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1株非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体识别的B细胞抗原表位的鉴定
被引量:
4
1
作者
陈孝军
马俊
+9 位作者
陈熊男
梁祎凡
高琦
黄钊
许润达
郑佳琛
郑泽中
张桂红
王衡
龚浪
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第7期2239-2251,共13页
旨在研究非洲猪瘟病毒(ASFV)p30蛋白的B细胞抗原表位,本研究制备了p30蛋白的单克隆抗体(mAb),并以该单克隆抗体为工具进行B细胞抗原表位定位。首先,通过原核表达及Ni柱亲和纯化获得p30蛋白,将纯化蛋白免疫BALB/c小鼠进行杂交瘤细胞制备...
旨在研究非洲猪瘟病毒(ASFV)p30蛋白的B细胞抗原表位,本研究制备了p30蛋白的单克隆抗体(mAb),并以该单克隆抗体为工具进行B细胞抗原表位定位。首先,通过原核表达及Ni柱亲和纯化获得p30蛋白,将纯化蛋白免疫BALB/c小鼠进行杂交瘤细胞制备,通过间接酶联免疫吸附试验(iELISA)筛选出阳性杂交瘤细胞,并以细胞表达的方法制备单克隆抗体;采用间接免疫荧光试验(IFA)和蛋白质免疫印迹(Western blot)对单克隆抗体的特异性进行鉴定。利用IEDB表位预测软件对p30蛋白B细胞抗原表位进行预测,根据预测结果对CP204L基因进行截短表达,利用IFA、Western blot和iELISA对其抗原表位进行鉴定。最后,利用噬菌体十二肽库对制备的p30单克隆抗体进行4轮生物淘选,筛选多肽表位,并与上述基因截短表达筛选方法进行比对。特异性鉴定结果显示,该单克隆抗体能成功识别感染猪肺泡巨噬细胞的ASFV;基因截短表达筛选结果表明,其识别的抗原表位区域为^(84)M~K^(142);噬菌体淘选试验结果表明,^(116)TSSFETLFE^(124)为本试验制备的单克隆抗体所识别的p30蛋白抗原表位核心序列,该结果进一步缩小了表位分布范围。本研究制备了p30蛋白的1株单克隆抗体,并对其抗原表位进行鉴定,为血清学诊断试剂的研发和p30蛋白功能研究奠定基础。
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关键词
非洲猪瘟病毒
p30蛋白
单克隆抗体
生物淘选
抗原表位
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题名
1株非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体识别的B细胞抗原表位的鉴定
被引量:
4
1
作者
陈孝军
马俊
陈熊男
梁祎凡
高琦
黄钊
许润达
郑佳琛
郑泽中
张桂红
王衡
龚浪
机构
华南农业大学非洲猪瘟防控技术研究中心
国家非洲猪瘟区域实验室(广州)
华南农业大学兽医学院广东省临床重大疾病综合防控重点实验室
华南农业大学国家生猪种业工程技术研究中心
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第7期2239-2251,共13页
基金
广东省重点领域研发计划资助(2019B020211003)
茂名实验室科研启动项目(2021TDQD002)国家自然科学基金专项项目(31941004)
财政部和农业农村部:国家现代农业产业技术体系。
文摘
旨在研究非洲猪瘟病毒(ASFV)p30蛋白的B细胞抗原表位,本研究制备了p30蛋白的单克隆抗体(mAb),并以该单克隆抗体为工具进行B细胞抗原表位定位。首先,通过原核表达及Ni柱亲和纯化获得p30蛋白,将纯化蛋白免疫BALB/c小鼠进行杂交瘤细胞制备,通过间接酶联免疫吸附试验(iELISA)筛选出阳性杂交瘤细胞,并以细胞表达的方法制备单克隆抗体;采用间接免疫荧光试验(IFA)和蛋白质免疫印迹(Western blot)对单克隆抗体的特异性进行鉴定。利用IEDB表位预测软件对p30蛋白B细胞抗原表位进行预测,根据预测结果对CP204L基因进行截短表达,利用IFA、Western blot和iELISA对其抗原表位进行鉴定。最后,利用噬菌体十二肽库对制备的p30单克隆抗体进行4轮生物淘选,筛选多肽表位,并与上述基因截短表达筛选方法进行比对。特异性鉴定结果显示,该单克隆抗体能成功识别感染猪肺泡巨噬细胞的ASFV;基因截短表达筛选结果表明,其识别的抗原表位区域为^(84)M~K^(142);噬菌体淘选试验结果表明,^(116)TSSFETLFE^(124)为本试验制备的单克隆抗体所识别的p30蛋白抗原表位核心序列,该结果进一步缩小了表位分布范围。本研究制备了p30蛋白的1株单克隆抗体,并对其抗原表位进行鉴定,为血清学诊断试剂的研发和p30蛋白功能研究奠定基础。
关键词
非洲猪瘟病毒
p30蛋白
单克隆抗体
生物淘选
抗原表位
Keywords
African swine fever virus
p30 protein
monoclonal antibody
biopanning
epitope
分类号
S855.3 [农业科学—临床兽医学]
S852.659.1 [农业科学—基础兽医学]
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作者
出处
发文年
被引量
操作
1
1株非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体识别的B细胞抗原表位的鉴定
陈孝军
马俊
陈熊男
梁祎凡
高琦
黄钊
许润达
郑佳琛
郑泽中
张桂红
王衡
龚浪
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022
4
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