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限制性内切酶NcoⅠ的高效重组表达、硒代与结晶条件初步筛选
被引量：
2
1
作者
程艺
马超
+5 位作者
陈晓雨
邵钰晨
王潇
杨雪丽
苏蓉
李婷婷
《食品与生物技术学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第7期81-88,共8页
来源于珊瑚诺卡氏菌Nocardia corallina的限制性内切酶NcoⅠ是基因工程中常用的工具酶之一。然而目前NcoⅠ蛋白质三维结构尚未被解析,对其基因改造缺乏理论指导。为了解析NcoⅠ的三维结构,采用大肠杆菌表达系统,高效重组表达和纯化,获...
来源于珊瑚诺卡氏菌Nocardia corallina的限制性内切酶NcoⅠ是基因工程中常用的工具酶之一。然而目前NcoⅠ蛋白质三维结构尚未被解析,对其基因改造缺乏理论指导。为了解析NcoⅠ的三维结构,采用大肠杆菌表达系统,高效重组表达和纯化,获得了纯度>95%的NcoⅠ野生型和Se-NcoⅠ硒代蛋白。质谱分析表明,重组Se-NcoⅠ蛋白中所有硫原子成功被硒原子取代。酶切实验表明,硒代蛋白与野生型具有相似的限制酶活性。采用坐滴法筛选重组NcoⅠ蛋白结晶条件,已在3种条件下获得针状晶体,1种条件下获得颗粒状晶体。X射线衍射初步分析晶体分辨率在0.8 nm左右,为下一步解析NcoⅠ三维结构提供了基础。
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关键词
限制性内切酶
NcoⅠ
表达纯化
硒代
结晶
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职称材料
一种快速精确测定Tth DNA聚合酶活性的方法
2
作者
陈晓雨
张建
+4 位作者
张新亚
唐雨婷
邵钰晨
罗志丹
卢辰
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第5期281-286,共6页
Tth DNA聚合酶是一种同时具备DNA聚合酶和逆转录酶活性的耐热型工具酶,但在生产和改造过程中,缺乏准确、快速、简便测定酶活的方法。利用高灵敏度双链特异性核酸染料PicoGreen和特殊设计的发夹型探针,建立了一种测定Tth DNA聚合酶活性...
Tth DNA聚合酶是一种同时具备DNA聚合酶和逆转录酶活性的耐热型工具酶,但在生产和改造过程中,缺乏准确、快速、简便测定酶活的方法。利用高灵敏度双链特异性核酸染料PicoGreen和特殊设计的发夹型探针,建立了一种测定Tth DNA聚合酶活性的新方法。该方法的标准曲线线性关系良好,决定系数R^(2)达到0.99以上,灵敏度和准确度高,操作简单,测定结果与商业化产品标定的活力相符,经荧光定量PCR验证能够反映真实使用环境下的酶活。该方法还可推广到测定其他DNA聚合酶活性,将为DNA聚合酶的生产和改造提供有效的检测手段。
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关键词
Tth
DNA聚合酶
酶活性测定
荧光染料
发夹型探针
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职称材料
题名
限制性内切酶NcoⅠ的高效重组表达、硒代与结晶条件初步筛选
被引量：
2
1
作者
程艺
马超
陈晓雨
邵钰晨
王潇
杨雪丽
苏蓉
李婷婷
机构
江苏海洋大学江苏省海洋药物活性分子筛选重点实验室
江苏省海洋生物产业技术协同创新中心
出处
《食品与生物技术学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第7期81-88,共8页
基金
江苏省高等学校自然科学研究面上项目(19KJB210008)。
文摘
来源于珊瑚诺卡氏菌Nocardia corallina的限制性内切酶NcoⅠ是基因工程中常用的工具酶之一。然而目前NcoⅠ蛋白质三维结构尚未被解析,对其基因改造缺乏理论指导。为了解析NcoⅠ的三维结构,采用大肠杆菌表达系统,高效重组表达和纯化,获得了纯度>95%的NcoⅠ野生型和Se-NcoⅠ硒代蛋白。质谱分析表明,重组Se-NcoⅠ蛋白中所有硫原子成功被硒原子取代。酶切实验表明,硒代蛋白与野生型具有相似的限制酶活性。采用坐滴法筛选重组NcoⅠ蛋白结晶条件,已在3种条件下获得针状晶体,1种条件下获得颗粒状晶体。X射线衍射初步分析晶体分辨率在0.8 nm左右,为下一步解析NcoⅠ三维结构提供了基础。
关键词
限制性内切酶
NcoⅠ
表达纯化
硒代
结晶
Keywords
restriction endonuclease
NcoⅠ
expression and purification
selenoprotein
crystallization
分类号
Q819 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
一种快速精确测定Tth DNA聚合酶活性的方法
2
作者
陈晓雨
张建
张新亚
唐雨婷
邵钰晨
罗志丹
卢辰
机构
江苏海洋大学江苏省海洋药物活性分子筛选重点实验室
江苏省海洋资源开发研究院(连云港)
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第5期281-286,共6页
基金
江苏高校优势学科建设工程三期项目
连云港市新冠肺炎防治应急专项(SF2006)
江苏省研究生科研与实践创新计划项目(KYCX20_2893)。
文摘
Tth DNA聚合酶是一种同时具备DNA聚合酶和逆转录酶活性的耐热型工具酶,但在生产和改造过程中,缺乏准确、快速、简便测定酶活的方法。利用高灵敏度双链特异性核酸染料PicoGreen和特殊设计的发夹型探针,建立了一种测定Tth DNA聚合酶活性的新方法。该方法的标准曲线线性关系良好,决定系数R^(2)达到0.99以上,灵敏度和准确度高,操作简单,测定结果与商业化产品标定的活力相符,经荧光定量PCR验证能够反映真实使用环境下的酶活。该方法还可推广到测定其他DNA聚合酶活性,将为DNA聚合酶的生产和改造提供有效的检测手段。
关键词
Tth
DNA聚合酶
酶活性测定
荧光染料
发夹型探针
Keywords
Tth DNA polymerase
enzyme activity assay
fluorescence dye
hairpin probe
分类号
Q55 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
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1
限制性内切酶NcoⅠ的高效重组表达、硒代与结晶条件初步筛选
程艺
马超
陈晓雨
邵钰晨
王潇
杨雪丽
苏蓉
李婷婷
《食品与生物技术学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
一种快速精确测定Tth DNA聚合酶活性的方法
陈晓雨
张建
张新亚
唐雨婷
邵钰晨
罗志丹
卢辰
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2021
0
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职称材料
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