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利用his-tag纯化和复性基因工程产物肠激酶
被引量：
2
1
作者
顾玮彦
黄磊
+1 位作者
徐志南
岑沛霖
《食品与生物技术学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第6期18-22,共5页
构建了融合表达肠激酶轻链（EKLC）的基因工程大肠杆菌，将该菌于37℃在含30mg／L卡那霉素的LB培养基中培养，当细胞密度（OD600）达到0．5～0．6时加入最终浓度为0．4mmol／L的IPTG并降温至26℃进行诱导表达，4h后目的蛋白质的表达量...
构建了融合表达肠激酶轻链（EKLC）的基因工程大肠杆菌，将该菌于37℃在含30mg／L卡那霉素的LB培养基中培养，当细胞密度（OD600）达到0．5～0．6时加入最终浓度为0．4mmol／L的IPTG并降温至26℃进行诱导表达，4h后目的蛋白质的表达量可达菌体总蛋白质的40％以上，但所表达的重组产物大多以包涵体形式存在于菌体中。利用产物N端携带6个组氨酸标签与金属螯合层析介质中镍离子的亲和性，应用镍离子金属螯和层析对样品包涵体进行了纯化和复性研究。实验结果表明，在变性条件下纯化的样品在柱上不经洗脱，直接用复性液洗涤6h，可以使EKLC在得到提纯的同时实现复性，得到了电泳纯度为96％的具有生物活性的EKLC，最高活性为712U。
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关键词
牛肠激酶
纯化
复性
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职称材料
重组牛肠激酶轻链在大肠杆菌中的表达和纯化
2
作者
黄磊
阮红
+2 位作者
徐志南
顾玮彦
岑沛霖
《江南大学学报（自然科学版）》
CAS
2007年第4期478-482,共5页
密码子优化全基因合成了牛肠激酶轻链基因(sBEKLC),采用pET-39b(+)构建了融合表达载体,在大肠杆菌中进行了成功表达.37℃在含30 mg/L卡那霉素的LB培养基中培养,当细胞密度(D600)达到0.5时,降低温度到28℃,加入终浓度为0.1 mM的异丙基硫...
密码子优化全基因合成了牛肠激酶轻链基因(sBEKLC),采用pET-39b(+)构建了融合表达载体,在大肠杆菌中进行了成功表达.37℃在含30 mg/L卡那霉素的LB培养基中培养,当细胞密度(D600)达到0.5时,降低温度到28℃,加入终浓度为0.1 mM的异丙基硫代-βD-硫代半乳糖苷诱导外源蛋白表达,继续培养6 h后收集菌体,融合蛋白(DsbA-sBEKLC)产量达到151.2mg/L,相当于80.6 mg/L sBEKLC.使用渗透冲击技术从细胞周质中提取sBEKLC,经过亲和层析可从每升发酵液中得到6.8 mg sBEKLC,经检测sBEKLC具有生物活性.
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关键词
肠激酶
融合表达
纯化
生物活性
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职称材料
题名
利用his-tag纯化和复性基因工程产物肠激酶
被引量：
2
1
作者
顾玮彦
黄磊
徐志南
岑沛霖
机构
浙江大学生物工程研究所
出处
《食品与生物技术学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第6期18-22,共5页
基金
国家自然科学基金项目(30370039)
文摘
构建了融合表达肠激酶轻链（EKLC）的基因工程大肠杆菌，将该菌于37℃在含30mg／L卡那霉素的LB培养基中培养，当细胞密度（OD600）达到0．5～0．6时加入最终浓度为0．4mmol／L的IPTG并降温至26℃进行诱导表达，4h后目的蛋白质的表达量可达菌体总蛋白质的40％以上，但所表达的重组产物大多以包涵体形式存在于菌体中。利用产物N端携带6个组氨酸标签与金属螯合层析介质中镍离子的亲和性，应用镍离子金属螯和层析对样品包涵体进行了纯化和复性研究。实验结果表明，在变性条件下纯化的样品在柱上不经洗脱，直接用复性液洗涤6h，可以使EKLC在得到提纯的同时实现复性，得到了电泳纯度为96％的具有生物活性的EKLC，最高活性为712U。
关键词
牛肠激酶
纯化
复性
Keywords
enterokinase
purification
refolding
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
重组牛肠激酶轻链在大肠杆菌中的表达和纯化
2
作者
黄磊
阮红
徐志南
顾玮彦
岑沛霖
机构
浙江大学材料与化学工程学院
浙江大学城市学院
出处
《江南大学学报（自然科学版）》
CAS
2007年第4期478-482,共5页
基金
国家自然科学基金项目(30370039)
文摘
密码子优化全基因合成了牛肠激酶轻链基因(sBEKLC),采用pET-39b(+)构建了融合表达载体,在大肠杆菌中进行了成功表达.37℃在含30 mg/L卡那霉素的LB培养基中培养,当细胞密度(D600)达到0.5时,降低温度到28℃,加入终浓度为0.1 mM的异丙基硫代-βD-硫代半乳糖苷诱导外源蛋白表达,继续培养6 h后收集菌体,融合蛋白(DsbA-sBEKLC)产量达到151.2mg/L,相当于80.6 mg/L sBEKLC.使用渗透冲击技术从细胞周质中提取sBEKLC,经过亲和层析可从每升发酵液中得到6.8 mg sBEKLC,经检测sBEKLC具有生物活性.
关键词
肠激酶
融合表达
纯化
生物活性
Keywords
enterokinase
fusion expression
purification
enzyme activity
分类号
Q819 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
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1
利用his-tag纯化和复性基因工程产物肠激酶
顾玮彦
黄磊
徐志南
岑沛霖
《食品与生物技术学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006
2
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职称材料
2
重组牛肠激酶轻链在大肠杆菌中的表达和纯化
黄磊
阮红
徐志南
顾玮彦
岑沛霖
《江南大学学报（自然科学版）》
CAS
2007
0
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职称材料
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