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H3亚型猪流感病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：6: 1; 作者郭泗虎王文华 +6 位作者张亮权齐海涛曹楠闫明菲黄昌力张超轶张桂红《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期124-127,共4页; 为建立一种快捷、可行的检测H3亚型猪流感病毒(SIV)的方法,本研究根据GenBank中登录的H3亚型SIV HA基因的保守序列,设计合成一对特异性引物,建立了一种检测H3亚型SIV的SYBR GreenⅠ荧光定量检测方法,并进行灵敏度、稳定性和特异性试验,... 展开更多; 关键词猪流感 H3亚型实时荧光定量PCR; 在线阅读下载PDF 职称材料

PRRSV XH-GD株Nsp2部分缺失感染性克隆的构建被引量：4: 2; 作者张民泽谢杰雄 +7 位作者郭泗虎王衡闫明菲赵孟孟黄震粟硕孙龙张桂红《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期10-14,共5页; 为研究Nsp2编码区不同区域缺失对病毒体外复制的影响,本研究在猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)XH-GD株反向遗传操作平台的基础上构建了pOK-AaBCD、pOK-AbBCD、pOK-AcBCD等3种Nsp2编码区部分缺失的感染性重组质粒。将这3种感染性质粒分别... 展开更多; 关键词猪繁殖与呼吸综合症病毒 Nsp2部分缺失感染性克隆; 在线阅读下载PDF 职称材料

猪繁殖与呼吸综合征病毒XH株感染性克隆的构建被引量：4: 3; 作者吴欣伟熊永忠 +5 位作者秦宏阳曹宗喜于俊勇闫明菲郭泗虎张桂红《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期97-100,共4页; 为构建猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)反向遗传操作系统,本实验采用RT-PCR方法将PRRSV-XH株的基因组序列分为6个片段进行扩增,连接至低拷贝载体pOKQ中,获得全长cDNA克隆。将该克隆体外转录,经脂质体转染Marc-145细胞,观察细胞病变。经RT... 展开更多; 关键词猪繁殖与呼吸综合征病毒全长CDNA 拯救病毒; 在线阅读下载PDF 职称材料

2株猪繁殖与呼吸综合征病毒全基因序列分析被引量：4: 4; 作者张民泽闫明菲 +5 位作者谢杰雄黄震曹宗喜吴欣伟郭泗虎张桂红《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第10期49-52,共4页; 利用RT-PCR分段扩增的方法,扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)中山分离株(ZS-GD株)、珠海分离株(ZH-GD株)覆盖全长基因组的10个片段,分别克隆入pMD18-T载体进行序列测定,获得了PRRSV ZS-GD株和ZH-GD株基因组全长15320bp的核苷酸序列... 展开更多; 关键词 PRRSV 基因组序列测定分析; 在线阅读下载PDF 职称材料

检测猪戊型肝炎病毒的荧光定量PCR方法的建立被引量：4: 5; 作者张亮权欧阳昀 +5 位作者刘志刚曹宗喜闫明菲王文华郭泗虎张桂红《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2011年第10期16-18,共3页; 根据GenBank中猪戊型肝炎病毒的ORF2核苷酸序列的保守区域设计合成一对特异性引物,建立了一套SYBRGreenⅠ荧光定量PCR检测猪源戊型肝炎病毒(swHEV)的方法,并评价了该方法的灵敏度、稳定性和特异性,同时与常规的RT-nPCR进行对比分析。结... 展开更多; 关键词猪戊型肝炎病毒荧光定量PCR RT-nPCR; 在线阅读下载PDF 职称材料

猪繁殖与呼吸综合征病毒SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立被引量：3: 6; 作者黄震魏春娅 +5 位作者闫明菲田悦茹张民泽谢杰雄孙龙张桂红《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第4期89-92,共4页; 根据GenBank中已登录的美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)在Nsp7基因中的保守区域设计合成了1对特异性引物,通过反应条件的优化,建立了检测美洲型PRRSV的SYBRGreenⅠ实时定量PC... 展开更多; 关键词猪繁殖与呼吸综合征病毒实时荧光定量PCR Nsp7; 在线阅读下载PDF 职称材料

两株猪繁殖与呼吸征病毒的分离鉴定及遗传变异分析被引量：2: 7; 作者张超轶吴欣伟 +7 位作者闫明菲张亮权郭泗虎黄昌力黄震张民泽赵付荣张桂红《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第4期82-86,共5页; 从广东省发病猪场采集的组织和血清中分离到两株PRRSV,病料经RT-PCR检测为阳性,通过Marc-145细胞进行传代,可产生明显细胞病变,通过间接免疫荧光可检测到荧光信号,两株病毒分别命名为ZH-GD株和ZS-GD株。对两株病毒的ORF5和Nsp2高变区进... 展开更多; 关键词 PRRSV 分离鉴定序列测定和分析; 在线阅读下载PDF 职称材料

反向遗传操作技术在猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗研发中的应用: 8; 作者郭泗虎曹宗喜 +4 位作者李海琴闫明菲亓文宝焦培荣张桂红《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2011年第10期54-56,共3页; 猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起猪的一种高度传染性疾病。该病自1987年首次发现以来，已遍及世界各个养猪国家，它所引发的母猪流产和仔猪的呼吸障碍给养猪业造成了灾难性的打击。特别是2006年以... 展开更多; 关键词猪繁殖与呼吸综合征病毒反向遗传操作技术病毒疫苗应用研发传染性疾病 PRRSV 养猪业; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名H3亚型猪流感病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：6: 1; 作者郭泗虎王文华张亮权齐海涛曹楠闫明菲黄昌力张超轶张桂红; 机构华南农业大学兽医学院农业部兽用疫苗创制重点实验室; 出处《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期124-127,共4页; 基金国家自然科学基金会(NSFC)-广东联合基金项目(U0931003) 国家生猪现代农业产业技术体系(NYCYTX009); 文摘为建立一种快捷、可行的检测H3亚型猪流感病毒(SIV)的方法,本研究根据GenBank中登录的H3亚型SIV HA基因的保守序列,设计合成一对特异性引物,建立了一种检测H3亚型SIV的SYBR GreenⅠ荧光定量检测方法,并进行灵敏度、稳定性和特异性试验,与普通PCR进行比较。研究结果表明,标准曲线的循环阈值与模板浓度呈现良好的线性关系,R2为0.994,CV在0.17%～1.41%之间,具有良好稳定性。除H3亚型SIV外,对H1、H4、H6、H9亚型SIV以及猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、口蹄疫病毒和猪圆环病毒2型的检测均为阴性,与普通PCR相比更灵敏。该方法特异性好,准确率高,适于临床分离鉴别H3亚型SIV。; 关键词猪流感 H3亚型实时荧光定量PCR; Keywords swine influenza virus H3 subtype real-time fluorescent quantitative PCR; 分类号 S852.65 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名PRRSV XH-GD株Nsp2部分缺失感染性克隆的构建被引量：4: 2; 作者张民泽谢杰雄郭泗虎王衡闫明菲赵孟孟黄震粟硕孙龙张桂红; 机构华南农业大学兽医学院; 出处《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期10-14,共5页; 基金现代农业产业技术体系建设专项资金(CARS-36); 文摘为研究Nsp2编码区不同区域缺失对病毒体外复制的影响,本研究在猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)XH-GD株反向遗传操作平台的基础上构建了pOK-AaBCD、pOK-AbBCD、pOK-AcBCD等3种Nsp2编码区部分缺失的感染性重组质粒。将这3种感染性质粒分别转染Marc-145细胞进行不同Nsp2缺失株的病毒拯救,结果显示,只有在Nsp2编码区缺失105个氨基酸的缺失株XH-GD-Δ105能够在Marc-145细胞中增殖,表明这一缺失区域为病毒复制的非必需,而其他两种感染性质粒则未拯救出相应的缺失重组病毒。本研究为进一步研究Nsp2的基因序列的缺失与PRRSV毒力之间的关系奠定了基础。; 关键词猪繁殖与呼吸综合症病毒 Nsp2部分缺失感染性克隆; Keywords porcine reproductive and respiratory syndrome virus partial Nsp2 gene deletion infectious clone; 分类号 S852.65 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名猪繁殖与呼吸综合征病毒XH株感染性克隆的构建被引量：4: 3; 作者吴欣伟熊永忠秦宏阳曹宗喜于俊勇闫明菲郭泗虎张桂红; 机构华南农业大学兽医学院农业部动物疫病防控重点开放实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所维科生物技术开发公司; 出处《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期97-100,共4页; 基金国家自然科学基金(30871877) 国家生猪现代农业产业技术体系(NYCYTX009); 文摘为构建猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)反向遗传操作系统,本实验采用RT-PCR方法将PRRSV-XH株的基因组序列分为6个片段进行扩增,连接至低拷贝载体pOKQ中,获得全长cDNA克隆。将该克隆体外转录,经脂质体转染Marc-145细胞,观察细胞病变。经RT-PCR、间接免疫荧光和western blot等试验验证,表明构建了具有感染性的PRRSV-XH株全长cDNA克隆。本实验为在分子水平上研究PRRSV的复制、致病机理和基因产物的功能等方面提供技术支持,并为构建新型病毒载体和开发安全有效的活病毒疫苗奠定基础。; 关键词猪繁殖与呼吸综合征病毒全长CDNA 拯救病毒; Keywords porcine reproductive and respiratory syndrome virus full-length cDNA rescued virus; 分类号 S852.65 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名2株猪繁殖与呼吸综合征病毒全基因序列分析被引量：4: 4; 作者张民泽闫明菲谢杰雄黄震曹宗喜吴欣伟郭泗虎张桂红; 机构华南农业大学兽医学院海南省农业科学院畜牧兽医研究所; 出处《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第10期49-52,共4页; 基金现代农业产业技术体系建设专项资金资助(CARS-36); 文摘利用RT-PCR分段扩增的方法,扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)中山分离株(ZS-GD株)、珠海分离株(ZH-GD株)覆盖全长基因组的10个片段,分别克隆入pMD18-T载体进行序列测定,获得了PRRSV ZS-GD株和ZH-GD株基因组全长15320bp的核苷酸序列。利用生物信息学软件对PRRSV ZS-GD株和ZH-GD株全基因组序列进行了遗传进化分析,结果显示PRRSV ZS-GD株和ZH-GD株与美洲型参考株的核苷酸序列相似性分别为88.1%～97.8%和88.4%～98.0%;与欧洲型参考株(Lelystad)的核苷酸序列相似性分别为60.6%和60.4%,且在2株毒的Nsp2蛋白上有30个aa的缺失,表明PRRSV ZS-GD株和ZH-GD株均为美洲型分离株的缺失变异株。; 关键词 PRRSV 基因组序列测定分析; Keywords PRRSV genome sequencing analysis; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名检测猪戊型肝炎病毒的荧光定量PCR方法的建立被引量：4: 5; 作者张亮权欧阳昀刘志刚曹宗喜闫明菲王文华郭泗虎张桂红; 机构华南农业大学兽医学院; 出处《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2011年第10期16-18,共3页; 基金国家生猪现代农业产业技术体系(NYCYTX009) 广州市科技支撑计划项目"猪戊型肝炎诊断关键技术的研究"(10A82101592); 文摘根据GenBank中猪戊型肝炎病毒的ORF2核苷酸序列的保守区域设计合成一对特异性引物,建立了一套SYBRGreenⅠ荧光定量PCR检测猪源戊型肝炎病毒(swHEV)的方法,并评价了该方法的灵敏度、稳定性和特异性,同时与常规的RT-nPCR进行对比分析。结果表明,建立标准曲线的相关系数为0.998,斜率为-3.039,Ct值变异系数(CV)在0.17%～1.41%之间,有良好的稳定性。同时在检测猪群常见病中显示出很好的特异性,并且比RT-nPCR更灵敏,适合于swHEV的检测。; 关键词猪戊型肝炎病毒荧光定量PCR RT-nPCR; Keywords swine hepatitis E virus real-time fluorescent quantitative PCR RT-nPCR; 分类号 S852.659.6 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名猪繁殖与呼吸综合征病毒SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立被引量：3: 6; 作者黄震魏春娅闫明菲田悦茹张民泽谢杰雄孙龙张桂红; 机构华南农业大学兽医学院; 出处《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第4期89-92,共4页; 基金国家生猪现代农业产业体系(nycytx009); 文摘根据GenBank中已登录的美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)在Nsp7基因中的保守区域设计合成了1对特异性引物,通过反应条件的优化,建立了检测美洲型PRRSV的SYBRGreenⅠ实时定量PCR检测方法,同时与商品化荧光定量PCR试剂盒进行比对分析。结果表明,该方法特异性强,灵敏度高,能很好的区分美洲型猪繁殖与呼吸道综合征病毒和其他病毒。使用该方法对14份临床样品进行检测,阳性率85.7%,与商品化试剂盒符合率100%。; 关键词猪繁殖与呼吸综合征病毒实时荧光定量PCR Nsp7; Keywords porcine reproductive and respiratory syndrome virus Real time quantitative PCR Nsp7; 分类号 S854.43 [农业科学—临床兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名两株猪繁殖与呼吸征病毒的分离鉴定及遗传变异分析被引量：2: 7; 作者张超轶吴欣伟闫明菲张亮权郭泗虎黄昌力黄震张民泽赵付荣张桂红; 机构华南农业大学兽医学院; 出处《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第4期82-86,共5页; 基金国家自然科学基金会(NSFC)-广东联合基金项目(U0931003) 国家生猪现代农业产业技术体系(NYCYTX009); 文摘从广东省发病猪场采集的组织和血清中分离到两株PRRSV,病料经RT-PCR检测为阳性,通过Marc-145细胞进行传代,可产生明显细胞病变,通过间接免疫荧光可检测到荧光信号,两株病毒分别命名为ZH-GD株和ZS-GD株。对两株病毒的ORF5和Nsp2高变区进行序列测定和分析,结果表明,PRRSV ZH-GD株和ZS-GD株的核苷酸序列与欧洲型代表株LV株间的相似性相对较远,与美洲株经典毒株VR-2332间的相似性分别为88.6%和88.1%,与中国经典美洲毒株CH-1a间的相似性分别为94.4%和93.0%。在Nsp2上有30个氨基酸的缺失,与JXA1、XH-GD等高致病性变异株的Nsp2缺失位置一致。分离的两株PRRSV均属于美洲型的变异株PRRSV。; 关键词 PRRSV 分离鉴定序列测定和分析; Keywords PRRSV isolation and identification sequencing and analysis; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名反向遗传操作技术在猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗研发中的应用: 8; 作者郭泗虎曹宗喜李海琴闫明菲亓文宝焦培荣张桂红; 机构华南农业大学兽医学院农业部兽用疫苗创制重点实验室海南省农业科学院畜牧兽医研究所; 出处《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2011年第10期54-56,共3页; 基金国家自然科学基金会(NSFC)-广东联合基金项目(U0931003) 国家生猪现代农业产业技术体系项目(NYCYTX009); 文摘猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起猪的一种高度传染性疾病。该病自1987年首次发现以来，已遍及世界各个养猪国家，它所引发的母猪流产和仔猪的呼吸障碍给养猪业造成了灾难性的打击。特别是2006年以来，变异株PRRSV的出现则对我国养猪业的发展产生了巨大的影响。; 关键词猪繁殖与呼吸综合征病毒反向遗传操作技术病毒疫苗应用研发传染性疾病 PRRSV 养猪业; 分类号 S852.659.1 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	H3亚型猪流感病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立	郭泗虎王文华张亮权齐海涛曹楠闫明菲黄昌力张超轶张桂红	《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2012	6	在线阅读下载PDF 职称材料
2	PRRSV XH-GD株Nsp2部分缺失感染性克隆的构建	张民泽谢杰雄郭泗虎王衡闫明菲赵孟孟黄震粟硕孙龙张桂红	《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2013	4	在线阅读下载PDF 职称材料
3	猪繁殖与呼吸综合征病毒XH株感染性克隆的构建	吴欣伟熊永忠秦宏阳曹宗喜于俊勇闫明菲郭泗虎张桂红	《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2011	4	在线阅读下载PDF 职称材料
4	2株猪繁殖与呼吸综合征病毒全基因序列分析	张民泽闫明菲谢杰雄黄震曹宗喜吴欣伟郭泗虎张桂红	《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心	2012	4	在线阅读下载PDF 职称材料
5	检测猪戊型肝炎病毒的荧光定量PCR方法的建立	张亮权欧阳昀刘志刚曹宗喜闫明菲王文华郭泗虎张桂红	《中国兽医杂志》 CAS 北大核心	2011	4	在线阅读下载PDF 职称材料
6	猪繁殖与呼吸综合征病毒SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立	黄震魏春娅闫明菲田悦茹张民泽谢杰雄孙龙张桂红	《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心	2013	3	在线阅读下载PDF 职称材料
7	两株猪繁殖与呼吸征病毒的分离鉴定及遗传变异分析	张超轶吴欣伟闫明菲张亮权郭泗虎黄昌力黄震张民泽赵付荣张桂红	《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心	2012	2	在线阅读下载PDF 职称材料
8	反向遗传操作技术在猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗研发中的应用	郭泗虎曹宗喜李海琴闫明菲亓文宝焦培荣张桂红	《中国兽医杂志》 CAS 北大核心	2011	0	在线阅读下载PDF 职称材料