目的构建人巨噬细胞移动抑制因子(hum an m acrophage m igration inh ib itory factor,hM IF)原核表达系统并制备其单克隆抗体。方法采用RT-PCR从乳腺癌细胞株MDA-MB453细胞克隆hM IF cDNA,测序后构建pET11b/hM IF重组表达质粒,转化入...目的构建人巨噬细胞移动抑制因子(hum an m acrophage m igration inh ib itory factor,hM IF)原核表达系统并制备其单克隆抗体。方法采用RT-PCR从乳腺癌细胞株MDA-MB453细胞克隆hM IF cDNA,测序后构建pET11b/hM IF重组表达质粒,转化入大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达hM IF;重组hM IF经纯化和鉴定后,作为抗原常规免疫和CpG ODN加强免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体并鉴定活性。结果构建pET11b/hM IF重组表达质粒,表达出预期hM IF蛋白,表达率30%,纯化后纯度达95%。W estern b lotting鉴定为hM IF,NO释放实验证实具有生物学活性。两种免疫方案共获得9株分泌抗hM IF抗体的杂交瘤细胞株,其中一株经W estern b lotting和活性鉴定证明具有特异性和生物学活性。结论获得hM IF重组蛋白和抗hM IF单克隆抗体,为其基础性研究和在脓毒症的治疗等临床应用研究奠定基础。展开更多
文摘目的构建人巨噬细胞移动抑制因子(hum an m acrophage m igration inh ib itory factor,hM IF)原核表达系统并制备其单克隆抗体。方法采用RT-PCR从乳腺癌细胞株MDA-MB453细胞克隆hM IF cDNA,测序后构建pET11b/hM IF重组表达质粒,转化入大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达hM IF;重组hM IF经纯化和鉴定后,作为抗原常规免疫和CpG ODN加强免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体并鉴定活性。结果构建pET11b/hM IF重组表达质粒,表达出预期hM IF蛋白,表达率30%,纯化后纯度达95%。W estern b lotting鉴定为hM IF,NO释放实验证实具有生物学活性。两种免疫方案共获得9株分泌抗hM IF抗体的杂交瘤细胞株,其中一株经W estern b lotting和活性鉴定证明具有特异性和生物学活性。结论获得hM IF重组蛋白和抗hM IF单克隆抗体,为其基础性研究和在脓毒症的治疗等临床应用研究奠定基础。
