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基于RdRp蛋白的兔出血症病毒感染与免疫鉴别诊断ELISA方法的建立
1
作者 朱薇 仇汝龙 +7 位作者 陈萌萌 胡波 魏后军 范志宇 葛雷 伍孟婷 宋艳华 王芳 《畜牧兽医学报》 北大核心 2026年第1期414-422,共9页
为建立区别兔出血症病毒(RHDV)感染与疫苗免疫的诊断ELISA方法,本研究通过原核表达系统表达RHDV1和RHDV2 RdRp蛋白,成功纯化获得这两种可溶性RdRp蛋白,并以RdRp蛋白作为包被抗原,建立检测抗RdRp血清抗体的间接ELISA方法。结果显示,经纯... 为建立区别兔出血症病毒(RHDV)感染与疫苗免疫的诊断ELISA方法,本研究通过原核表达系统表达RHDV1和RHDV2 RdRp蛋白,成功纯化获得这两种可溶性RdRp蛋白,并以RdRp蛋白作为包被抗原,建立检测抗RdRp血清抗体的间接ELISA方法。结果显示,经纯化和酶切后,获得不含标签蛋白的RdRp蛋白,约为57 ku。经Western blot验证,2种RdRp蛋白均与RHDV1或RHDV2感染血清发生特异性反应且无型别间差异。因此,选择RHDV2-RdRp作为包被抗原,包被浓度为2.5μg·mL^(-1);最佳血清稀释度为1∶100,孵育时间为37℃60 min;酶标抗体的最佳稀释度为1∶10000;临界值为0.225。经验证,该ELISA方法具有较好的特异性和敏感性;其批内、批间重复性试验变异系数均小于10%,具有较好的稳定性。通过对RHDV攻毒后样本及基因工程疫苗免疫后血清样本进行检测。结果显示,RHDV感染后可以诱导机体产生针对RdRp蛋白的血清抗体,而基因工程疫苗免疫后血清检测为阴性。本研究基于RHDV-RdRp蛋白所建立的ELISA方法可以对基因工程疫苗免疫和RHDV感染进行区分,为筛查RHDV的临床感染提供有效的检测方法。 展开更多
关键词 兔出血症病毒 RNA依赖性RNA聚合酶(RdRp) 间接ELISA
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兔出血症病毒RHDV1和RHDV2一步法双重TaqMan探针荧光定量RT-PCR体系的建立和应用
2
作者 陈萌萌 王冠萱 +8 位作者 仇汝龙 范志宇 胡波 宋艳华 魏后军 徐为中 葛雷 李一鸣 王芳 《江苏农业学报》 北大核心 2025年第5期937-942,共6页
兔出血症病毒(RHDV)引起的兔出血症是一种急性、高度致死性传染病,对养兔业造成严重危害。本研究基于RHDV衣壳蛋白(VP60)基因序列设计引物和TaqMan探针,建立可同时检测RHDV1和RHDV2两种毒株的双重TaqMan荧光定量RT-PCR检测体系。反应体... 兔出血症病毒(RHDV)引起的兔出血症是一种急性、高度致死性传染病,对养兔业造成严重危害。本研究基于RHDV衣壳蛋白(VP60)基因序列设计引物和TaqMan探针,建立可同时检测RHDV1和RHDV2两种毒株的双重TaqMan荧光定量RT-PCR检测体系。反应体系:2×One Step RT-PCR BufferⅢ10.0μL,上下游引物(10μmol/L)各0.6μL,ROX Reference DyeⅡ(50×)0.4μL,两种荧光探针(10μmol/L)各0.8μL,待测样本2.0μL,ddH_(2)O 4.8μL。反应程序:42℃5 min,95℃10 s,95℃5 s,60℃30 s,40个循环。试验结果表明,该体系特异性强,与轮状病毒、兔多杀性巴氏杆菌、兔支气管败血波氏菌、绿脓杆菌、沙门氏菌无交叉反应;灵敏度高,最低检测限为1μL 100拷贝。通过组内重复和组间重复进行重复性分析,Ct值变异系数为0.2%~2.9%,表明该体系稳定性较好。使用该体系对112份临床样本(60份肝脏组织、52份鼻肛拭子)进行检测,RHDV总检出率为69%,而常规RT-PCR体系的检出率仅为51%。本研究建立的双重荧光定量RT-PCR方法具有高灵敏度、强特异性和良好的重复性,可为RHDV的临床快速诊断及定量分析提供可靠技术支持。 展开更多
关键词 兔出血症病毒 荧光定量RT-PCR TAQMAN探针
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鼠伤寒沙门菌ompW基因缺失株与回补株的构建及其生物学特性
3
作者 葛雷 仇汝龙 +7 位作者 范志宇 胡波 魏后军 陈萌萌 宋艳华 李一鸣 徐为中 王芳 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第4期1865-1875,共11页
鼠伤寒沙门菌(Salmonella Typhimurium)是最为常见的沙门菌血清型,严重危害畜牧业发展及公共卫生安全。外膜蛋白OmpW是由ompW基因编码的营养物质特异性运输通道,发挥特殊的铁离子外排功能,与细菌耐药性、致病性等密切相关。但其在沙门... 鼠伤寒沙门菌(Salmonella Typhimurium)是最为常见的沙门菌血清型,严重危害畜牧业发展及公共卫生安全。外膜蛋白OmpW是由ompW基因编码的营养物质特异性运输通道,发挥特殊的铁离子外排功能,与细菌耐药性、致病性等密切相关。但其在沙门菌中的功能尚未见研究。为探究外膜蛋白OmpW对鼠伤寒沙门菌的影响,本试验以鼠伤寒沙门菌ATCC 14028为野生株(WT14028),利用λ-Red同源重组技术构建ompW基因缺失株(14028ΔompW),同时构建回补株(14028ΔompW::ompW),通过检测生长特性、生物被膜形成能力、环境耐受性、耐药性等方面探究鼠伤寒沙门菌ompW基因的生物学特性,并通过小鼠感染试验探究该基因对沙门菌致病性的影响。结果表明,缺失株与野生株菌落形态无显著差异;缺失株在对数生长期显著慢于野生株,但到达稳定期无显著差异;缺失株生物被膜形成能力下降31.73%±6.43%;在酸性(pH=3)、碱性(pH=10)及高盐(1 mol·L^(-1)NaCl)环境下,缺失株存活率显著低于野生株;但在高铁(>0.625 g·L^(-1)FeCl_(3))环境下,缺失株存活率更高;缺失株对氨基糖苷类抗生素庆大霉素、卡那霉素的敏感性显著增强,对其他如氨苄西林、四环素等抗生素敏感性无显著变化;小鼠感染试验表明,与野生株相比,缺失株感染诱发的腹泻率更低、脾肿大及肠道损伤更轻微,且细菌移位能力也显著下降。综上,本研究成功构建了鼠伤寒沙门菌ompW基因缺失株及回补株,试验表明该基因与菌株生长、环境耐受性、耐药性、致病性等方面密切相关。本研究为进一步开展沙门菌的致病与耐药机制的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 鼠伤寒沙门菌 ompW基因 缺失株 生物学特性 致病性
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兔轮状病毒TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测方法的建立和初步应用
4
作者 李嘉逸 伍孟婷 +10 位作者 陈萌萌 仇汝龙 魏后军 范志宇 胡波 葛雷 李一鸣 徐为中 董海龙 宋艳华 王芳 《江苏农业科学》 北大核心 2025年第13期210-215,共6页
为了能够快速、灵敏地检测出发病家兔临床样本中的兔轮状病毒(Lapine rotavirus,LaRV),根据GenBank已登录的LaRV非结构蛋白5(NSP5)基因保守序列设计特异性引物和TaqMan探针,建立了一种TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测方法并进行了初步应... 为了能够快速、灵敏地检测出发病家兔临床样本中的兔轮状病毒(Lapine rotavirus,LaRV),根据GenBank已登录的LaRV非结构蛋白5(NSP5)基因保守序列设计特异性引物和TaqMan探针,建立了一种TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测方法并进行了初步应用。结果表明,阳性质粒标准品所建立的标准曲线在使用稀释度为1×10^(7) copies/μL至1×10^(2) copies/μL之间具有良好的线性关系,r 2为0.999,扩增效率为98.781%;该方法对LaRV具有高度特异性,与兔出血症病毒1型、兔出血症病毒2型及兔多杀性巴氏杆菌、肺炎克雷伯杆菌、沙门氏菌、大肠杆菌等其他病原间无交叉反应;该方法灵敏度高,最低检测值为1×10^(2) copies/μL,比普通PCR灵敏度提高了约100倍;该方法重复性良好,组内和组间变异系数在0.15%~1.41%之间,均小于2%。对45份临床样本采用构建的TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测方法和常规RT-PCR检测方法进行对比,符合率为100%。因此,本研究建立的TaqMan探针荧光定量RT-PCR具有特异性强、敏感性高、重复性好等优势。 展开更多
关键词 兔轮状病毒 TAQMAN探针 荧光定量RT-PCR 检测方法
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经典和重组兔黏液瘤病毒TaqMan探针荧光定量PCR检测方法的建立和应用
5
作者 周雅楠 陈萌萌 +8 位作者 仇汝龙 魏后军 范志宇 胡波 宋艳华 葛雷 李一鸣 徐为中 王芳 《江苏农业科学》 北大核心 2025年第1期226-230,共5页
根据GenBank已登录的经典兔黏液瘤病毒(MYXV)和重组兔黏液瘤病毒(ha-MYXV)基因保守序列设计特异性引物和TaqMan探针,建立能同时检出ha-MYXV和MYXV病原的快速、简单且敏感性较高的TaqMan探针荧光定量PCR临床检测方法。结果显示,稀释度为1... 根据GenBank已登录的经典兔黏液瘤病毒(MYXV)和重组兔黏液瘤病毒(ha-MYXV)基因保守序列设计特异性引物和TaqMan探针,建立能同时检出ha-MYXV和MYXV病原的快速、简单且敏感性较高的TaqMan探针荧光定量PCR临床检测方法。结果显示,稀释度为1×10^(7)~1×10^(3)拷贝/μL标准品建立的标准曲线具有良好的线性关系,相关系数为1.00;该方法对MYXV和ha-MYXV具有高度特异性,与绿脓杆菌、兔多杀性巴氏杆菌、沙门氏菌、兔出血症病毒1型、兔出血症病毒2型等其他病原间无交叉反应;检测灵敏度可达1×10^(2)拷贝/μL;组内和组间变异系数在0.05%~1.19%间。该方法的建立为引进种兔及家兔相关产品兔黏液瘤病毒的检疫提供了技术支撑。 展开更多
关键词 兔黏液瘤病 经典兔黏液瘤病毒 重组兔黏液瘤病毒 TaqManqPCR
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慢性乙型肝炎以及肝硬化患者肠道微生物研究 被引量：26
6
作者 陈萌萌 郑吉顺 +1 位作者 刘艳艳 李家斌 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2015年第5期648-652,共5页
目的探讨慢性乙型肝炎以及肝硬化患者的肠道菌群变化及其与细胞因子、肝功能之间的关系。方法选取30例健康志愿者、50例肝炎后肝硬化患者以及50例慢性乙型肝炎患者,采用实时荧光定量PCR法检测粪便中九种肠道菌群含量,比较三组间肠道菌... 目的探讨慢性乙型肝炎以及肝硬化患者的肠道菌群变化及其与细胞因子、肝功能之间的关系。方法选取30例健康志愿者、50例肝炎后肝硬化患者以及50例慢性乙型肝炎患者,采用实时荧光定量PCR法检测粪便中九种肠道菌群含量,比较三组间肠道菌群变化;同时采用ELISA法检测慢性乙型肝炎患者血清中细胞因子如白介素-17A(IL-17)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、干扰素-α(INF-α)、CXC趋化因子(CXCL-13)的浓度,分析肠道菌群与细胞因子以及肝功能之间的关系。结果与健康对照组相比,慢性乙型肝炎以及肝硬化患者体内的双歧杆菌、乳酸杆菌、拟杆菌属以及瘤胃球菌属含量减少;肠杆菌科细菌、肠球菌、梭菌属、白色念珠菌以及普雷沃氏菌含量明显增加。慢性乙型肝炎患者体内的肠杆菌科细菌与凝血酶原时间(PT)呈正相关性,肠球菌与谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)呈正相关性;双歧杆菌与AST、碱性磷酸酶(AKP)以及HBV DNA水平呈负相关性,普雷沃氏菌属与AST、AKP以及PT呈负相关性,拟杆菌属与AST和PT呈负相关性,瘤胃球菌属与白蛋白(ALB)呈负相关性。另外,9种肠道菌群中只有肠球菌与IL-17A呈正相关性。结论慢性乙型肝炎以及肝硬化患者体内存在不同程度的肠道菌群失调,其中乙肝患者体内过度繁殖的肠球菌与IL-17A协同参与肝脏炎症反应过程,以致于肝功能受损呈恶性循环状态。 展开更多
关键词 慢性乙型肝炎 肠道微生物 肝功能 细胞因子
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兔出血症病毒2型TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量：6
7
作者 陈萌萌 仇汝龙 +6 位作者 范志宇 胡波 宋艳华 魏后军 朱伟峰 徐为中 王芳 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2021年第6期1476-1480,共5页
以新发生的兔出血症病毒2型(RHDV2)SC 2020/04株VP60基因序列为参考,设计出1对特异性引物和TaqMan探针,建立了一种快速、灵敏且特异的用于检测新型病毒的荧光定量RT-PCR检测方法。试验结果显示:本研究建立的方法,标准曲线线性关系良好,R... 以新发生的兔出血症病毒2型(RHDV2)SC 2020/04株VP60基因序列为参考,设计出1对特异性引物和TaqMan探针,建立了一种快速、灵敏且特异的用于检测新型病毒的荧光定量RT-PCR检测方法。试验结果显示:本研究建立的方法,标准曲线线性关系良好,R^(2)值达到0.999;其特异性较好,与兔出血症病毒1型(RHDV1)、仙台病毒(SV)和轮状病毒(RRV)病原均无交叉反应;灵敏性高,最低检出量为1μl 1×10拷贝;且重复性良好,批内和批间试验的变异系数平均值均小于2%。临床检测结果表明,利用该方法对108份临床病料进行检测,检出RHDV2阳性样品72份,检出率为66.7%,明显高于常规的RT-PCR方法(62.0%)。结果证明,新建立的TaqMan荧光定量RT-PCR方法适合于RHDV2感染的特异性诊断。 展开更多
关键词 兔出血症病毒2型 TAQMAN探针 荧光定量RT-PCR 敏感性 特异性
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不同浓度甲基丙烯酸甲酯对SD大鼠乳鼠脊髓背根神经元的影响 被引量：3
8
作者 陈萌萌 唐海 +4 位作者 史宗新 邓介超 贾璞 贾崇哲 杨阳 《中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志》 CSCD 2017年第3期260-266,共7页
目的体外实验探索骨水泥单体甲基丙烯酸甲酯(methyl methacrylate,MMA)对斯普拉格大鼠(Sprague Dawley,SD)乳鼠脊髓背根神经元的影响。方法体外模拟椎体成形术制备骨水泥球,采用气相色谱法测定MMA单体释放的浓度范围及变化趋势;显微操... 目的体外实验探索骨水泥单体甲基丙烯酸甲酯(methyl methacrylate,MMA)对斯普拉格大鼠(Sprague Dawley,SD)乳鼠脊髓背根神经元的影响。方法体外模拟椎体成形术制备骨水泥球,采用气相色谱法测定MMA单体释放的浓度范围及变化趋势;显微操作下提取乳鼠背根神经节并体外培养乳鼠脊髓背根神经细胞(dorsal root ganglion neurons,DRGs),用神经元特异性烯醇化酶(neuron specificity enolization enzymes,NSE)免疫荧光化学染色鉴定DRGs;根据体外实验模拟椎体成形术测得的MMA释放浓度范围,DRGs加入含有不同浓度MMA的培养基,设为正常对照组,10^(-3),10^(-2),10^(-1),1和10 g/L MMA组;采用台盼蓝染色法测定神经元存活率,采用Annexin V法进行流式细胞检测,分析MMA单体诱导的DRGs细胞凋亡情况。结果骨水泥在植入后前10min内释放出大量单体,约占总释放量的90%以上,随着时间延长,单体释放总量基本保持平稳。60 min内MMA单体最大浓度范围为(0.102 5±0.006 8)g/L。DRGs加入MMA单体作用后,10^(-3)和10^(-2)g/L组的细胞存活率分别为(95.00±2.24)%、(92.20±2.77)%,与对照组(97.00±1.87)%比较,差异无统计学意义(P值分别0.380和0.070);10^(-1)、1、10 g/L细胞存活率分别为(89.40±5.18)%、(86.20±4.32)%、(77.60±3.78)%,与对照组比较,差异有统计学意义(P均<0.05)。MMA单体诱导的DRGs的凋亡,MMA单体10^(-3)、10^(-2)、10^(-1)、1、10 g/L均能够诱导细胞的凋亡,凋亡率分别为(38.3±2.2)%、(40.5±1.1)%、(44.1±3.5)%、(48.0±1.8)%、(54.8±2.7)%,与空白对照组凋亡率(22.6±5.0)%比较,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论椎体成形术中存在MMA单体的释放,并且对椎体内感觉神经细胞存在毒性,因此MMA单体释放对椎体成形术的快速止痛有一定意义。 展开更多
关键词 甲基丙烯酸甲酯 脊髓背根神经元 细胞毒性 凋亡率
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兔源抗凋亡蛋白Bcl-2的表达、抗体的制备及初步应用 被引量：2
9
作者 陈萌萌 潘渊婷 +7 位作者 范志宇 胡波 宋艳华 魏后军 仇汝龙 朱伟峰 徐为中 王芳 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2019年第6期1397-1401,共5页
为了原核表达兔源抗凋亡蛋白Bcl-2,并诱导表达纯化该蛋白后制备多抗,采用RT-PCR扩增Bcl-2编码序列,并将该序列克隆至pET-32a(+)载体,获得重组pET-32a-Bcl-2质粒转化BL21(DE3),筛选最佳表达条件,通过亲和层析纯化目的蛋白质,最后经Wester... 为了原核表达兔源抗凋亡蛋白Bcl-2,并诱导表达纯化该蛋白后制备多抗,采用RT-PCR扩增Bcl-2编码序列,并将该序列克隆至pET-32a(+)载体,获得重组pET-32a-Bcl-2质粒转化BL21(DE3),筛选最佳表达条件,通过亲和层析纯化目的蛋白质,最后经Western blot鉴定后免疫小鼠。结果显示,成功扩增Bcl-2编码序列并构建了pET-32a-Bcl-2表达载体;SDS-PAGE结果显示,在16℃,5 h,0.5 mmol/L IPTG的表达条件下,重组蛋白Bcl-2能够高效可溶性表达;Western blot结果表明纯化后的表达产物为高纯度的Bcl-2重组蛋白,将该蛋白质免疫小鼠后获得了特异性抗体,该抗体能够特异性识别重组Bcl-2蛋白,并应用该抗体鉴定RK13-B细胞中Bcl-2蛋白的过表达。 展开更多
关键词 兔源抗凋亡蛋白Bcl-2 原核表达 亲和层析 多抗制备
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家兔β干扰素启动子质粒的构建及其启动子活性鉴定 被引量：2
10
作者 陈萌萌 范志宇 +6 位作者 胡波 宋艳华 魏后军 仇汝龙 朱伟峰 徐为中 王芳 《江苏农业科学》 2019年第23期78-81,共4页
通过家兔体内感染兔出血症病毒(RHDV)后发现体内干扰素-β(Interferon-β,IFN-β)基因表达水平明显降低。为体外研究RHDV感染宿主后IFN-β启动子的调控机制,首先以家兔肝细胞总cDNA为模板,利用PCR扩增IFN-β基因启动子区的序列,经测序... 通过家兔体内感染兔出血症病毒(RHDV)后发现体内干扰素-β(Interferon-β,IFN-β)基因表达水平明显降低。为体外研究RHDV感染宿主后IFN-β启动子的调控机制,首先以家兔肝细胞总cDNA为模板,利用PCR扩增IFN-β基因启动子区的序列,经测序确定全长为550bp;预测软件分析,与人源IFN-β基因启动子的转录上调区域(positive regulation domain,PRD)高度同源;随后将启动子全长和一系列转录元件克隆至pGL6-Basic荧光素酶表达载体中,成功构建重组体报告基因质粒后,瞬转RK-13细胞,利用试剂盒检测荧光素酶的相对活性。结果显示,克隆的IFN-β基因启动子区和AP-1、IRF3、NF-κB和IRF7等转录元件具有显著的活性,为研究兔出血症病毒对宿主IFN-β基因的转录调控机制提供了有效的工具。 展开更多
关键词 家兔 兔出血症病毒 IFN-β基因 启动子 荧光素酶 转录调控
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三峡库区腹地农村居民点空间分布特征及其自然背景影响——以奉节县为例 被引量：2
11
作者 陈萌萌 李阳兵 周亚琳 《热带农业科学》 2017年第5期125-133,共9页
农村居民点是农村人口的重要聚居方式,分析其空间分布特征并深入揭示其空间布局的影响因素和驱动机制,对科学规划农村居民点,合理利用土地资源具有重要意义。文章以三峡库区腹地奉节县农村居民点作为研究对象,借助Arc GIS10.2软件,研究... 农村居民点是农村人口的重要聚居方式,分析其空间分布特征并深入揭示其空间布局的影响因素和驱动机制,对科学规划农村居民点,合理利用土地资源具有重要意义。文章以三峡库区腹地奉节县农村居民点作为研究对象,借助Arc GIS10.2软件,研究农村居民点密度和用地比重的空间差异性及其与地形因子的关系,结果表明:(1)从密度和用地比重来看,研究区不同等级的农村居民点在空间分布上均呈现出北部密度和用地比重较大,而南部总体偏小,局部密集,用地比重较大的特点;(2)从地形因子来看,研究区分布在海拔800 m以下及坡度6~25°范围内的农村居民点密度在20个/km2以上,用地比重多在1.5%以上,属于农村居民点较密集区。总体上,奉节县农村居民点空间布局与其自然地理环境有直接关系,地势低平、河网密布的地区,农村居民点密度大且用地比重大,反之,地势陡峭,土地承载力低的地区,农村居民点分布分散,用地比重较小。 展开更多
关键词 农村居民点 空间分布 密度 用地比重 奉节县
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紫薇花开放过程的生理特征研究 被引量：1
12
作者 陈萌萌 赵雨 +2 位作者 白明珠 俞梦鑫 顾翠花 《浙江农林大学学报》 北大核心 2025年第2期339-347,共9页
【目的】研究紫薇Lagerstroemia indica花开放过程中的生理特征,为花期调控提供参考。【方法】以紫薇单花开放各时期的花瓣作为材料,测定细胞形态变化、细胞相对含水量、碳水化合物质量分数和内源激素质量分数,用皮尔逊(Pearson)检测法... 【目的】研究紫薇Lagerstroemia indica花开放过程中的生理特征,为花期调控提供参考。【方法】以紫薇单花开放各时期的花瓣作为材料,测定细胞形态变化、细胞相对含水量、碳水化合物质量分数和内源激素质量分数,用皮尔逊(Pearson)检测法分析各指标之间的相关性。【结果】根据物候观测,紫薇单花开放可分为紧蕾期(S1)、花蕾膨大期(S2)、初开期(S3)和盛开期(S4)等4个时期。扫描电镜观察表明:随着花开放进程,花瓣上下表皮细胞逐渐扩张,且其细胞表面存在波状、条纹状、辐射状等纹饰,各时期下表皮细胞面积均大于上表皮面积。在紫薇花开放期间,花瓣、萼片以及整个花苞/整朵花的相对含水量整体呈上升趋势,而且可溶性总糖质量分数整体也呈上升趋势,淀粉质量分数呈先上升后下降的趋势。脱落酸(ABA)质量分数相对较低且变化较平稳,生长素(IAA)、赤霉素(GA_(3))质量分数较低且总体表达趋势相异,玉米素核苷(ZR)质量分数较高且变化幅度较大,ZR/ABA较大且变化幅度大。相关性分析显示:9个指标之间极显著正相关(P<0.01),淀粉与蔗糖质量分数显著负相关(P<0.05),与其他指标的相关性不显著。【结论】在紫薇花开放过程中,伴随着花瓣上下表皮细胞形态的显著变化、花部细胞相对含水量的增加、碳水化合物质量分数的上升以及内源激素质量分数的动态调整,这些变化共同促进了紫薇花的正常开放。 展开更多
关键词 紫薇 花开放 生理机制 内源激素
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全国两栖动物多样性观测网络(China BON-Amphibians)建设进展 被引量：35
13
作者 徐海根 吴军 +6 位作者 吴延庆 郭伟波 何玉晓 李佳琦 李建南 陈萌萌 蔡蕾 《生态与农村环境学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期20-26,共7页
两栖动物对环境变化反应敏感,是生物多样性观测的重要指示物种。近年来,欧美国家已制定了生物多样性观测相关标准并实施了一系列观测计划。2011年以来,环境保护部自然生态保护司以环境保护部南京环境科学研究所为牵头单位,联合全国相关... 两栖动物对环境变化反应敏感,是生物多样性观测的重要指示物种。近年来,欧美国家已制定了生物多样性观测相关标准并实施了一系列观测计划。2011年以来,环境保护部自然生态保护司以环境保护部南京环境科学研究所为牵头单位,联合全国相关科研院所、高等院校、保护机构,构建了全国两栖动物多样性网络,作为全国生物多样性观测网络(China BON)的重要组成部分。该研究介绍了我国两栖动物多样性观测方法,总结了2011年以来全国两栖动物多样性观测工作进展。据115个样区的观测结果显示,观测到的两栖动物共计243种,占我国两栖动物总种数的59.6%。通过观测,发现了破坏两栖动物生境的典型案例。目前我国两栖动物观测网络已初具规模,笔者在介绍观测网络现状的同时也提出了相关建议。 展开更多
关键词 生物多样性 观测网络 观测方法 两栖动物 多样性保护 中国
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全国蝴蝶多样性观测网络(China BON-Butterflies)建设进展 被引量：63
14
作者 马方舟 徐海根 +3 位作者 陈萌萌 童文君 王晨彬 蔡蕾 《生态与农村环境学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期27-36,共10页
生物多样性是人类赖以生存和发展的物质基础之一,开展生物多样性观测是生物多样性研究和保护的前提与基础。为贯彻落实国务院审议通过的《中国生物多样性保护战略与行动计划(2011—2030年)》,2016年环境保护部启动了蝴蝶多样性观测工作... 生物多样性是人类赖以生存和发展的物质基础之一,开展生物多样性观测是生物多样性研究和保护的前提与基础。为贯彻落实国务院审议通过的《中国生物多样性保护战略与行动计划(2011—2030年)》,2016年环境保护部启动了蝴蝶多样性观测工作,以蝴蝶为指示生物类群,建立了首个国家级的蝴蝶多样性观测网络。目前,全国蝴蝶观测网络在31个省(自治区、直辖市)建设完成了117个标准化观测样区、629条标准化观测样线,样线累计长度达1 200 km,年度观测数据超过20万条。通过观测,初步掌握了我国蝴蝶多样性空间分布特征,物种丰度和多度较高的观测样区均集中分布于秦岭—淮河一线以南地区,其中海南岛、秦岭南麓、横断山区多样性较高。建立了全国蝴蝶观测数据库,并编制了年度观测报告。全国蝴蝶多样性观测网络的长期有效运行,将有助于掌握全国蝴蝶多样性的时空分布和动态变化规律,识别威胁因素,为环境管理提出有针对性的保护对策建议。 展开更多
关键词 生物多样性 观测网络 蝴蝶 威胁因素 保护成效评估 中国
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凹土负载壳聚糖对马氏珠母贝糖胺聚糖提取物中镉的吸附研究 被引量：3
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作者 陈萌萌 吴红棉 +3 位作者 衣美艳 范秀萍 郭妍妍 胡雪琼 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2014年第14期282-286,292,共6页
采用凹土负载壳聚糖对马氏珠母贝全脏器的酶解液进行吸附脱镉研究,通过单因素实验,考察了振荡时间、pH、振荡速度和复合物(凹土-壳聚糖)添加量对糖胺聚糖(GAG)粗品中镉脱除和GAG含量的影响,并利用响应面法优化出镉脱除条件。结果表明:... 采用凹土负载壳聚糖对马氏珠母贝全脏器的酶解液进行吸附脱镉研究,通过单因素实验,考察了振荡时间、pH、振荡速度和复合物(凹土-壳聚糖)添加量对糖胺聚糖(GAG)粗品中镉脱除和GAG含量的影响,并利用响应面法优化出镉脱除条件。结果表明:糖胺聚糖中镉脱除的最优条件是振荡时间31.0min,pH7.0,振荡速度143.0r/min,复合物添加量13.0mg/mL,在此条件下脱镉率达到76.9%,GAG含量为47.1%。 展开更多
关键词 马氏珠母贝 糖胺聚糖 镉 凹土-壳聚糖
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兔出血症病毒2型的分离鉴定与序列分析 被引量：28
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作者 魏后军 胡波 +5 位作者 范志宇 宋艳华 仇汝龙 陈萌萌 薛家宾 王芳 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2020年第2期404-409,共6页
兔出血症(Rabbit hemorrhagic disease,RHD)是由兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)引起的一种具有高度传染性、急性致死性兔病。兔出血症病毒2型(RHDV2)引起的RHD主要在欧洲流行,病兔的死亡率高达90%,而用经典RHDV... 兔出血症(Rabbit hemorrhagic disease,RHD)是由兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)引起的一种具有高度传染性、急性致死性兔病。兔出血症病毒2型(RHDV2)引起的RHD主要在欧洲流行,病兔的死亡率高达90%,而用经典RHDV毒株制备的疫苗几乎不能预防家兔感染RHDV2,从而给世界养兔业造成了巨大的经济损失。2020年4月,中国四川省某兔场首次发生由疑似RHDV2引起的RHD,笔者所在实验室通过红细胞凝集试验(Hemagglutination,HA)、逆转录-聚合酶链式反应(Reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增、vp60基因序列分析和病毒复制试验,对采集的病死家兔肝脏样本进行病原鉴定。HA结果显示,部分病死家兔的肝脏样本不能引起血凝现象;RT-PCR结果显示,样品中出现了RHDV2的特异性条带。对新发现毒株cDNA的RT-PCR产物进一步分析发现,所扩增vp60基因核苷酸序列与经典RHDV vp60基因核苷酸序列的一致性为77.5%~80.1%,与RHDV2 vp60基因核苷酸序列的一致性为93.6%~96.1%,并且与RHDV2处于同一个进化分支。病毒复制试验结果显示,用病死家兔肝脏组织与磷酸缓冲盐溶液(Phosphate buffer saline,PBS)按1 g∶10 ml混合后制成的悬液分别人工感染5只非免疫25日龄未断奶仔兔和5只2月龄兔,在24~48 h全部死亡。基于以上试验结果,确定本研究新发现的RHDV毒株为RHDV2,并将其命名为SC2020,这是在中国首次发现RHDV2毒株,应引起高度重视。 展开更多
关键词 兔出血症 兔出血症病毒2型(RHDV2) VP60基因 鉴定 序列分析
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检测兔出血症病毒抗体胶体金试纸条的研制及初步应用 被引量：10
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作者 魏后军 范志宇 +6 位作者 王芳 宋艳华 胡波 仇汝龙 陈萌萌 徐为中 薛家宾 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期614-619,共6页
利用免疫层析技术建立快速检测兔出血症病毒(RHDV)抗体的方法,将胶体金标记重组RHDV VP60蛋白,抗VP60单抗A3C和金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)分别包被质控线(C线)和检测线(T线),通过检测强阳性、阳性、弱阳性、阴性血清优化试纸条制备条件,... 利用免疫层析技术建立快速检测兔出血症病毒(RHDV)抗体的方法,将胶体金标记重组RHDV VP60蛋白,抗VP60单抗A3C和金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)分别包被质控线(C线)和检测线(T线),通过检测强阳性、阳性、弱阳性、阴性血清优化试纸条制备条件,并验证其性能及与血凝抑制试验的符合率。结果显示,试纸条检测阳性血清时T线、C线颜色深度相同,强阳性血清T线比C线颜色深,弱阳性血清T线比C线颜色浅,阴性血清T线不显色、C线显色,检测强阳性、阳性、弱阳性、阴性血清与血凝抑制试验的符合率分别为93.75%、88.75%、91.25%、95.00%,总的符合率为91.54%;该试纸条具有较好的特异性、敏感性、重复性和稳定性,为兔病毒性出血症流行病学调查和抗体水平监测提供了有力的检测工具。 展开更多
关键词 兔病毒性出血症 兔出血症病毒 VP60 胶体金试纸条 抗体
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挑战性-阻断性压力源对工作满意度的影响:组织支持感受的作用机制 被引量：17
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作者 张西超 胡婧 +1 位作者 王亮 陈萌萌 《经济科学》 CSSCI 北大核心 2013年第5期111-120,共10页
本研究旨在探讨挑战性和阻断性两种性质的压力源对工作满意度的不同作用效果和过程,以及组织支持感受(POS)在其中的作用机制。研究对361名企业员工进行问卷调查,采用层级回归的方法进行分析。结果发现:(1)阻断性压力源对一般、内部和外... 本研究旨在探讨挑战性和阻断性两种性质的压力源对工作满意度的不同作用效果和过程,以及组织支持感受(POS)在其中的作用机制。研究对361名企业员工进行问卷调查,采用层级回归的方法进行分析。结果发现:(1)阻断性压力源对一般、内部和外部工作满意度有负向预测作用;(2)挑战性压力源对内部工作满意度有正向预测作用,对外部及一般工作满意度无显著预测作用;(3)POS在挑战性压力源和工作满意度之间起调节作用,表现为在高POS下,挑战性压力源对工作满意度的影响更大;(4)POS在阻断性压力源与工作满意度之间起部分中介作用。 展开更多
关键词 挑战性压力源 阻断性压力源 组织支持感受 工作满意度
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鉴别RHDV与RHDV2荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用 被引量：10
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作者 肖跃强 孙培姣 +7 位作者 周迎春 陈萌萌 崔平 杨慧 于雪 于新友 王芳 沈志强 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期512-520,共9页
为建立一种敏感、特异、快速、操作简便、易于判定的鉴别检测兔出血症病毒(RHDV)与兔出血症病毒2型(RHDV2)荧光定量RT-PCR检测方法,本研究选择RHDV与RHDV2 VP60基因序列高度同源的保守区域设计了3对引物,经荧光定量PCR扩增比较,筛选出1... 为建立一种敏感、特异、快速、操作简便、易于判定的鉴别检测兔出血症病毒(RHDV)与兔出血症病毒2型(RHDV2)荧光定量RT-PCR检测方法,本研究选择RHDV与RHDV2 VP60基因序列高度同源的保守区域设计了3对引物,经荧光定量PCR扩增比较,筛选出1对引物,对各反应条件进行优化,建立了RHDV与RHDV2荧光定量PCR检测方法,且基于RHDV较RHDV2扩增产物熔解曲线Tm值高1.57℃~2.74℃,能够达到鉴别检测的目的。特异性试验显示,该方法仅对RHDV和RHDV2检测为阳性,对猪瘟兔化弱毒、兔多杀性巴氏杆菌、A型魏氏梭菌、波氏杆菌检测均为阴性,特异性强。敏感性试验显示,该方法对RHDV与RHDV2 VP60基因重组质粒标准品的最低检测限均为1×10^(1)拷贝/μL,敏感性高;重复性试验显示,RHDV VP60基因质粒标准品批内和批间Cp值最大变异系数分别为1.91、3.60,Tm值最大变异系数分别小于0.72、0.48;RHDV2 VP60基因质粒标准品批内和批间Cp值最大变异系数分别为1.90、3.93,Tm值最大变异系数分别为0.29、0.17,均小于5%,重复性好。采集RHDV AV34株感染病死兔的肝脏、肺脏、脾脏、肾脏、心肌组织、内皮组织、口鼻粘液、肌肉组织、肛门排泄物、尿液等组织样品,进行病毒组织分布与排毒的检测,结果显示,各组织样品均为阳性,表明病毒在体内分布广泛,病毒可通过口鼻分泌物及粪尿排泄物排出。利用该方法检测临床肝组织样品,结果显示,RHDV AV34标准株阳性肝组织与14份RHDV临床肝组织样品、RHDV2分离株SC2020/04感染样品均为阳性,而常规RT-PCR方法对其中1份RHDV临床肝组织样品检测为阴性,两种方法符合率为93.3%。本研究建立了一种能够鉴别检测RHDV与RHDV2的荧光定量RT-PCR方法,为开展兔病毒性出血症的临床诊断、流行病学调查与防控等提供了有效的技术保障。 展开更多
关键词 兔出血症病毒 兔出血症病毒2型 荧光定量RT-PCR 鉴别
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兔出血症病毒经典毒株和变异毒株的RT-PCR鉴定 被引量：16
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作者 宋艳华 魏后军 +8 位作者 范志宇 左园园 胡波 仇汝龙 陈萌萌 李明勇 薛家宾 徐为中 王芳 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第5期1117-1121,共5页
本研究旨在建立鉴别兔出血症病毒经典毒株(RHDV)和变异毒株(RHDV2)的RT-PCR检测方法。根据Gen Bank中经典RHDV和RHDV2的VP60基因序列,设计2对分别结合两种基因的特异性引物。利用2对引物,以人工合成RHDV2的VP60基因构建的p MD19-T-VP60-... 本研究旨在建立鉴别兔出血症病毒经典毒株(RHDV)和变异毒株(RHDV2)的RT-PCR检测方法。根据Gen Bank中经典RHDV和RHDV2的VP60基因序列,设计2对分别结合两种基因的特异性引物。利用2对引物,以人工合成RHDV2的VP60基因构建的p MD19-T-VP60-2和p MD19-T-VP60为模板,进行RT-PCR体系退火温度的优化,优化后的退火温度为58.2℃。对优化后的RT-PCR体系进行RHDV和RHDV2的敏感性试验、特异性试验,并用于检测RHDV人工感染样品和疑似临床样品,结果显示,该方法具有良好的特异性和敏感性,经典RHDV和RHDV2的检测限度分别为95拷贝和76拷贝的靶基因片段,且对支气管败血波氏杆菌、多杀性巴氏杆菌、产气荚膜梭菌、大肠杆菌等病原以及重组质粒p MD19-T-EBHSV的检测结果均为阴性。RHDV人工感染的组织样品检出率为100%,15份临床样品中3份为经典RHDV阳性,其他均为经典RHDV及RHDV2阴性。该方法的建立能够实现快速、特异及敏感地检测RHDV和RHDV2,为监测RHDV变异株的流行情况提供技术支撑。 展开更多
关键词 兔出血症病毒经典毒株(RHDV) 兔出血症病毒变异毒株(RHDV2) RT-PCR鉴定
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