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亮氨酸对黄牛皮下脂肪细胞棕色化的影响
被引量：
2
1
作者
郭逸芯
王之盛
+9 位作者
胡瑞
王俊梅
王森
施丽媛
张晓红
邹华围
左家学
彭全辉
薛白
王立志
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第8期3286-3298,共13页
旨在分离黄牛皮下前体脂肪细胞,探究亮氨酸对白色脂肪细胞棕色化以及脂质代谢的影响。本研究采取4头3岁的健康雄性黄牛((351.7±42.5)kg)皮下脂肪组织分离前体脂肪细胞,混合后于细胞分化D 6-D 9添加不同浓度亮氨酸(0、0.5、1、2、4...
旨在分离黄牛皮下前体脂肪细胞,探究亮氨酸对白色脂肪细胞棕色化以及脂质代谢的影响。本研究采取4头3岁的健康雄性黄牛((351.7±42.5)kg)皮下脂肪组织分离前体脂肪细胞,混合后于细胞分化D 6-D 9添加不同浓度亮氨酸(0、0.5、1、2、4、8 mmol·L^(-1))(n=6)。RT-PCR检测棕色化标志基因,筛选亮氨酸诱导脂肪细胞棕色化的浓度,后续试验分为对照组(CON)和最佳浓度亮氨酸添加组(Leu)(n=6)。RT-PCR检测线粒体生物合成关键基因表达、mtDNA拷贝数以及脂质代谢相关基因的表达,Western Blot检测棕色化关键蛋白以及信号通路蛋白表达。Mito-tracker Green染色和油红O染色分别检测细胞内线粒体含量和脂滴形态的变化。结果表明,成功分离得到黄牛皮下前体脂肪细胞并诱导为成熟脂肪细胞。4 mmol·L^(-1)亮氨酸显著提高脂肪细胞中棕色化标志因子UCP1、PRDM 16和TMEM 26的mRNA相对表达量,线粒体生物合成关键基因SIRT1、TFAM和NRF 1/2的mRNA相对表达量,上调关键蛋白UCP1、CD137和SIRT1的表达量(P<0.01)。亮氨酸显著提高细胞中mtDNA拷贝数和线粒体含量(P<0.01),降低细胞内ATP含量(P<0.05),促使细胞脂滴由单房大脂滴向多房小脂滴转变,并降低细胞内甘油三酯的含量(P<0.01)。亮氨酸抑制脂肪合成基因ACC、FAS表达,促进脂肪分解基因ATGL、HSL和脂肪酸β氧化基因PPARα、CPT1、ACOX表达(P<0.01)。添加亮氨酸极显著上调p-AMPKα/AMPKα和PGC1α的蛋白表达量(P<0.01)。综上所述,亮氨酸能促进黄牛脂肪细胞棕色化和线粒体生物合成,促进脂肪分解抑制脂肪合成,减少细胞内脂质沉积,并上调p-AMPKα/AMPKα和PGC1α的蛋白表达量。
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关键词
亮氨酸
黄牛
原代脂肪细胞
棕色化
线粒体生物合成
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职称材料
LPS对牦牛瘤胃上皮细胞补体C3激活和ATP生成代谢的影响
被引量：
1
2
作者
张祺琪
王俊梅
+9 位作者
岳子奇
郭逸芯
施丽媛
张晓红
邹华围
彭全辉
薛白
王立志
王之盛
胡瑞
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第11期4664-4675,共12页
旨在通过脂多糖(LPS)诱导牦牛瘤胃上皮细胞建立炎症模型,考察瘤胃上皮细胞作为非免疫细胞是否存在细胞内补体C3激活,及其对细胞三磷酸腺苷(ATP)生成的影响,为瘤胃健康营养调控技术提供试验依据。用不同浓度的LPS处理牦牛瘤胃上皮细胞系...
旨在通过脂多糖(LPS)诱导牦牛瘤胃上皮细胞建立炎症模型,考察瘤胃上皮细胞作为非免疫细胞是否存在细胞内补体C3激活,及其对细胞三磷酸腺苷(ATP)生成的影响,为瘤胃健康营养调控技术提供试验依据。用不同浓度的LPS处理牦牛瘤胃上皮细胞系,采用CCK-8法测定细胞活力;ELISA试剂盒测定细胞内补体C3激活产物C3a、C3b浓度以及培养基中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度;化学法检测细胞内ATP浓度,线粒体红色荧光探针和流式细胞仪检测线粒体数量及膜电位;qPCR检测细胞IL-1β、IL-6、TNF-α,补体C3及其激活关键酶组织蛋白酶B(CTSB)和组织蛋白酶L(CTSL),以及ATP合成酶亚基(ATP 5A和ATP 5C1)等基因相对表达量。结果发现:1)不同浓度LPS处理后,牦牛瘤胃上皮细胞活力极显著下调(P<0.01),TNF-α、IL-1β和IL-6等促炎因子的基因表达量和浓度极显著上调(P<0.01),在LPS浓度为10μg·mL^(-1)时,牦牛瘤胃上皮细胞炎症模型构建成功;2)炎症下,牦牛瘤胃上皮细胞内补体C3及其激活关键酶CTSB的基因表达量极显著升高(P<0.01),激活产物补体片段C3a和C3b浓度极显著升高(P<0.01);3)炎症下,牦牛瘤胃上皮细胞ATP含量极显著下降(P<0.01),线粒体膜电位显著降低(P<0.05),ATP合成酶亚基ATP 5A和ATP 5C1的基因表达量随着LPS处理浓度升高显著下调(P<0.01)。综上,利用LPS诱导建立了牦牛瘤胃上皮细胞炎症模型。在LPS刺激下,牦牛瘤胃上皮细胞可发生细胞内补体C3激活过程,并抑制线粒体ATP合成酶亚基ATP 5A、ATP 5C1和有氧呼吸关键酶ME 1的基因表达,线粒体膜电位降低,抑制ATP生成。因此,LPS诱导炎症可抑制瘤胃上皮细胞ATP生成,从而导致瘤胃健康问题。
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关键词
牦牛
瘤胃上皮细胞
免疫炎症
补体C3
ATP
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职称材料
题名
亮氨酸对黄牛皮下脂肪细胞棕色化的影响
被引量：
2
1
作者
郭逸芯
王之盛
胡瑞
王俊梅
王森
施丽媛
张晓红
邹华围
左家学
彭全辉
薛白
王立志
机构
四川农业大学动物营养研究所
临沧市畜牧技术推广站
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第8期3286-3298,共13页
基金
四川省科技计划资助(2021YFYZ0001)
临沧市肉牛改良与产业化发展关键技术研究与示范(202104AC100001-A04)
财政部和农业农村部:国家现代农业(肉牛牦牛)产业技术体系(CARS-37)。
文摘
旨在分离黄牛皮下前体脂肪细胞,探究亮氨酸对白色脂肪细胞棕色化以及脂质代谢的影响。本研究采取4头3岁的健康雄性黄牛((351.7±42.5)kg)皮下脂肪组织分离前体脂肪细胞,混合后于细胞分化D 6-D 9添加不同浓度亮氨酸(0、0.5、1、2、4、8 mmol·L^(-1))(n=6)。RT-PCR检测棕色化标志基因,筛选亮氨酸诱导脂肪细胞棕色化的浓度,后续试验分为对照组(CON)和最佳浓度亮氨酸添加组(Leu)(n=6)。RT-PCR检测线粒体生物合成关键基因表达、mtDNA拷贝数以及脂质代谢相关基因的表达,Western Blot检测棕色化关键蛋白以及信号通路蛋白表达。Mito-tracker Green染色和油红O染色分别检测细胞内线粒体含量和脂滴形态的变化。结果表明,成功分离得到黄牛皮下前体脂肪细胞并诱导为成熟脂肪细胞。4 mmol·L^(-1)亮氨酸显著提高脂肪细胞中棕色化标志因子UCP1、PRDM 16和TMEM 26的mRNA相对表达量,线粒体生物合成关键基因SIRT1、TFAM和NRF 1/2的mRNA相对表达量,上调关键蛋白UCP1、CD137和SIRT1的表达量(P<0.01)。亮氨酸显著提高细胞中mtDNA拷贝数和线粒体含量(P<0.01),降低细胞内ATP含量(P<0.05),促使细胞脂滴由单房大脂滴向多房小脂滴转变,并降低细胞内甘油三酯的含量(P<0.01)。亮氨酸抑制脂肪合成基因ACC、FAS表达,促进脂肪分解基因ATGL、HSL和脂肪酸β氧化基因PPARα、CPT1、ACOX表达(P<0.01)。添加亮氨酸极显著上调p-AMPKα/AMPKα和PGC1α的蛋白表达量(P<0.01)。综上所述,亮氨酸能促进黄牛脂肪细胞棕色化和线粒体生物合成,促进脂肪分解抑制脂肪合成,减少细胞内脂质沉积,并上调p-AMPKα/AMPKα和PGC1α的蛋白表达量。
关键词
亮氨酸
黄牛
原代脂肪细胞
棕色化
线粒体生物合成
Keywords
leucine
yellow cattle
primary adipocytes
browning
mitochondrial biosynthesis
分类号
S823.81 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
LPS对牦牛瘤胃上皮细胞补体C3激活和ATP生成代谢的影响
被引量：
1
2
作者
张祺琪
王俊梅
岳子奇
郭逸芯
施丽媛
张晓红
邹华围
彭全辉
薛白
王立志
王之盛
胡瑞
机构
四川农业大学动物营养研究所、肉用牛低碳养殖创新团队、四川省牛低碳养殖与安全生产高校重点实验室
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第11期4664-4675,共12页
基金
国家自然科学基金(32002201)
财政部和农业农村部:国家现代农业(肉牛牦牛)产业技术体系(CARS-37)。
文摘
旨在通过脂多糖(LPS)诱导牦牛瘤胃上皮细胞建立炎症模型,考察瘤胃上皮细胞作为非免疫细胞是否存在细胞内补体C3激活,及其对细胞三磷酸腺苷(ATP)生成的影响,为瘤胃健康营养调控技术提供试验依据。用不同浓度的LPS处理牦牛瘤胃上皮细胞系,采用CCK-8法测定细胞活力;ELISA试剂盒测定细胞内补体C3激活产物C3a、C3b浓度以及培养基中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度;化学法检测细胞内ATP浓度,线粒体红色荧光探针和流式细胞仪检测线粒体数量及膜电位;qPCR检测细胞IL-1β、IL-6、TNF-α,补体C3及其激活关键酶组织蛋白酶B(CTSB)和组织蛋白酶L(CTSL),以及ATP合成酶亚基(ATP 5A和ATP 5C1)等基因相对表达量。结果发现:1)不同浓度LPS处理后,牦牛瘤胃上皮细胞活力极显著下调(P<0.01),TNF-α、IL-1β和IL-6等促炎因子的基因表达量和浓度极显著上调(P<0.01),在LPS浓度为10μg·mL^(-1)时,牦牛瘤胃上皮细胞炎症模型构建成功;2)炎症下,牦牛瘤胃上皮细胞内补体C3及其激活关键酶CTSB的基因表达量极显著升高(P<0.01),激活产物补体片段C3a和C3b浓度极显著升高(P<0.01);3)炎症下,牦牛瘤胃上皮细胞ATP含量极显著下降(P<0.01),线粒体膜电位显著降低(P<0.05),ATP合成酶亚基ATP 5A和ATP 5C1的基因表达量随着LPS处理浓度升高显著下调(P<0.01)。综上,利用LPS诱导建立了牦牛瘤胃上皮细胞炎症模型。在LPS刺激下,牦牛瘤胃上皮细胞可发生细胞内补体C3激活过程,并抑制线粒体ATP合成酶亚基ATP 5A、ATP 5C1和有氧呼吸关键酶ME 1的基因表达,线粒体膜电位降低,抑制ATP生成。因此,LPS诱导炎症可抑制瘤胃上皮细胞ATP生成,从而导致瘤胃健康问题。
关键词
牦牛
瘤胃上皮细胞
免疫炎症
补体C3
ATP
Keywords
yak
rumen epithelial cells
immune inflammation
complement C3
ATP
分类号
S856.4 [农业科学—临床兽医学]
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1
亮氨酸对黄牛皮下脂肪细胞棕色化的影响
郭逸芯
王之盛
胡瑞
王俊梅
王森
施丽媛
张晓红
邹华围
左家学
彭全辉
薛白
王立志
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
LPS对牦牛瘤胃上皮细胞补体C3激活和ATP生成代谢的影响
张祺琪
王俊梅
岳子奇
郭逸芯
施丽媛
张晓红
邹华围
彭全辉
薛白
王立志
王之盛
胡瑞
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
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