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谷氨酰胺转氨酶耐热突变体在茂原链霉菌中的表达及酶学性质分析
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作者 陈智恒 周灿 +4 位作者 韦佐权 谭亚梦 叶佳才 崔世修 刘松 《食品与发酵工业》 北大核心 2025年第10期9-16,共8页
谷氨酰胺转氨酶(transglutaminase,TGase)能催化蛋白质交联,被广泛用于食品加工。为促进其工业化应用,该研究成功构建了高产耐热TGase的茂原链霉菌(Streptomyces mobaraensis)。首先,合成了TGase耐热突变体TGm3表达框(1745 bp),包含了S.... 谷氨酰胺转氨酶(transglutaminase,TGase)能催化蛋白质交联,被广泛用于食品加工。为促进其工业化应用,该研究成功构建了高产耐热TGase的茂原链霉菌(Streptomyces mobaraensis)。首先,合成了TGase耐热突变体TGm3表达框(1745 bp),包含了S.mobaraensis TGase天然启动子、酶原区、终止子及TGm3编码序列(基于链霉菌密码子偏好性优化)。其次,基于双交换同源重组将TGm3表达框整合至S.mobaraensis诱变菌smY2019-Δtg的TGase基因位点,得到TGm3生产菌smY2019-TGm3。最后,分析了smY2019-TGm3发酵水平及TGm3酶学性质。摇瓶发酵结果显示,smY2019-TGm3发酵至60 h胞外TGase酶活力达到最大值(19.5 U/mL)。经阳离交换柱纯化后,TGm3比酶活力达到了41.76 U/mg,是野生型TGase的1.7倍。酶学性质分析显示,TGm3的60℃半衰期(60.6 min)和最适反应温度(60℃)分别较野生型TGase提高32.6倍和10℃。上述结果表明,smY2019-TGm3能高效合成耐热TGase,具有一定的工业化应用潜力。 展开更多
关键词 茂原链霉菌 谷氨酰胺转氨酶 高效表达 热稳定性
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