸性或中性食品使用的食品防腐剂。 展开更多
关键词 细菌素 发酵乳杆菌 分离纯化 抑菌特性
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产黄青霉抗真菌几丁质酶的纯化及特性分析 被引量:6
14
作者 高兆建 丁飞鸿 +2 位作者 陈欢 耿云龙 赵宜峰 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第14期129-136,共8页
为实现抗真菌性能的耐热新型几丁质酶在食品防腐及生物防治方面的应用,从产黄青霉Xch23中分离纯化几丁质酶(Chi-Pc76)并研究其应用特性。通过硫酸铵沉淀、DEAE-Cellulose A52离子交换层析和Sephadex G-100凝胶过滤层析纯化得到均一的Chi... 为实现抗真菌性能的耐热新型几丁质酶在食品防腐及生物防治方面的应用,从产黄青霉Xch23中分离纯化几丁质酶(Chi-Pc76)并研究其应用特性。通过硫酸铵沉淀、DEAE-Cellulose A52离子交换层析和Sephadex G-100凝胶过滤层析纯化得到均一的Chi-Pc76。最终得到Chi-Pc76纯化倍数17.1倍,回收率21.6%,比活力为584.8 U/mg。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得Chi-Pc76分子质量61 kDa。纯化后的Chi-Pc76最佳反应条件为pH 6.0、温度55℃。Chi-Pc76在宽泛的pH 4.0~10.0之间稳定性强,其显著的热稳定性可达到70℃。ChiPc76对底物胶体几丁质具有高的底物特异性,对乙二醇几丁质、α-几丁质、β-几丁质有中等活性,而对其他受试底物无活性或痕量活性。以胶体几丁质为底物K_(m)和V_(max)值分别为0.25 mg/mL和20μmol/(min·mg)。金属离子Ca^(2+)、Ba^(2+)、K^(+)、Na^(+)对酶有明显激活作用;十二烷基硫酸钠、吐温80、苯甲基磺酰氟和尿素对酶活力基本无影响,但Mn^(2+)、Co^(2+)、Fe^(2+)、Ag+、Cu^(2+)、Zn^(2+)、Pb^(2+)、Hg^(2+)和β-巯基乙醇、二硫苏糖醇均对酶活力有抑制作用。Chi-Pc76对黑曲霉、黄曲霉、尖孢镰刀菌和橘青霉均有显著的抗真菌活性,对比文献为产黄青霉抗真菌几丁质酶。鉴于Chi-Pc76纯化简便、热稳定性好、宽广的pH值稳定性、高效降解几丁质和抗真菌等特点,产黄青霉Xch23几丁质酶在几丁质废料综合利用、生物转化药理活性产品、食品保鲜以及植物病原性真菌和昆虫幼虫生物防治等方面具有潜在价值。 展开更多
关键词 几丁质酶 产黄青霉 分离纯化 酶学特性 抗真菌
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深绿木霉嗜酸性阿魏酸酯酶酶学性质及生物质转化分析 被引量:5
15
作者 高兆建 许祥 +5 位作者 王先凤 芦宁 王旭东 张铁柱 张抗震 焦巍 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第10期121-128,共8页
为实现生物质的高效降解,制备具有重要生理功能的阿魏酸,本实验从深绿木霉XS6发酵液中分离纯化深绿木霉阿魏酸酯酶(Trichoderma atroatroviride feruloyl esterase,TaFAE),并研究酶学特性。发酵液经(NH_4)_2SO_4沉淀、DEAE-Cellulose D... 为实现生物质的高效降解,制备具有重要生理功能的阿魏酸,本实验从深绿木霉XS6发酵液中分离纯化深绿木霉阿魏酸酯酶(Trichoderma atroatroviride feruloyl esterase,TaFAE),并研究酶学特性。发酵液经(NH_4)_2SO_4沉淀、DEAE-Cellulose DE52阴离子交换层析和Sephadex G-200凝胶过滤层析后,得到电泳纯的TaFAE,比活力134.3 U/mg,回收率28.9%,纯化倍数31.52。经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳测得酶分子质量约为66.4 kDa。TaFAE对阿魏酸甲酯亲和力最高,以其为底物,酶K_m值和V_(max)值分别为0.53 mmol/L和16.74 μmol/(min·mg)。以芥子酸甲酯为底物,酶促反应速率最大,达到32.21 μmol/(min·mg),是阿魏酸甲酯的2倍,对咖啡酸甲酯无活性,说明该酶具有严格的底物特异性。TaFAE最适pH值和温度分别为pH 4.0和40℃。在pH 2.0~9.0的范围内,30~40℃温度下都表现出良好的稳定性。金属离子Ca^(2+)和Mg^(2+)对TaFAE活性有显著激活作用,重金属离子Hg^(2+)和Pb^(2+)几乎完全抑制酶活性;β-巯基乙醇、二硫苏糖醇、十二烷基硫酸钠、Trition X-100增强酶活性,苯甲基磺酰氟有较强的抑制作用。木聚糖酶降解生物质的体系中加入TaFAE可显著增加阿魏酸和还原糖产量,表明TaFAE和木聚糖酶有良好协同作用。综上所述,TaFAE优良的耐酸性及其他酶学性质说明其在食品和饲料行业有较好的应用潜力。 展开更多
关键词 阿魏酸酯酶 深绿木霉(Trichoderma atroatroviride)XS6 分离纯化 酶学性质 生物质转化
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凝结芽孢杆菌XZQ-16抗菌脂肽分离鉴定及抗菌特性 被引量:7
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作者 高兆建 王秋芬 +3 位作者 胡鑫强 宋玉林 赵宜峰 陈腾 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2021年第3期36-42,共7页
对凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)XZQ-16脂肽分离鉴定并探讨其抗腐败菌特性。通过酸沉、硅胶柱层析和Sephadex LH-20层析对脂肽分离纯化,利用傅里叶红外光谱(FT-IR)和反相高效液相色谱(RP-HPLC)对脂肽分析鉴定。结果表明,硅胶柱层析... 对凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)XZQ-16脂肽分离鉴定并探讨其抗腐败菌特性。通过酸沉、硅胶柱层析和Sephadex LH-20层析对脂肽分离纯化,利用傅里叶红外光谱(FT-IR)和反相高效液相色谱(RP-HPLC)对脂肽分析鉴定。结果表明,硅胶柱层析得到三个流分具有明显抗菌活性;Sephadex LH-20层析分离出四个洗脱峰,洗脱峰III抑菌活性明显;FT-IR确定纯化的抗菌物质中含有脂肽类化合物;RP-HPLC分析并与标准样对照确定分离的抗菌物质为伊枯菌素(iturin)和表面活性素(surfactin)同系物。脂肽宽泛的pH范围(4.0~12.0)酸碱耐受性好,在120℃以下保温30 min抗菌活性在80%以上。脂肽能抑制多种常见的食源性致病菌,包括革兰氏阳性菌如蜡样芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、单核增生李斯特菌、藤黄微球菌等以及革兰氏阴性菌如大肠杆菌、铜绿假单胞菌、沙门氏菌、痢疾志贺氏菌等。同商业化应用的乳酸链球菌素(nisin)和多粘菌素相比,菌株XZQ-16脂肽除了对细菌具有明显抑制作用,还对真菌如白色念珠菌、毕赤酵母和黑曲霉也有抑制作用。B.coagulans XZQ-16脂肽表现出极高的稳定性和广谱抗菌活性,为在食品、畜牧、医药、化妆品及植物保护等领域的应用奠定理论基础。 展开更多
关键词 脂肽 凝结芽孢杆菌 纯化 鉴定 抗菌特性
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地方应用型本科院校基因工程实验教学改革探索 被引量:3
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作者 高兆建 张娜 +2 位作者 周金伟 范晓博 张传丽 《安徽农业科学》 CAS 2021年第7期280-282,共3页
基因工程是生物工程专业一门重要的实践性很强的专业课程。为了改进基因工程实验教学质量、促进学生综合能力的培养,根据基因工程实验教学的特点,结合该课程的实际教学情况,分析了基因工程课程教学中存在的问题,并从教学内容及形式等方... 基因工程是生物工程专业一门重要的实践性很强的专业课程。为了改进基因工程实验教学质量、促进学生综合能力的培养,根据基因工程实验教学的特点,结合该课程的实际教学情况,分析了基因工程课程教学中存在的问题,并从教学内容及形式等方面进行一些教学改革探索。通过几年的教学改革和总结创新,充分改善了基因工程实验教学效果,调动了学生的实验积极性,提高了学生的综合素质和科研能力。 展开更多
关键词 基因工程 实践教学 教学改革
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腊肉拮抗菌分离及抗真菌脂肽特性分析 被引量:5
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作者 高兆建 秦宸锴 +3 位作者 黄亮浩 朱双 朱劲虎 赵宜峰 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第8期129-136,共8页
从传统腊肉中筛选拮抗菌株,纯化鉴定新型抗菌物质并对其抗菌特性研究,为抗菌脂肽在食品防腐中的应用提供理论依据。采用抑菌圈法筛选拮抗菌株;通过酸沉淀、硅胶柱层析和半制备反相高效液相色谱分离纯化抗菌脂肽;通过傅里叶红外光谱、基... 从传统腊肉中筛选拮抗菌株,纯化鉴定新型抗菌物质并对其抗菌特性研究,为抗菌脂肽在食品防腐中的应用提供理论依据。采用抑菌圈法筛选拮抗菌株;通过酸沉淀、硅胶柱层析和半制备反相高效液相色谱分离纯化抗菌脂肽;通过傅里叶红外光谱、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱对脂肽鉴定。结果表明,筛选得到12株拮抗细菌,其中菌株XLP27对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌以及对1株酵母菌和4株霉菌有明显抑菌作用。拮抗菌株XLP27鉴定为短小芽孢杆菌,其抗菌物质主要在稳定期合成,并在发酵60 h时达到最大产量。分离纯化得到单一组分抗菌物质,并鉴定为环状脂肽Iturin A,其由m/z 1046.182、1060.213、1074.198、1088.201和1102.175的5个同系物组成,对应脂肪酸链长度C14~C18。脂肽具有极高的热稳定性,在40~100℃下保温30 min活性基本保持不变,在较宽的pH值范围(4~10)内稳定性好,且对所有蛋白水解酶不敏感。菌株XLP27所产抗菌物质主要是脂肽Iturin A,具有广谱抑菌活性,稳定性良好,有潜力在食品保鲜和农业生物防治领域替代传统抗菌剂使用。 展开更多
关键词 脂肽 短小芽孢杆菌 伊枯菌素 抗真菌
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新型耐热耐酸普鲁兰酶的分离纯化与酶学特性分析 被引量:3
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作者 高兆建 陈雪莲 +5 位作者 王先凤 许祥 李宝林 焦魏 芦宁 尚业成 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2019年第4期75-81,共7页
从泡盛曲霉(Aspergillus awamori) XF发酵液中分离纯化普鲁兰酶(PulXF)并研究其酶学性质。通过硫酸铵沉淀、阴离子交换层析、凝胶过滤层析和疏水层析,纯化得到一种电泳纯的PulXF。纯化倍数8.16倍,比活力为309.28 U/mg。SDS-PAGE检测得... 从泡盛曲霉(Aspergillus awamori) XF发酵液中分离纯化普鲁兰酶(PulXF)并研究其酶学性质。通过硫酸铵沉淀、阴离子交换层析、凝胶过滤层析和疏水层析,纯化得到一种电泳纯的PulXF。纯化倍数8.16倍,比活力为309.28 U/mg。SDS-PAGE检测得单条带,表明PulXF为单亚基蛋白,分子量63.7 kDa。在50-80℃,pH4.5~8.0范围内,酶能保持高活性,最适反应温度60℃,最适pH5.0。在较广的pH范围内(pH3.0~8.0),28℃下,经过24 h酶活能保持80%以上活性。K_m值和V_(max)分别为0.92 mg/mL和11.90μmol/min。酶活测定及TLC分析显示PulXF对普鲁兰多糖有强水解活性,终产物麦芽三糖;对支链淀粉和可溶性淀粉有较弱活性,对直链淀粉、α-环糊精、β-环糊精和糖原无活性。表明从泡盛曲霉XF分离的PulXF属于Ⅰ型普鲁兰酶。Ca^(2+)、Zn^(2+)和Mg^(2+)能够促进酶的活性,其中Ca^(2+)激活作用最强。而PulXF在5%浓度的SDS、CTAB、Tween 80和30%的乙醇中保持高稳定性。基于PulXF在苛刻环境下的高稳定性及高活性,很有希望在淀粉加工、食品饮料等领域以及需要在高温、高酸环境下使用的生物技术工业中使用。 展开更多
关键词 普鲁兰酶 泡盛曲霉XF 分离纯化 酶学性质
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用于高果糖浆制备的宛氏拟青霉嗜热嗜酸菊粉酶酶学特性分析 被引量:2
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作者 高兆建 王先凤 +4 位作者 芦宁 李宝林 张抗震 许祥 陈雪莲 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第8期94-101,共8页
为实现酶法水解菊糖制备高果糖浆,从宛氏拟青霉(Paecilomyces variotii)XS27发酵液中分离纯化菊粉酶,并对其酶学特性进行研究。发酵液经过硫酸铵盐析、透析、DEAE-Sepharose Fast Flow层析、Sephacry S-100分子筛过滤层析,得到电泳纯的... 为实现酶法水解菊糖制备高果糖浆,从宛氏拟青霉(Paecilomyces variotii)XS27发酵液中分离纯化菊粉酶,并对其酶学特性进行研究。发酵液经过硫酸铵盐析、透析、DEAE-Sepharose Fast Flow层析、Sephacry S-100分子筛过滤层析,得到电泳纯的菊粉酶,比活力327.4 U/mg,纯化倍数37.85。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳测得菊粉酶为单一亚基的酶蛋白,分子质量62.0 kDa。菊粉酶能在较宽的pH值范围(3.5~6.5)内保持高活性,最适作用pH 4.0。在温度40~65℃之间,酶活力较高,最适作用温度为60℃。薄层色谱分析显示菊粉酶水解菊糖最终产物为果糖。以菊糖为底物,酶的K_m和V_(max)分别为5.93μmol/L和75.18μmol/(L·min)。Mg2+、Mn2+、Ca2+对酶有显著激活作用,Ba2+、Ni2+和Hg2+对酶有一定抑制作用。β-巯基乙醇、二硫苏糖醇和乙二胺四乙酸对酶有抑制作用,表面活性剂(十二烷基硫酸钠、Tween 80和Trition X100)以及乙醇对酶活力没有影响。从宛氏拟青霉XS27发酵液中分离纯化的菊粉酶在强酸高热的环境下具有强活性和稳定性,对表面活性剂乙醇有高耐受性,适合于果葡糖浆的工业化生产。 展开更多
关键词 菊粉酶 高果糖浆 分离纯化 酶学特性
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