槐耳清膏对人高转移大细胞肺癌细胞L9981血管生成相关基因表达的影响 被引量：28

1

作者 张芷旋 范羽 +6 位作者 周清华 王艳萍 马力 陈小禾 朱文 杨雪琴 赵颖 《中国肺癌杂志》 CAS 2006年第2期137-142,共6页

背景与目的肺癌是全世界对人类健康与生命危害最大的恶性肿瘤之一。目前从植物中开发抗肿瘤药物是国内外抗肿瘤新药开发的一个热点。本研究的目的是观察槐耳清膏对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981血管生成相关基因mRNA转录表达的影响及意... 背景与目的肺癌是全世界对人类健康与生命危害最大的恶性肿瘤之一。目前从植物中开发抗肿瘤药物是国内外抗肿瘤新药开发的一个热点。本研究的目的是观察槐耳清膏对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981血管生成相关基因mRNA转录表达的影响及意义,并探讨其可能的分子机制。方法体外培养人高转移大细胞肺癌细胞L9981,应用台盼蓝拒染法做细胞毒性实验,实验分为:空白对照组,槐耳清膏组,顺铂化疗组,联合用药组。应用RTPCR检测四组细胞株用药前后βcatenin、Ecadherin、TIMP1、CD44V6、MMP2、endostatin、VEGFmRNA的表达。应用Boyden小室法检测四组细胞株用药前后体外侵袭力改变。结果①槐耳清膏对L9981细胞的生长有明显的抑制作用,且抑制率随药物浓度增加而上升。槐耳清膏组(1g/L)与顺铂化疗组(顺铂3mg/L)及联合用药组(槐耳清膏0.05g/L+顺铂1.5mg/L)比较抑制率无明显差异(P>0.05)。②经槐耳清膏处理后,L9981细胞的βcatenin、Ecadherin、TIMP1、endostatin、MMP2的mRNA表达水平上调,而VEGF、CD44V6表达水平下调,其中TIMP1、endostatin表达水平明显上调,CD44V6表达水平明显下调。③槐耳清膏组、顺铂化疗组、联合用药组细胞株的体外侵袭力均明显低于空白对照组(P<0.05)。结论①槐耳清膏在体外对人高转移大细胞肺癌细胞L9981具有生长抑制作用,该抑制作用呈剂量依赖性。②槐耳清膏对L9981的生长抑制作用可能与其调控血管生成相关基因mRNA的表达有关。③槐耳清膏联合顺铂有一定的协同抗肿瘤作用。 展开更多

关键词 槐耳清膏 人大细胞肺癌细胞L9981 抗血管生成

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nm23-H_1基因对人肺癌细胞中细胞外信号调节激酶活性的影响 被引量：7

2

作者 李印 周清华 +6 位作者 孙芝琳 覃扬 朱文 王艳萍 刘伦旭 陈小禾 孙泽芳 《中国肺癌杂志》 CAS 2004年第1期8-11,共4页

目的　探讨肿瘤转移抑制基因nm2 3 H1 对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981中细胞外信号调节激酶ERK1/2活性的影响。方法　应用特异性识别总ERK1/2 ( p44 /4 2MAPkinase)和双磷酸化ERK1/2( phospho p44 /4 2MAPkinase)的抗体及蛋白印迹法 ... 目的　探讨肿瘤转移抑制基因nm2 3 H1 对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981中细胞外信号调节激酶ERK1/2活性的影响。方法　应用特异性识别总ERK1/2 ( p44 /4 2MAPkinase)和双磷酸化ERK1/2( phospho p44 /4 2MAPkinase)的抗体及蛋白印迹法 (Westernblot) ,检测L9981(缺失nm2 3 H1 基因的原代肺癌细胞株 )、L9981 nm 2 3 H1 (转染了nm 2 3 H1 基因的L9981细胞株 )、L9981 PLXSN (转染了空载体的L9981细胞株 )中总ERK1/2和磷酸化ERK1/2的水平。磷酸化ERK 1/2活性应用非放射性免疫沉淀和Westernblot法以及 p44 /4 2MAPkinase分析试剂盒予以检测。 结果　L9981 nm2 3 H1 细胞株中磷酸化ERK 1/2的水平 ,以及ERK1/2活性均显著低于L9981细胞株和L9981 PLXSN细胞株 (P <0 .0 1) ,L9981和L9981 PLXSN细胞株间磷酸化ERK 1/2水平和ERK 1/2活性比较均无显著性差异 (P >0 .0 5 )。三个细胞株间总ERK1/2水平比较均无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论　nm2 3 H1 基因可明显靶向地抑制人高转移肺癌细胞株L9981中ERK 1/2的转录表达和ERK 1/2的活性。推测nm2 3 H1 基因的作用机制可能与其抑制了MAPK/ERK信号传导通路有关。 展开更多

关键词 NM23-H1基因 肺癌 癌细胞 细胞外信号调节激酶活性 检测 信号传导通路

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核内不均一核糖核蛋白A_2/B_1在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义 被引量：7

3

作者 周美宏 张尚福 +4 位作者 王艳萍 车国卫 陈小禾 朱文 周清华 《中国肺癌杂志》 CAS 2004年第2期99-103,共5页

目的　探讨核内不均一核糖核蛋白A2 /B1(hnRNPA2 /B1)在非小细胞肺癌 (NSCLC)中的表达特征及其临床意义。方法　应用免疫组织化学S P法检测hnRNPA2 /B1在 5 8例NSCLC及癌旁组织、支气管切缘和 3 0例肺良性病变肺组织中的表达 ,并分析该... 目的　探讨核内不均一核糖核蛋白A2 /B1(hnRNPA2 /B1)在非小细胞肺癌 (NSCLC)中的表达特征及其临床意义。方法　应用免疫组织化学S P法检测hnRNPA2 /B1在 5 8例NSCLC及癌旁组织、支气管切缘和 3 0例肺良性病变肺组织中的表达 ,并分析该蛋白表达与肺癌临床病理特征的关系。结果　NSCLC组织中hnRNPA2 /B1阳性表达率 ( 63 .79% )显著高于癌旁肺组织 ( 4 3 .10 % )和肺良性病变肺组织 ( 2 0 .0 0 % )(P =0 .0 0 0 ) ,癌旁肺组织中hnRNPA2 /B1阳性率亦显著高于肺良性病变肺组织 (P <0 .0 5 )。肺癌患者支气管切缘上皮增生组织阳性表达率 ( 4 0 .0 0 % )显著高于正常支气管上皮 ( 15 .15 % ) (P =0 .0 3 2 )。低分化肺癌hnRNPA2 /B1阳性表达率 ( 78.13 % )显著高于中 -高分化肺癌 ( 4 6.15 % ) (P <0 .0 5 ) ,伴有淋巴结转移肺癌阳性表达率 ( 75 .0 0 % )显著高于无淋巴结转移肺癌 ( 5 0 .0 0 % ) (P <0 .0 5 ) ,Ⅲ +Ⅳ期肺癌阳性表达率 ( 78.5 7% )显著高于Ⅰ +Ⅱ期 ( 5 0 .0 0 % ) (P <0 .0 5 ) ,T3 +T4肺癌阳性表达率 ( 77.42 % )显著高于T1+T2 ( 4 8.15 % ) (P<0 .0 5 )。不同组织学类型肺癌组织中hnRNPA2 /B1表达水平无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论　hnRNPA2 /B1的异常表达在肺癌的发生、发展和转移中? 展开更多

关键词 核内不均一核糖核蛋白A2/B1 非小细胞肺癌 免疫组织化学 检测 病理特征

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突变Ki-ras基因修饰的肺癌DC疫苗的体外抗癌活性 被引量：5

4

作者 喻璟瑞 陆燕蓉 +6 位作者 朱文 王艳萍 陈小禾 易成 罗德云 Michael T.Lotze 周清华 《中国肺癌杂志》 CAS 2004年第2期104-107,共4页

目的　探讨以Ki ras基因 12位密码子点突变为靶点 ,构建DC Ad Ki ras(V12 )肺癌疫苗及其抗肺癌免疫治疗的可能性。方法　应用重组腺病毒的方法将人Ki ras基因 12位密码子点突变 (由甘氨酸转变为缬氨酸 )的cDNA导入DC ,构建DC Ad Ki ras(... 目的　探讨以Ki ras基因 12位密码子点突变为靶点 ,构建DC Ad Ki ras(V12 )肺癌疫苗及其抗肺癌免疫治疗的可能性。方法　应用重组腺病毒的方法将人Ki ras基因 12位密码子点突变 (由甘氨酸转变为缬氨酸 )的cDNA导入DC ,构建DC Ad Ki ras(V 12 )肺癌疫苗 ,以流式细胞术、PCR、MLR和CTL等方法检测其免疫活性。结果　 ( 1)DC Ad Ki ras(V12 )肺癌疫苗不仅能表达人Ki ras(V12 )基因 ,且能明显刺激T细胞增殖及提高CTL的杀伤作用。 ( 2 )突变Ki ras基因修饰的DC免疫小鼠后 ,可产生针对表达Ki ras(V 12 )基因的Lewis肺癌的特异性杀伤作用 ,但对B16黑色素瘤细胞则无明显杀伤作用。结论　以人突变Ki ras基因修饰的肺癌DC疫苗可在体外特异性诱导抗可表达Ki ras(V 12 )基因的Lewis肺癌的活性。 展开更多

关键词 基因突变 KI-RAS基因 基因修饰 肺癌 DC 疫苗 抗癌活性 树突状细胞

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利用定点突变技术构建突变nm23-H_1和EGFP融合基因 被引量：7

5

作者 朱大兴 周清华 +3 位作者 王艳萍 朱文 陈小禾 孙芝琳 《中国肺癌杂志》 CAS 2006年第2期117-122,共6页

背景与目的以前的研究已经证明nm23H1基因是肿瘤转移抑制基因,但其抑制肿瘤转移的分子机制目前还不完全清楚。基因定点突变技术可以精确地改变基因的特定碱基序列,获得突变蛋白质。本研究的目的是应用基因定点突变技术构建突变型nm23H1... 背景与目的以前的研究已经证明nm23H1基因是肿瘤转移抑制基因,但其抑制肿瘤转移的分子机制目前还不完全清楚。基因定点突变技术可以精确地改变基因的特定碱基序列,获得突变蛋白质。本研究的目的是应用基因定点突变技术构建突变型nm23H1增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合基因,为进一步研究肿瘤抑制基因nm23H1的功能、生化作用机制提供理论基础和实验依据。方法以逆转录病毒PLXSN野生型nm23H1EGFP质粒为突变模板,应用QuikChangeTM定点突变方法,简单、快速、高效地引入nm23H1S44A、nm23H1P96S、nm23H1H118F、nm23H1S120G四个点突变和一个联合位点突变nm23H1P96SS120G,构建了突变型nm23H1EGFP融合基因。结果成功构建了nm23H1S44AEGFP、nm23H1P96SEGFP、nm23H1H118FEGFP、nm23H1S120GEGFP、nm23H1P96SS120GEGFP五个突变型nm23H1EGFP融合基因,经DNA序列分析突变的碱基序列与实验设计完全一致。结论成功构建了五个具有不同突变位点的突变型nm23H1EGFP融合基因。QuikChangeTM定点突变技术是一种简单、快速、高效的基因定点突变方法。 展开更多

关键词 定点突变 NM23-H1 EGFP 突变型nm23-H1-GFP融合基因

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转染nm23-H_1基因靶向阻断人大细胞肺癌细胞株L9981 Wnt信号传导通路 被引量：4

6

作者 付军科 周清华 +6 位作者 朱文 王艳萍 刘伦旭 陈小禾 聂强 李定彪 李印 《中国肺癌杂志》 CAS 2004年第4期294-297,共4页

目的　探讨nm2 3 H1 基因转染靶向阻断人高转移大细胞肺癌细胞株L9981Wnt信号传导通路的可行性 ,为阐明nm2 3 H1 基因调控肺癌转移抑制的分子机制和靶向治疗提供实验依据。方法　以转染nm 2 3 H1 基因的L9981 nm 2 3 H1 、原代L998... 目的　探讨nm2 3 H1 基因转染靶向阻断人高转移大细胞肺癌细胞株L9981Wnt信号传导通路的可行性 ,为阐明nm2 3 H1 基因调控肺癌转移抑制的分子机制和靶向治疗提供实验依据。方法　以转染nm 2 3 H1 基因的L9981 nm 2 3 H1 、原代L9981、空载L9981 pLXSN三株人高转移大细胞肺癌细胞为研究对象 ,应用Westernblot检测比较各株肺癌细胞胞浆、胞核中Wnt信号传导通路关键激酶GSK 3 β和 β 连环蛋白表达的变化。结果　①GSK 3 β在L9981 nm 2 3 H1 肺癌细胞胞浆中表达量IOD( 63 41± 5 41)显著高于L9981( 373 6± 2 98)和L9981 pLXSN( 3 613± 3 83 ) (P <0 .0 0 1) ;②GSK 3 β在L9981 nm2 3 H1 肺癌细胞胞核中表达量IOD( 4 3 5 6± 490 )显著高于L9981( 65 7± 5 7)和L9981 pLXSN ( 70 5± 75 ) (P <0 .0 0 1) ;③β 连环蛋白在L9981 nm 2 3 H1 肺癌细胞胞浆中表达量IOD( 3 64 9± 118)显著高于L9981( 14 0 1± 3 1)和L9981 pLXSN ( 13 5 0± 5 5 )(P <0 .0 0 1) ;④β 连环蛋白在L9981 nm 2 3 H1 肺癌细胞胞核中表达量IOD( 2 945± 68)与L9981( 2 60 4± 2 3 )和L9981 pLXSN( 2 65 2± 5 3 )比较无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;⑤L9981与L9981 pLXSN两者间GSK 3 β和β 连环蛋白在肺癌细胞胞浆和胞核的? 展开更多

关键词 L9981 nm-23-H1基因 GSK-3Β Β-连环蛋白 Wnt信号通路 分子靶向阻断

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nm23-H_1基因转染能上调人肺癌细胞株L9981中GSK-3β激酶活性 被引量：3

7

作者 付军科 周清华 +7 位作者 朱文 王艳萍 陈小禾 车国卫 聂强 李定彪 刘伦旭 李印 《中国肺癌杂志》 CAS 2004年第2期81-85,共5页

目的　探讨转移抑制基因nm2 3 H1对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981中Wnt信号传导激酶GSK 3 β的表达量和活性的影响 ,为全面阐明nm2 3 H1基因调控肺癌转移相关信号传导通路的分子机制提供实验依据。方法　将稳定转染nm 2 3 H1基因的... 目的　探讨转移抑制基因nm2 3 H1对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981中Wnt信号传导激酶GSK 3 β的表达量和活性的影响 ,为全面阐明nm2 3 H1基因调控肺癌转移相关信号传导通路的分子机制提供实验依据。方法　将稳定转染nm 2 3 H1基因的人高转移大细胞肺癌细胞株L9981 nm2 3 H1、原代细胞株L9981和空载体转染细胞株L9981 pLXSN培养传代 ,应用Westernblot分别检测应用 2 0mmol/LLiCl处理前后三个肺癌细胞株胞浆、胞核中GSK 3 β的表达水平 ,应用免疫共沉淀同位素闪烁计数法测定上述肺癌细胞株胞浆和胞核中的GSK 3 β激酶活性。 结果　 ( 1)L9981 nm2 3 H1胞浆和胞核中GSK 3 β蛋白表达量分别为( 63 41± 5 41)和 ( 4 3 5 6± 490 )IOD ,L9981 pLXSN分别为 ( 3 613± 3 83 )和 ( 70 5± 75 )IOD ,L9981分别为 ( 373 6± 2 98)和 ( 65 7± 5 7)IOD。三个细胞株间胞浆和胞核中GSK 3 β表达量均有非常显著差异 (P <0 .0 1) ;两两比较 :L9981 nm2 3 H1胞浆和胞核GSK 3 β表达水平均显著高于L9981 pLXSN和L9981(P <0 .0 1) ,而后两者之间比较均无显著性差异 (P >0 .0 5 )。 ( 2 )L9981 nm2 3 H1胞浆和胞核GSK 3 β激酶活性分别为 ( 2 895 5±2 5 0 9)和 ( 92 47± 92 4)CPM ,L9981 pLXSN分别为 ( 112 41± 展开更多

关键词 nm23-H1 基因转染 肺癌 癌细胞 L9981 GSK-3Β 信号传导激酶活性 转移抑制基因

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人肺癌细胞株L9981-nm23-H_1的建立 被引量：5

8

作者 车国卫 周清华 +6 位作者 王艳萍 陈军 刘伦旭 覃扬 孙芝琳 陈小禾 朱文 《中国肺癌杂志》 CAS 2004年第3期187-190,共4页

目的　建立转染野生型nm2 3 H1 基因的人大细胞肺癌细胞株L9981 nm2 3 H1 。方法　应用基因克隆技术构建逆转录病毒载体pLXSN nm 2 3 H1 EGFP。脂质体法转染PA3 17细胞 ,得到逆转录病毒 ,并将病毒感染L9981细胞 ,获得L9981 nm 2 3 ... 目的　建立转染野生型nm2 3 H1 基因的人大细胞肺癌细胞株L9981 nm2 3 H1 。方法　应用基因克隆技术构建逆转录病毒载体pLXSN nm 2 3 H1 EGFP。脂质体法转染PA3 17细胞 ,得到逆转录病毒 ,并将病毒感染L9981细胞 ,获得L9981 nm 2 3 H1 。应用PCR和Westernblot检测L9981 nm2 3 H1 细胞中nm2 3 H1基因及其蛋白表达。结果　成功构建了逆转录病毒载体pLXSN nm2 3 H1 EGFP。nm2 3 H1 cDNA导入到L9981细胞株中 ,并检测到L9981 nm 2 3 H1 细胞中有nm 2 3 H1 蛋白表达。结论　nm 2 3 H1 基因在细胞株L9981 nm2 3 H1 中能持续。 展开更多

关键词 NM23-H1基因 L9981细胞株 肺肿瘤

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nm23-H_1基因点突变对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981的GSK-3β激酶活性的影响 被引量：3

9

作者 马力 周清华 +7 位作者 朱文 朱大兴 杨雪琴 王艳萍 陈小禾 张敏 高利伟 赵颖 《中国肺癌杂志》 CAS 2006年第1期30-34,共5页

背景与目的我们的前期研究结果表明nm23-H1基因的肺癌转移抑制作用可能与上调Wnt信号通路中关键激酶GSK-3β的活性、进而抑制Wnt信号通路相关。本研究的目的是探讨nm23-H1点突变对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981中胞质和胞核的GSK-3β... 背景与目的我们的前期研究结果表明nm23-H1基因的肺癌转移抑制作用可能与上调Wnt信号通路中关键激酶GSK-3β的活性、进而抑制Wnt信号通路相关。本研究的目的是探讨nm23-H1点突变对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981中胞质和胞核的GSK-3β激酶活性的影响,为阐明nm23-H1基因调控肺癌转移相关信号传导通路的分子机制提供实验依据。方法将原代人低转移大细胞肺癌细胞株NL9980、原代人高转移大细胞肺癌细胞株L9981、空载体转染细胞株L9981-pEGFP、稳定转染nm23-H1基因的细胞株L9981-nm23-H1-pEGFP以及稳定转染在44、96、118、120号位点发生突变后的nm23-H1基因的转基因肺癌细胞株L9981-nm23-H1S44A-pEGFP、L9981-nm23-H1P96S-pEGFP、L9981-nm23-H1H118F-pEGFP和L9981-nm23-H1S120G-pEGFP作为研究对象,应用免疫共沉淀同位素闪烁计数法测定上述肺癌细胞株胞质和胞核中的GSK-3β激酶活性。结果nm23-H1基因发生点突变后,所有转基因肺癌细胞株细胞胞质和胞核中的GSK-3β活性均较突变前有所下降。L9981-nm23-H1S44A-pEGFP、L9981-nm23-H1P96S-pEGFP、L9981-nm23-H1H118F-pEGFP、L9981-nm23-H1S120G-pEGFP分别与L9981-nm23-H1-pEGFP比较,胞质与胞核中GSK-3β激酶活性均存在显著性差异(P<0.05),其中L9981-nm23-H1P96S-pEGFP与L9981-nm23-H1-pEGFP胞质中GSK-3β活性存在极显著差异(P<0.01),L9981-nm23-H1S44A-pEGFP、L9981-nm23-H1P96S-pEGFP和L9981-nm23-H1H118F-pEGFP与L9981-nm23-H1-pEGFP的胞核中GSK-3β活性存在极显著差异(P<0.01)。结论①nm23-H1基因突变能显著影响其对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981胞质和胞核中GSK-3β激酶活性的调控作用;②nm23-H1基因可能通过调控L9981中GSK-3β激酶活性来抑制L9981细胞株中Wnt信号传导。 展开更多

关键词 人高转移大细胞肺癌细胞株L9981 NM23-H1 基因 Wnt信号通路 GSK-3Β 点突变

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nm23-H_1基因转染前后人高转移大细胞肺癌细胞株L9981 PKA活性变化的实验研究 被引量：2

10

作者 李定彪 周清华 +7 位作者 王艳萍 朱文 陈小禾 杨俊杰 刘伦旭 付军科 聂强 李印 《中国肺癌杂志》 CAS 2004年第2期91-94,共4页

目的　探讨nm2 3 H1基因转染和forskolin对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981PKA活性的影响。方法　应用PKA通路特异激动剂forskolin对人高转移大细胞肺癌原代细胞株L9981、转基因细胞株L9981 nm 2 3 H1 pLXSN和空载体转染细胞株L9981 pL... 目的　探讨nm2 3 H1基因转染和forskolin对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981PKA活性的影响。方法　应用PKA通路特异激动剂forskolin对人高转移大细胞肺癌原代细胞株L9981、转基因细胞株L9981 nm 2 3 H1 pLXSN和空载体转染细胞株L9981 pLXSN共同培养 ,应用放免法检测forskolin处理后不同时间点三个细胞株PKA的活性变化。结果　 ( 1)forskolin处理前L9981、L9981 pLXSN和L9981 nm2 3 H1 pLXSN的PKA活性经F检验有显著性差异 (P <0 .0 1) ;两两比较 :L9981 nm2 3 H1 pLXSN的PKA活性显著高于L9981和L9981 pLXSN(P <0 .0 1) ,而L9981与L9981 pLXSN之间比较无显著性差异 (P >0 .0 5 )。 ( 2 )在同一作用时间 ( 3 0min)下 ,三个细胞株经不同浓度forskolin处理后PKA活性均显著升高 (P <0 .0 1) ,在forskolin浓度为 10 0 μmol/L时PKA活性最高 ,呈剂量依赖关系。 ( 3 )三个细胞株在同一浓度forskolin( 10 0μmol/L)处理下 ,PKA活性随作用时间升高 ,在forskolin作用时间为 3 0min时PKA的活性最高 ,呈时间依赖关系。结论　 ( 1)nm2 3 H1基因转染能显著上调人高转移大细胞肺癌细胞株L9981的PKA活性 ,nm2 3 H1作为一种肿瘤转移抑制基因的作用机理与PKA信号通路可能有一定联系 ;( 2 )forskolin能显著上调L9981细胞? 展开更多

关键词 NM23-H1 基因转染 癌细胞 L9981 PKA活性 实验 FORSKOLIN PKA通路特异激动剂 高转移 大细胞肺癌

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LAPTM4B基因多态性与肺癌易感性的关系 被引量：2

11

作者 李昌林 周清华 +3 位作者 王艳萍 陈小禾 杨雪琴 朱大兴 《中国肺癌杂志》 CAS 2006年第2期109-112,共4页

背景与目的已有的研究结果显示溶酶体相关4次跨膜蛋白质β(lysosomeassociatedproteintransmembrane4beta,LAPTM4B)在肿瘤发生中发挥重要的作用,研究认为LAPTM4B的基因型2/2与肝癌易感性密切相关。本研究旨在探讨LAPTM4B基因多态性与肺... 背景与目的已有的研究结果显示溶酶体相关4次跨膜蛋白质β(lysosomeassociatedproteintransmembrane4beta,LAPTM4B)在肿瘤发生中发挥重要的作用,研究认为LAPTM4B的基因型2/2与肝癌易感性密切相关。本研究旨在探讨LAPTM4B基因多态性与肺癌易感性的关系。方法以病例对照研究的方法,用基于特异性引物的PCR对131例非小细胞肺癌患者和104例正常人进行LAPTM4B基因分型,用χ2检验分析肺癌组和对照组基因型频率和其它参数的分布。结果LAPTM4B的等位基因1和2在肺癌组中的频率分别为74.8%和25.2%,在对照组分别为72.1%和27.9%,二组间等位基因分布频率比较差异无统计学意义(P=0.510)。LAPTM4B的基因型1/1,1/2和2/2在肺癌组分别为53.4%、42.7%和3.8%,在对照组分别为54.8%、34.6%和10.6%,两组间三种基因型分布频率比较差异无统计学意义(P=0.087)。LAPTM4B基因型分布与患者的病理类型和临床分期等均无明显关系。结论本研究未观察到LAPTM4B基因多态性与肺癌易感性之间存在统计学相关关系。 展开更多

关键词 肺肿瘤 病例对照研究 癌基因 多态现象 肺癌易感性

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nm23-H_1基因转染前后人肺癌细胞中PKC转位的研究 被引量：1

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作者 聂强 朱文 +7 位作者 王艳萍 陈小禾 杨俊杰 刘伦旭 付军科 李定彪 李印 周清华 《中国肺癌杂志》 CAS 2004年第2期86-90,共5页

目的　探讨nm2 3 H1转染和蛋白激酶C(PKC)特异抑制剂CalphostinC对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981细胞PKC信号转导通路的作用 ,以及nm2 3 H1基因对PKC激活转位的影响。方法　应用激光扫描共聚焦显微镜观察nm 2 3 H1基因转染前后和Cal... 目的　探讨nm2 3 H1转染和蛋白激酶C(PKC)特异抑制剂CalphostinC对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981细胞PKC信号转导通路的作用 ,以及nm2 3 H1基因对PKC激活转位的影响。方法　应用激光扫描共聚焦显微镜观察nm 2 3 H1基因转染前后和CalphostinC处理转基因细胞株L9981 nm2 3 H1前后PKC在不同的亚细胞区域的定位情况。结果　 ( 1)原代细胞株L9981和空载体细胞株L9981 pLXSN中PKC α、PKC βⅡ主要位于胞核及核周 ,处于激活状态 ;转染nm 2 3 H1基因后的人肺癌细胞株L9981 nm2 3 H1中PKC α、PKC βⅡ主要位于胞浆 ,处于未激活状态。 ( 2 )CalphostinC作用后所有细胞中的PKC均主要位于胞浆中 ,处于未激活状态。结论　 ( 1)nm2 3 H1基因可使L9981细胞株中PKC从胞核向胞浆转位 ,从而抑制PKC信号转导。 ( 2 )CalphostinC可使L9981、L9981 pLXSN细胞株中PKC从胞核向胞浆转位 ,从而抑制PKC信号转导。 展开更多

关键词 NM23-H1 基因转染 肺癌 癌细胞 PKC转位 蛋白激酶C抑制剂 信号转导

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小鼠Ras激酶抑制剂(KSR)基因氨基端和羧基端真核表达载体的构建及其在293T细胞中的表达 被引量：1

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作者 杨雪琴 周清华 +6 位作者 朱文 朱大兴 马力 李昌林 王艳萍 陈小禾 马家宝 《中国肺癌杂志》 CAS 2006年第2期123-126,共4页

背景与目的已有的实验证据表明,Ras激酶抑制剂(kinasesuppressorofRas,KSR)的功能主要是作为一个支架蛋白组装MAPK及其上游调控子形成多蛋白的复合体。但KSR是否存在激酶活性,一直是争论的焦点。本研究的目的是构建小鼠KSR基因氨基端(NK... 背景与目的已有的实验证据表明,Ras激酶抑制剂(kinasesuppressorofRas,KSR)的功能主要是作为一个支架蛋白组装MAPK及其上游调控子形成多蛋白的复合体。但KSR是否存在激酶活性,一直是争论的焦点。本研究的目的是构建小鼠KSR基因氨基端(NKSR)和羧基端(CKSR)的真核表达载体,并观察其在293T细胞中的表达。方法通过PCR方法扩增NKSR和CKSR目的片段,利用基因重组技术构建pCMVTag2bNKSR和pCMVTag2bCKSR真核表达载体,并进行酶切和测序鉴定。鉴定正确的克隆瞬时转染293T细胞,通过Westernblot方法检测目的蛋白的表达。结果通过酶切和测序鉴定,pCMVTag2bNKSR和pCMVTag2bCKSR真核表达载体序列正确,编码框正确。转染后的293T细胞经Westernblot检测,能够表达目的蛋白。结论成功构建了pCMVTag2bNKSR和pCMVTag2bCKSR真核表达载体并可在293T细胞中表达,为以后的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 KSR 真核表达 基因重组

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人突变K-ras基因修饰lewis肺癌细胞株的建立及其生物学特性 被引量：1

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作者 李潞 喻璟瑞 +4 位作者 周清华 陆燕蓉 王艳萍 陈小禾 朱文 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期135-138,147,共5页

目的:探讨以K-ras基因为靶点,建立人K-ras(12位密码子点突变)基因修饰的lewis肺癌细胞株3LL-pcDNA3-K-ras/V12及其生物学特性。方法:应用脂质体法将人K-ras(12位密码子点突变)基因cDNA导入lewis肺癌细胞株3LL,应用流式细胞仪检测p21/V1... 目的:探讨以K-ras基因为靶点,建立人K-ras(12位密码子点突变)基因修饰的lewis肺癌细胞株3LL-pcDNA3-K-ras/V12及其生物学特性。方法:应用脂质体法将人K-ras(12位密码子点突变)基因cDNA导入lewis肺癌细胞株3LL,应用流式细胞仪检测p21/V12蛋白的表达,同时检测3LL细胞株转基因前后生长、克隆形成率和体内成瘤的变化。结果:成功的将人K-ras(12位密码子点突变)基因cDNA导入lewis肺癌细胞株3LL,p21/V12蛋白在3LL-pcDNA3-K-ras/V12中稳定表达,转基因细胞株的生长曲线和克隆形成率与原代细胞株3LL无显著差异;但转基因细胞株在C57BL/6小鼠体内的成瘤性显著高于原代细胞株3LL。结论:成功的建立了导入K-ras(12位密码子点突变)的lewis肺癌细胞株3LL-pcDNA3-K-ras/V12。 展开更多

关键词 人突变K—ras基因 肺癌细胞株 生物学特性

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nm23-H_1基因逆转肺癌转移表型及其分子机制的实验研究 被引量：24

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作者 周清华 车国卫 +8 位作者 覃扬 王艳萍 孙芝琳 孙泽芳 陈小禾 彭玉珍 秦建军 刘伦旭 陈军 《中国肺癌杂志》 CAS 2003年第2期141-143,共3页

关键词 转移抑制基因 肺癌 分子机制 nm23-Hl基因 肿瘤

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无纸无盘片化的INTS考核系统

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作者 黄河笑 李卫东 陈小禾 《计算机工程》 CAS CSCD 北大核心 1999年第7期73-74,83,共3页

介绍了一个基于Internet和局域网的无纸无盘片化的计算机考试系统。该考试系统于1997年5月份开始，在中央电大和Novell／k司在全国合作举办的”网络管理师”培训中心中考核使用。系统设计中采用了多种技术措施，从而保证了系统运行的安... 介绍了一个基于Internet和局域网的无纸无盘片化的计算机考试系统。该考试系统于1997年5月份开始，在中央电大和Novell／k司在全国合作举办的”网络管理师”培训中心中考核使用。系统设计中采用了多种技术措施，从而保证了系统运行的安全性和可靠性。系统突破了计算机考试中一般只能通过传统方式进行远程考核的局限，能够通过Internet实施远程考试并在培训中心的局域网中进行无纸无盘片的考核，改变了传统的计算机的考核方式。系统运行的结果表明，系统设计达到了预期的目标。 展开更多

关键词 远程考试 题库系统 INTS考核系统 计算机

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通用选择题考试系统 被引量：2

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作者 陈小禾 《计算机工程》 CAS CSCD 北大核心 2004年第24期195-197,共3页

对各学科的选择题采用由计算机生成试题,在计算机上进行考试,由计算机实现阅卷和数据处理的无纸化考试。用动态链接库(DLL)对试题进行加密和解密,增强了可靠性和灵活性。采用OLE自动化技术将阅卷结果存入Excel工作表作进一步数据分析。

关键词 选择题 考试系统 VB DLL 注册表 OLE自动化

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