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中国人共刺激信号抑制配体表达载体的构建及在大肠杆菌DH5α中的表达
被引量：
1
1
作者
朱乃硕
陆敏依
+2 位作者
于善谦
朱亚军
李勇
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2001年第10期559-562,共4页
目的 :构建CTLA 4基因表达载体并在大肠杆菌DH5α中表达CTLA 4蛋白。方法 :用PCR方法获得中国人CTLA 4基因第二外显子 ,构建重组表达质粒pPBCTLA ,转化大肠杆菌DH5α ,以PCR和RFLP方法筛选阳性克隆 ,以免疫印迹技术检测表达产物。结果 ...
目的 :构建CTLA 4基因表达载体并在大肠杆菌DH5α中表达CTLA 4蛋白。方法 :用PCR方法获得中国人CTLA 4基因第二外显子 ,构建重组表达质粒pPBCTLA ,转化大肠杆菌DH5α ,以PCR和RFLP方法筛选阳性克隆 ,以免疫印迹技术检测表达产物。结果 :阳性重组子在DH5α中经温度诱导可表达CTLA 4蛋白 ,分子量与理论值相符 (约 12kD)。进一步分析表明 ,CTLA 4蛋白主要以包涵体形式存在。Western blot结果证实 ,12kD的表达条带可与标准羊抗人CTLA 4IgG起特异反应。淋巴细胞转化实验结果表明该蛋白具有明显的免疫抑制作用。结论 :用基因工程技术获得中国人CTLA 4基因表达蛋白 ,为进一步研究CTLA 4的生物学功能及研制抗CTLA 4抗体奠定了基础。
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关键词
CTLA-4
基因表达
淋巴细胞转化实验
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职称材料
CO2分压对贴壁细胞MRC-5连续传代培养的影响
2
作者
张伊丽
刘照平
+2 位作者
陆敏依
蔡明勇
吴根鹏
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第10期169-173,共5页
研究培养过程中CO2的使用和pH稳定性对MRC-5细胞增殖、传代培养及产毒水平的影响。采用不同浓度的NaHCO3调节细胞培养液pH值,结合CO2使用,监测细胞培养过程中pH变化情况,以及在连续传代过程中的细胞形态和增殖情况。接种水痘-带状疱疹...
研究培养过程中CO2的使用和pH稳定性对MRC-5细胞增殖、传代培养及产毒水平的影响。采用不同浓度的NaHCO3调节细胞培养液pH值,结合CO2使用,监测细胞培养过程中pH变化情况,以及在连续传代过程中的细胞形态和增殖情况。接种水痘-带状疱疹病毒比较不同状态下细胞的产毒能力。采用碳酸氢盐缓冲体系时,无CO2分压的封闭培养组细胞培养液pH波动较大,在传代培养中观察到细胞形态较差,细胞状态下滑快;细胞连续传代至35-37代;细胞在31代平均产毒水平4.64 LgPFU/mL。有CO2分压的开放组细胞培养液pH相对平稳,在传代培养中细胞活率维持80%以上,细胞状态下滑趋势平缓,可连续传代至41代;31代细胞平均产毒水平4.83Lg PFU/mL。采用碳酸氢盐缓冲体系的细胞培养液匹配合适的CO2分压有助于细胞状态的优化提升。
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关键词
细胞培养
MRC-5
CO2分压
pH稳定性
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职称材料
题名
中国人共刺激信号抑制配体表达载体的构建及在大肠杆菌DH5α中的表达
被引量：
1
1
作者
朱乃硕
陆敏依
于善谦
朱亚军
李勇
机构
复旦大学生命科学院病毒及分子免疫实验室
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2001年第10期559-562,共4页
基金
国家自然科学基金
上海市科委重点项目资助
文摘
目的 :构建CTLA 4基因表达载体并在大肠杆菌DH5α中表达CTLA 4蛋白。方法 :用PCR方法获得中国人CTLA 4基因第二外显子 ,构建重组表达质粒pPBCTLA ,转化大肠杆菌DH5α ,以PCR和RFLP方法筛选阳性克隆 ,以免疫印迹技术检测表达产物。结果 :阳性重组子在DH5α中经温度诱导可表达CTLA 4蛋白 ,分子量与理论值相符 (约 12kD)。进一步分析表明 ,CTLA 4蛋白主要以包涵体形式存在。Western blot结果证实 ,12kD的表达条带可与标准羊抗人CTLA 4IgG起特异反应。淋巴细胞转化实验结果表明该蛋白具有明显的免疫抑制作用。结论 :用基因工程技术获得中国人CTLA 4基因表达蛋白 ,为进一步研究CTLA 4的生物学功能及研制抗CTLA 4抗体奠定了基础。
关键词
CTLA-4
基因表达
淋巴细胞转化实验
Keywords
CTLA 4 Gene expression Lymphocyte transformation test
分类号
R392.2 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
CO2分压对贴壁细胞MRC-5连续传代培养的影响
2
作者
张伊丽
刘照平
陆敏依
蔡明勇
吴根鹏
机构
上海荣盛生物药业有限公司
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第10期169-173,共5页
文摘
研究培养过程中CO2的使用和pH稳定性对MRC-5细胞增殖、传代培养及产毒水平的影响。采用不同浓度的NaHCO3调节细胞培养液pH值,结合CO2使用,监测细胞培养过程中pH变化情况,以及在连续传代过程中的细胞形态和增殖情况。接种水痘-带状疱疹病毒比较不同状态下细胞的产毒能力。采用碳酸氢盐缓冲体系时,无CO2分压的封闭培养组细胞培养液pH波动较大,在传代培养中观察到细胞形态较差,细胞状态下滑快;细胞连续传代至35-37代;细胞在31代平均产毒水平4.64 LgPFU/mL。有CO2分压的开放组细胞培养液pH相对平稳,在传代培养中细胞活率维持80%以上,细胞状态下滑趋势平缓,可连续传代至41代;31代细胞平均产毒水平4.83Lg PFU/mL。采用碳酸氢盐缓冲体系的细胞培养液匹配合适的CO2分压有助于细胞状态的优化提升。
关键词
细胞培养
MRC-5
CO2分压
pH稳定性
Keywords
cell culture
MRC-5
CO2 partial pressure
pH stability
分类号
R73 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
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1
中国人共刺激信号抑制配体表达载体的构建及在大肠杆菌DH5α中的表达
朱乃硕
陆敏依
于善谦
朱亚军
李勇
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2001
1
在线阅读
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职称材料
2
CO2分压对贴壁细胞MRC-5连续传代培养的影响
张伊丽
刘照平
陆敏依
蔡明勇
吴根鹏
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2019
0
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