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抗CMTM4多克隆抗体的制备、纯化和鉴定
被引量：
11
1
作者
李婷
郭晓欢
+5 位作者
王彧
Markus Plate
邵陆宁
宋泉声
马大龙
韩文玲
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第1期41-44,共4页
目的:制备抗CMTM4的多肽抗体并鉴定其性能。方法:通过TMHMM、DNAStar等软件对CMTM4的3种剪接体,CMTM4-v1,v2和v3的蛋白序列进行分析,选取了4段序列合成多肽并与钥孔戚血蓝素(KLH)偶联。其中第1、2、3条多肽为3种剪接体共有,混合后免疫家...
目的:制备抗CMTM4的多肽抗体并鉴定其性能。方法:通过TMHMM、DNAStar等软件对CMTM4的3种剪接体,CMTM4-v1,v2和v3的蛋白序列进行分析,选取了4段序列合成多肽并与钥孔戚血蓝素(KLH)偶联。其中第1、2、3条多肽为3种剪接体共有,混合后免疫家兔,制备Ab1;而第4条多肽为CMTM4-v1所特有,单独免疫家兔,制备Ab2。ELISA法检测抗体效价。免疫亲和层析法纯化后,进行West-ern blot和免疫组织化学检测,鉴定这2种抗体的特异性与适用范围。结果:得到兔抗人CMTM4多肽抗体Ab1和Ab2,效价分别达1∶105和1∶106。纯化后的Ab1用于Western blot可特异识别超表达的CMTM4-v1和v2,并可用于免疫组织化学实验;而Ab2仅可用于Western blot,特异性识别超表达的CMTM4-v1。Ab1还可特异识别小鼠内源性Cmtm4。结论:用多肽免疫家兔制备的2种抗CMTM4抗体不仅具有较高的效价以及特异性,并且Ab1还可以特异识别小鼠Cmtm4,为CMTM4的功能研究提供了有力的支持。
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关键词
CMTM4
多肽抗体
免疫亲和纯化
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职称材料
鼠抗人CMTM7单克隆抗体的制备和鉴定
被引量：
1
2
作者
许兰俊
张婷
+3 位作者
邵陆宁
宋泉声
韩文玲
陈英玉
《北京大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第3期236-240,共5页
目的：制备鼠抗人CMTM7（CKLF-like MARVEL transmembrane domain containing 7）蛋白的单克隆抗体，探讨CMTM7蛋白的分子结构和生物学功能。方法：通过生物信息学对CMTM7的蛋白序列进行分析，选取了3段序列合成多肽并与钥孔戚血蓝素（k...
目的：制备鼠抗人CMTM7（CKLF-like MARVEL transmembrane domain containing 7）蛋白的单克隆抗体，探讨CMTM7蛋白的分子结构和生物学功能。方法：通过生物信息学对CMTM7的蛋白序列进行分析，选取了3段序列合成多肽并与钥孔戚血蓝素（keyhole limpet hemocyanin，KLH）偶联，混合后免疫Balb／c小鼠。取免疫小鼠的脾细胞和同系小鼠的骨髓瘤细胞SP2／0进行常规融合，间接ELISA方法进行筛选和有限稀释克隆化，获得鼠抗CMTM7蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，用Westernblot、免疫荧光以及免疫细胞化学等方法对其特性进行鉴定。结果：成功地建立了2株稳定分泌抗CMTM7蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株，分别命名为MC9和2C9，其免疫球蛋白亚类均为IgG1。MC9单抗识别的抗原表位位于CMTM7氨基酸残基163～175区域（CMTM7163-175），可用于Western blot、免疫荧光和免疫细胞化学分析（immunocytochemistry，ICC）。2C9单抗识别的抗原表位位于CMTM7氨基酸残基19～44区域（CMTM719-44），该单抗只能用于Westernblot分析。初步的功能研究提示，CMTM7蛋白在植物血凝素（phytohemagglutinin，PHA）活化早期的外周血淋巴细胞中表达上调。结论：获得了特异性好、能够识别不同抗原表位以及不同用途的鼠抗人CMTM7蛋白的单克隆抗体，为研究CMTM7蛋白的分子结构以及功能特性奠定了基础。
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关键词
趋化因子类
CMTM7
抗体
单克隆
肽类
杂交瘤
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职称材料
题名
抗CMTM4多克隆抗体的制备、纯化和鉴定
被引量：
11
1
作者
李婷
郭晓欢
王彧
Markus Plate
邵陆宁
宋泉声
马大龙
韩文玲
机构
北京大学人类疾病基因研究中心北京大学基础医学院免疫学系
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第1期41-44,共4页
基金
高等学校全国优秀博士论文作者专项资金资助(200257)
国家自然科学基金资助项目(30571691)
国家高技术研究发展计划(863)资助项目(2006AA02A305)
文摘
目的:制备抗CMTM4的多肽抗体并鉴定其性能。方法:通过TMHMM、DNAStar等软件对CMTM4的3种剪接体,CMTM4-v1,v2和v3的蛋白序列进行分析,选取了4段序列合成多肽并与钥孔戚血蓝素(KLH)偶联。其中第1、2、3条多肽为3种剪接体共有,混合后免疫家兔,制备Ab1;而第4条多肽为CMTM4-v1所特有,单独免疫家兔,制备Ab2。ELISA法检测抗体效价。免疫亲和层析法纯化后,进行West-ern blot和免疫组织化学检测,鉴定这2种抗体的特异性与适用范围。结果:得到兔抗人CMTM4多肽抗体Ab1和Ab2,效价分别达1∶105和1∶106。纯化后的Ab1用于Western blot可特异识别超表达的CMTM4-v1和v2,并可用于免疫组织化学实验;而Ab2仅可用于Western blot,特异性识别超表达的CMTM4-v1。Ab1还可特异识别小鼠内源性Cmtm4。结论:用多肽免疫家兔制备的2种抗CMTM4抗体不仅具有较高的效价以及特异性,并且Ab1还可以特异识别小鼠Cmtm4,为CMTM4的功能研究提供了有力的支持。
关键词
CMTM4
多肽抗体
免疫亲和纯化
Keywords
CMTM4
Anti-peptide antibody
Immunoaffinity chromatography purification
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
R392-33 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
鼠抗人CMTM7单克隆抗体的制备和鉴定
被引量：
1
2
作者
许兰俊
张婷
邵陆宁
宋泉声
韩文玲
陈英玉
机构
北京大学基础医学院免疫学系
北京大学人类疾病基因研究中心
出处
《北京大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第3期236-240,共5页
基金
国家高技术研究发展计划专项经费(2006AA02A305)资助~~
文摘
目的：制备鼠抗人CMTM7（CKLF-like MARVEL transmembrane domain containing 7）蛋白的单克隆抗体，探讨CMTM7蛋白的分子结构和生物学功能。方法：通过生物信息学对CMTM7的蛋白序列进行分析，选取了3段序列合成多肽并与钥孔戚血蓝素（keyhole limpet hemocyanin，KLH）偶联，混合后免疫Balb／c小鼠。取免疫小鼠的脾细胞和同系小鼠的骨髓瘤细胞SP2／0进行常规融合，间接ELISA方法进行筛选和有限稀释克隆化，获得鼠抗CMTM7蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，用Westernblot、免疫荧光以及免疫细胞化学等方法对其特性进行鉴定。结果：成功地建立了2株稳定分泌抗CMTM7蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株，分别命名为MC9和2C9，其免疫球蛋白亚类均为IgG1。MC9单抗识别的抗原表位位于CMTM7氨基酸残基163～175区域（CMTM7163-175），可用于Western blot、免疫荧光和免疫细胞化学分析（immunocytochemistry，ICC）。2C9单抗识别的抗原表位位于CMTM7氨基酸残基19～44区域（CMTM719-44），该单抗只能用于Westernblot分析。初步的功能研究提示，CMTM7蛋白在植物血凝素（phytohemagglutinin，PHA）活化早期的外周血淋巴细胞中表达上调。结论：获得了特异性好、能够识别不同抗原表位以及不同用途的鼠抗人CMTM7蛋白的单克隆抗体，为研究CMTM7蛋白的分子结构以及功能特性奠定了基础。
关键词
趋化因子类
CMTM7
抗体
单克隆
肽类
杂交瘤
Keywords
Chemotactic factors
CMTM7
Antibodies, monoclonal
Peptides
Hybridomas
分类号
R392.1 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
抗CMTM4多克隆抗体的制备、纯化和鉴定
李婷
郭晓欢
王彧
Markus Plate
邵陆宁
宋泉声
马大龙
韩文玲
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008
11
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职称材料
2
鼠抗人CMTM7单克隆抗体的制备和鉴定
许兰俊
张婷
邵陆宁
宋泉声
韩文玲
陈英玉
《北京大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2008
1
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