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产气荚膜梭菌α毒素-铁蛋白纳米颗粒抗原制备及其对小鼠的免疫原性评价
1
作者
赵慧玉
雷伊诺
+7 位作者
幸倩如
张珊
张广智
蒋卉
沈青春
丁家波
姜世金
范学政
《畜牧兽医学报》
北大核心
2025年第9期4626-4637,共12页
本研究旨在制备产气荚膜梭菌α毒素-铁蛋白纳米颗粒抗原并评价其对小鼠的免疫原性。将带有D56G、H68G点突变和Spytag序列的α毒素全长基因和带有SpyCatcher序列的铁蛋白(Ferritin)基因片段分别克隆至原核表达载体pET 28a,后进行表达并...
本研究旨在制备产气荚膜梭菌α毒素-铁蛋白纳米颗粒抗原并评价其对小鼠的免疫原性。将带有D56G、H68G点突变和Spytag序列的α毒素全长基因和带有SpyCatcher序列的铁蛋白(Ferritin)基因片段分别克隆至原核表达载体pET 28a,后进行表达并对表达产物进行鉴定和纯化。对纯化后的α_(m2)ST进行细胞毒性、卵磷脂酶活性以及溶血活性分析。将纯化的α_(m2)ST和FeSC在体外对接,随后,将α毒素-铁蛋白(α_(m2)-Fe)对接产物和α_(m2)ST分别与佐剂混合后免疫小鼠。免疫后每周采集小鼠血清,检测IgG、IgG亚型抗体水平和中和效价,并在二免后28 d取脾细胞分析T细胞亚群和IFN-γ分泌水平。结果显示,在28℃条件下,α_(m2)ST和FeSC均以可溶性表达为主。α_(m2)ST未被检测出细胞毒性、卵磷脂酶活性和溶血活性,这说明α_(m2)ST已无毒性。将α_(m2)ST和FeSC体外对接后,经SDS-PAGE、TEM和DLS分析,证实α_(m2)-Fe形成直径32.7~50.7 nm的纳米颗粒,主峰为37.8 nm。小鼠免疫后,α_(m2)-Fe组能产生较高水平的IgG2a抗体(P<0.001);小鼠二免后21 d,α_(m2)-Fe组血清中和效价为64倍,显著高于α_(m2)ST组的32倍(P<0.05);二免后28 d,α_(m2)-Fe组脾细胞刺激后上清中的IFN-γ也高于α_(m2)ST组(P<0.05),流式细胞术分析显示α_(m2)-Fe组产生了较高比例的效应性CD8+T细胞(P<0.0001)。小鼠试验证实α_(m2)-Fe纳米颗粒抗原能有效刺激小鼠产生体液免疫和细胞免疫。
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关键词
产气荚膜梭菌
Α毒素
铁蛋白
纳米颗粒
免疫原性
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题名
产气荚膜梭菌α毒素-铁蛋白纳米颗粒抗原制备及其对小鼠的免疫原性评价
1
作者
赵慧玉
雷伊诺
幸倩如
张珊
张广智
蒋卉
沈青春
丁家波
姜世金
范学政
机构
山东农业大学
中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
广西大学
出处
《畜牧兽医学报》
北大核心
2025年第9期4626-4637,共12页
基金
宁夏重点研发项目(2024BBF02014)
中国农科院创新工程重点项目(CAAS-CSLPDCP-202403)。
文摘
本研究旨在制备产气荚膜梭菌α毒素-铁蛋白纳米颗粒抗原并评价其对小鼠的免疫原性。将带有D56G、H68G点突变和Spytag序列的α毒素全长基因和带有SpyCatcher序列的铁蛋白(Ferritin)基因片段分别克隆至原核表达载体pET 28a,后进行表达并对表达产物进行鉴定和纯化。对纯化后的α_(m2)ST进行细胞毒性、卵磷脂酶活性以及溶血活性分析。将纯化的α_(m2)ST和FeSC在体外对接,随后,将α毒素-铁蛋白(α_(m2)-Fe)对接产物和α_(m2)ST分别与佐剂混合后免疫小鼠。免疫后每周采集小鼠血清,检测IgG、IgG亚型抗体水平和中和效价,并在二免后28 d取脾细胞分析T细胞亚群和IFN-γ分泌水平。结果显示,在28℃条件下,α_(m2)ST和FeSC均以可溶性表达为主。α_(m2)ST未被检测出细胞毒性、卵磷脂酶活性和溶血活性,这说明α_(m2)ST已无毒性。将α_(m2)ST和FeSC体外对接后,经SDS-PAGE、TEM和DLS分析,证实α_(m2)-Fe形成直径32.7~50.7 nm的纳米颗粒,主峰为37.8 nm。小鼠免疫后,α_(m2)-Fe组能产生较高水平的IgG2a抗体(P<0.001);小鼠二免后21 d,α_(m2)-Fe组血清中和效价为64倍,显著高于α_(m2)ST组的32倍(P<0.05);二免后28 d,α_(m2)-Fe组脾细胞刺激后上清中的IFN-γ也高于α_(m2)ST组(P<0.05),流式细胞术分析显示α_(m2)-Fe组产生了较高比例的效应性CD8+T细胞(P<0.0001)。小鼠试验证实α_(m2)-Fe纳米颗粒抗原能有效刺激小鼠产生体液免疫和细胞免疫。
关键词
产气荚膜梭菌
Α毒素
铁蛋白
纳米颗粒
免疫原性
Keywords
Clostridium perfringens
alpha toxin
ferritin
nanoparticles
immunogenicity
分类号
S852.616.3 [农业科学—基础兽医学]
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出处
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1
产气荚膜梭菌α毒素-铁蛋白纳米颗粒抗原制备及其对小鼠的免疫原性评价
赵慧玉
雷伊诺
幸倩如
张珊
张广智
蒋卉
沈青春
丁家波
姜世金
范学政
《畜牧兽医学报》
北大核心
2025
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