【目的】了解新疆地区BVDV毒株的生物型和基因型。【方法】采集新疆石河子和伊犁地区疑似感染病毒性腹泻-黏膜病病毒牛的新鲜粪便174份,应用RT-PCR方法对其进行检测,将检测结果为阳性的样品接种于MDBK细胞上培养,电镜观察,测定毒价,使用...【目的】了解新疆地区BVDV毒株的生物型和基因型。【方法】采集新疆石河子和伊犁地区疑似感染病毒性腹泻-黏膜病病毒牛的新鲜粪便174份,应用RT-PCR方法对其进行检测,将检测结果为阳性的样品接种于MDBK细胞上培养,电镜观察,测定毒价,使用RT-PCR方法对细胞培养物进行鉴定,并提取质粒进行测序,对结果分析。【结果】该毒株可使MDBK细胞发生病变,扩增出一条286 bp目的片段,经同源性和遗传进化分析,确定为BVDV-1型毒株。【结论】分离到一株BVDV-1型新疆毒株,可使MDBK细胞发生病变,病毒粒子直径约为20~40 nm,毒株TCID5010-4.5/0.1 m L。展开更多
应用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)西藏分离株Tibet07的融合蛋白,并对其抗原性进行鉴定。扩增PPRV Tibet 07株融合蛋白基因,克隆至pFastBac/CT-TOPO载体中,构建重组穿梭质粒pFa...应用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)西藏分离株Tibet07的融合蛋白,并对其抗原性进行鉴定。扩增PPRV Tibet 07株融合蛋白基因,克隆至pFastBac/CT-TOPO载体中,构建重组穿梭质粒pFastBacCT-PPRV-F,构建重组杆状病毒Bacmid-PPRV-F,转染sf9细胞,获得重组杆状病毒。通过SDS-PAGE鉴定F蛋白的表达,利用Western blotting和间接免疫荧光鉴定F蛋白的抗原性。表达的F蛋白在分子质量约59ku处可见特异蛋白条带。重组杆状病毒Bacmid-PPRV-F感染的sf9细胞可与抗PPRV阳性血清发生特异性反应。使用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达了PPRV西藏分离株Tibet 07的融合蛋白,为进一步研究其生物学功能及研制小反刍兽疫的亚单位疫苗奠定了基础。展开更多
文摘【目的】了解新疆地区BVDV毒株的生物型和基因型。【方法】采集新疆石河子和伊犁地区疑似感染病毒性腹泻-黏膜病病毒牛的新鲜粪便174份,应用RT-PCR方法对其进行检测,将检测结果为阳性的样品接种于MDBK细胞上培养,电镜观察,测定毒价,使用RT-PCR方法对细胞培养物进行鉴定,并提取质粒进行测序,对结果分析。【结果】该毒株可使MDBK细胞发生病变,扩增出一条286 bp目的片段,经同源性和遗传进化分析,确定为BVDV-1型毒株。【结论】分离到一株BVDV-1型新疆毒株,可使MDBK细胞发生病变,病毒粒子直径约为20~40 nm,毒株TCID5010-4.5/0.1 m L。
文摘应用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)西藏分离株Tibet07的融合蛋白,并对其抗原性进行鉴定。扩增PPRV Tibet 07株融合蛋白基因,克隆至pFastBac/CT-TOPO载体中,构建重组穿梭质粒pFastBacCT-PPRV-F,构建重组杆状病毒Bacmid-PPRV-F,转染sf9细胞,获得重组杆状病毒。通过SDS-PAGE鉴定F蛋白的表达,利用Western blotting和间接免疫荧光鉴定F蛋白的抗原性。表达的F蛋白在分子质量约59ku处可见特异蛋白条带。重组杆状病毒Bacmid-PPRV-F感染的sf9细胞可与抗PPRV阳性血清发生特异性反应。使用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达了PPRV西藏分离株Tibet 07的融合蛋白,为进一步研究其生物学功能及研制小反刍兽疫的亚单位疫苗奠定了基础。
